Фосфоцеллюлоза

Фосфоцеллюлоза Целлюлоза Ф (Р) Целлюлоза фосфорилированная [c.536]

Последние годы отмечены повышенным интересом к ферментам, взаимодействующим с ДНК. Большинство из них — белки основного характера, и их удобнее очищать на катионообменниках чаще всего для этой цели используют фосфоцеллюлозу. [c.304]

Кроме того, эта фирма выпускает сильный катионообменник Р-11 — фосфоцеллюлозу, которая поставляется в сухом виде. Степень набухания — 5 мл/г. Емкость — 0,75 мэкв/мл при pH < 7 и 1,5 мэкв/мл в щелочной области (из-за диссоциации второго протона остатка фосфорной кислоты). Фирма отмечает, что эфирная связь фосфата с матрицей не очень прочна, поэтому обменник не рекомендуется подвергать воздействию сильных кислот и щелочей предпочтительно использовать его однократно. [c.271]

Элюция фермента. Фосфоцеллюлозу помещают в колонку диаметром 7,5 см, высота слоя ионообменника — 8 см. Для элюции использу- [c.236]

Ф-Целлюлоза Фосфоцеллюлоза Двухосновная кислота. рК 1,5 6. [c.436]

ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ БЕЛКОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ НА КОЛОНКЕ С ФОСФОЦЕЛЛЮЛОЗОЙ [c.214]

Р-целлюлоза Фосфоцеллюлоза Катионообменная хромато- [c.239]

Фракционирование пептидов на фосфоцеллюлозе [c.411]

Фосфоцеллюлоза—катионит с высоким содержанием фосфатных группировок — обладает достаточно большой емкостью [c.411]

Рис. 34.14. Кривые потенциометрического титрования фосфоцеллюлозы (ватман 525).

Полезным свойством фосфоцеллюлозы является также ее устойчивость к элюентам. В то же время известно, что фракции с высоким содержанием пиридина, полученные при хроматографировании на смоле дауэкс-50, содержат небольшое количество растворенной смолы. Эти примеси можно легко удалить хроматографированием на фосфоцеллюлозе. [c.413]

Если хроматографию проводят в градиенте ионной силы, то в начале крутого градиента происходит временное падение pH элюента. Этот дрейф pH особенно характерен для фосфоцеллюлозы вследствие низкой емкости как применяемых буферных растворов, так и самого ионита. Интересно, что это явление практически не влияет на разрешение. Типичные примеры разделения на фосфоцеллюлозе приведены на рис. 34.15 условия эксперимента приведены в табл. 34.1. [c.413]

П р и м е р 5. Очистка ДНК-полимеразы I из Е. oli [Rhodes et al., 1979]. На первых этапах здесь использовали грубую очистку осаждением полиэтиленимином и сульфатом аммония. Затем следовал этап хроматографической очистки на колонке фосфоцеллюлозы, уравновешенной 0,04 М К-фосфатным буфером (pH 6,9) с обычными добавками, включая 5% глицерина. Введение глицерина продиктовано лабильностью фермента — его активность снижается вдвое за сутки. Препарат вносили в том же буфере, им же промывали колонку, а затем вели элюцию линейным градиентом концентрации этого буфера (0,04—0,3 М). Таким образом, вытесняющий белок контрион (К+) поставлялся самим буфером. [c.304]

Очень похожий вариант очистки того же белка был независимо отработан в другой работе, где на первом этапе динамической хроматографии на DEAE-целлюлозе осуществляли элюцию ступенчатым градиентом 0,05—0,1—0,22 М КС при pH 7,4, а на втором — использовали колонку фосфоцеллюлозы, откуда eIF-2 элюировали линейным градиентом 0,4—0,7 М КС1 при pH 7,8. Некоторый сдвиг диапазона концентраций соли к большим значениям и увеличение pH связаны, очевидно, с тем обстоятельством, что фосфоцеллюлоза является более сильным катионообменником, чем карбоксиметил-целлюлоза [Kaempfer et al., 1979]. [c.307]

На первый взгляд условия элюции с обменников обоих типов очень похожи, хотя сродство белка к анионообменннкам, по-видимому, несколько больше, чем к фосфоцеллюлозе. Однако более внимательное рассмотрение условий хроматографии обнаруживает еще одно (в данном случае — важное) отличие. В состав обычных стабилизирующих добавок для обоих анионообменников входили, помимо глицерина, 5 мМ Mg la, 10 мМ -меркаптоэтанола, 1 мМ [c.307]

Хроматография на фосфоцеллюлозе. Подготовленную для работы фосфоцеллюлозу (циклизацию проводят, как указано на с. 109) уравновешивают буфером А и добавляют к раствору белка (примерно 20 г сухой фосфоцеллюлозы на раствор белка, полученный из 200 г мышц). Смесь перемешивают 20 мин, затем переносят на воронку Бухнера и фильтруют под небольшим давлением. Фосфоцеллюлозу отмывают от несвязавшегося белка буфером А (примерно 5 л) до тех пор, пока оптическая плотность элюата при 280 нм будет равна 0,01. После этого фосфоцеллюлозу суспендируют в 1 л буфера Б и pH осторожно доводят до 7,2 NaOH. Этим же буфером вновь отмывают фосфоцеллюлозу от несвязавшихся белков (примерно 7 л). [c.236]

Примечание. Так как препараты фосфоцеллюлозы отличаются между собой, целесообразно предварительно установить количество ионообменника, необходимое для связывания фермента. Берут (в расчете на сухой вес) 5 г фосфоцеллюлозы, уравновешенной буфером А, и добавляют определенную порцию раствора белка. В элюате определяют активность глюкозофосфатизомеразы. Последующие порции белка добавляют до полного насыщения ионообменника ферментом. На основе этих данных рассчитывают количество фосфоцеллюлозы, требующееся для связывания всего фермента. Суспензию перемешивают 30—40 мин, после чего в элюате определяют ферментативную активность, чтобы убедиться в полноте адсорбции фермента. [c.237]

Для решения тех же задач и в тех же областях исследования можно применять катионообменную хроматографию, в которой чаще всего используют фосфоцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу и кар бо ксиметил -сефадекс. [c.23]

В качестве ионитов чаще всего используют материалы на гидрофильной основе — целлюлозе, декстране, силикагеле или пористых стеклах. Эти материалы превращаются в производные, несущие положительно заряженные анионообменные группы или отрицательно заряженные катионообменные группы. Так, на основе целлюлозы путем соответствующих химических обработок получают ди-этиламиноэтилцеллюлозу (ДЭАЭ-целлюлозу) и фосфоцеллюлозу, функциональные группы которых связаны через гидроксигруппы с остатками глюкозы [c.235]

При фракционировании белков обычно применяют иониты, содержащие карбоксиметильную и диэтиламиноэтильную функциональные группировки, однако эти иониты не вполне подходят для разделения пептидов. Как правило, почти все кислотные пептиды адсорбируются на катионите при pH 3,0—3,5 в буфер ном растворе с низкой ионной силой, откуда могут быть элюи рованы при рн 6—9 и при более высокой ионной силе. Карбо ксилсодержащие иониты слабо диссоциированы при pH 3, и следовательно, обладают пониженной емкостью. Кроме того в разбавленных электролитах, т. е. в условиях проведения сорб ции, слишком велика буферная емкость ионита. Скачкообразное изменение pH элюента приводит на практике к одновременному элюированию группы пептидов. Аналогичные недостатки свойственны ионитам с ВЕАЕ-группой, особенно при работе с летучими буферными растворами. Изменение ионной силы и значения pH во время элюирования вызывает сжатие столбика сорбента, нарушение скорости потока и искажение профиля элюирования. В наибольшей степени этот эффект выражен у ионитов на основе слабосшитых гелей, однако в какой-то степени это свойство характерно и для модифицированных целлюлоз. И тем не менее некоторые типы ионитов на основе целлюлозы находят применение для разделения небольших пептидов. К ним относятся фосфоцеллюлоза, ЗЕ-целлюлоза, 8Р-целлюлоза и РАЕ-сефадекс. [c.411]

На фосфоцеллюлозе успешно разделяли пептиды из пептического и химотриптического гидролизатов лизоцима куриного яйца. Хроматографию проводили в градиенте pH и ионной силы летучих буферных растворов [38]. [c.412]

Триптические пептиды а-и р-цепей гемоглобина хроматографировали в градиенте пиридин-ацетатных буферов [39]. При этом хроматографическое поведение пептидов в целом напоминало их поведение при разделении на смоле дауэкс-50, хотя в профилях элюирования наблюдались несомненные различия. Поэтому те пептиды, которые элюируются на смоле дауэкс-50 в одной зоне, можно разделить на фосфоцеллюлозе, и наоборот. На основании этой работы можно сделать определенные выводы относительно связи между хроматографическим поведением и структурой пептидов. За редким исключением, более длинные, отрицательно заряженные пептиды элюируются в меньшем объеме по сравнению с короткими, положительно заряженными пептидами. Пептиды, содержащие более шести аминокислотных остатков и несущие слабый отрицательный заряд (—2), элюируются при рН<4,7 короткие пептиды, включающие менее семи остатков и в целом заряженные положительно, элюируются при рн > 4,7. В работах [38, 39] отмечено также удерживание фосфоцеллюлозой гистидинсодержащих пептидов. [c.412]

Хроматографию на фосфоцеллюлозе широко применяли при разделении крупных фрагментов коллагенов, образующихся при действии бромциана [40]. Колонку (2,5x20 см) уравновешивали 0,001 М раствором ацетата натрия с pH 3,8. Элюирование [c.413]

Состав буферных растворов, применяемых при хроматографии на колонке (2,4x25 см) с фосфоцеллюлозой с использованием 4- и 8-камерных смесителей системы Varigrad [38] [c.414]

Этот новейший метод нашел применение при выделении панкреатической рибонуклеазы цыпленка на фосфоцеллюлозе [35] и фруктозо-1,6-дифосфатазы печени кролика на карбоксиме-тилцеллюлозе [36]. Эффективность этого метода видна из следующего примера при очистке глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы путем элирования фермента с СМ-сефадекса 2 мМ раствором глюкозо-6-фосфата выход фермента составил 91%, а удельная активность увеличилась в 51 раз [37]. [c.10]

Рекомендуют использовать ионит IV (Merk) [37], сочетание дауэкса с амберлитом [52], а также дауэкс 50W-X8 [51, 53]. При исследовании метаболизма пиридоксола (у крыс) использовали фосфоцеллюлозу, активированный уголь, DEAE-целлюлозу [54]. [c.191]

Для разделения смесей птеридиновых производных обычно используют колонки с ионообменной целлюлозой. Колонки с фосфоцеллюлозой используют главным образом при получении синтетических смесей птеридинов [69 —72], а также при выделении соединений этого, типа из биологических материалов [73, 74]. Для выделения птеридинов из природных материалов используют ОЕАЕ-целлюлозу [42, 69, 75—78], дауэкс 1-Х2 [79] и дауэкс [c.195]

Смотреть страницы где упоминается термин Фосфоцеллюлоза: [c.131] [c.508] [c.233] [c.234] [c.271] [c.278] [c.299] [c.304] [c.307] [c.308] [c.308] [c.309] [c.310] [c.432] [c.452] [c.170] [c.412] [c.413] [c.432] [c.196] [c.196] [c.196]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология