Молекулярные массы субъединиц

Белки, обработанные концентрированным раствором додецилсуль-фата натрия в присутствии р-меркаптоэтанола, распадаются на отдельные полипептидные цепи и приобретают отрицательный заряд, значительно превышающий собственный заряд белковой молекулы. При последующем разделении с помощью диск-электрофореза в полиакриламидном геле белковые зоны распределяются на электрофореграммах таким образом, что подвижность белковой зоны обратно пропорциональна логарифму молекулярной массы. Метод дает возможность определять молекулярные массы субъединиц олигомерных белков. Электрофоретическое разделение можно проводить различными методами. Ниже описаны два из них метод Вебера и Осборн, а также метод, предложенный Лэммли. [c.119]

Большое значение при доказательстве и определении молекулярной массы субъединиц имеют ультрацентрифугирование, ДСН-электрофорез в полиакриламиде, гель-фильтрация и другие уже рассмотренные ранее методы (разд. 3.5.4). В этой связи надо упомянуть, что в условиях диссоциации не только регуляторные, но и каталитические функции ферментов сильно повреждаются или совершенно теряются. [c.388]

Концентрацию киназы фосфорилазы следует подобрать так, чтобы не более 20% добавленной фосфорилазы Ь превращалось в фосфорилазу й за 5 мин. Одна единица активности — это количество фермента, катализирующего превращение 1 мкмоль фосфорилазы Ь в фосфорилазу а в 1 мин при 30° С, pH 8,2. Для расчета учитывают молекулярную массу субъединицы фосфорилазы, равную 97 400 Да удельную активность фосфорилазы а в отсутствие АМФ принимают за 70% от активности фосфорилазы Ь, измеренной в присутствии АМФ. [c.224]

При использовании диск-электрофореза в полиакриламидном геле для определения молекулярной массы белков также строят график зависимости между логарифмом молекулярной массы калибровочных белков и подвижностью белковых частиц в полиакриламидном геле, а затем, определив подвижность исследуемого белка, по графику находят его массу (рис. 1.11). Электрофорез проводят в присутствии детергента додецилсульфата натрия, так как только в этом случае наблюдается прямая пропорциональная зависимость между молекулярной массой и подвижностью белков. Белки с четвертичной структурой при этих условиях распадаются на субъединицы, поэтому метод находит широкое применение для определения молекулярной массы субъединиц белка. [c.46]

Синтез природных антител - это настоящее чудо. Антитело - очень сложная тетрамерная конструкция, состоящая из двух пар разных цепей. Одна из них называется тяжелой (Н), а другая - легкой X или к). Эти термины отражают различия в молекулярных массах субъединиц антитела. Генетические особенности каждой тяжелой цепи определяются комбинацией вариабельного (Vjj), дивергентного (Dp ), шарнирного (Тд) и константного (С ) участков (доменов) соматической ДНК в В-клетке. Известны два типа легких цепей, X и к, которые образуются в результате перестройки их собственных вариабельных (УХ, Vk), шарнирных (JX, Jk) и константных (С , Ск) доменов. Данная В-клетка синтезирует один вид антител, с уникальной комбинацией участков, составляющих Н-цепь, и либо перестроенной X-, либо к-цепью. [c.429]

В скелетной мускулатуре фосфорилаза находится в двух формах Ь и а. Активность фосфорилазы Ь можно определить только в присутствии АМФ фосфорилаза а активна в отсутствие АМФ. Для обеих форм фермента АМФ является положительным аллостерическим эффектором. Молекула фосфорилазы Ь представляет собой димер, фосфорилазы а — тетрамер. Молекулярная масса субъединицы фермента равна 97 400 Да. Обе формы фермента могут находиться в состоянии равновесия между димерными и тетрамерпыми молекулами. На переход димеров в тетрамеры и обратно оказывают влияние компоненты ферментативной реакции, активаторы, ингибиторы, а также pH, ионная сила раствора, температура и др. Наиболее активными являются димеры обеих форм. Взаимопревращение фосфорилазы Ь и фосфорилазы а осуществляется ферментативно с помощью киназы фосфорила- [c.219]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНОЙ МАССЫ СУБЪЕДИНИЦ [c.219]

Непосредственный переход от молекулярной массы полипептидной цепи к молекулярной массе субъединицы не всегда прост. Если существуют цепи только одного типа. [c.130]

Сравнительно недавно была выделена и исследована экстра-целлюлярная форма супероксиддисмутазы [270—273]. Экстра-целлюлярная СОД является основным изоферментом в плазме, лимфе и синовиальной жидкости и представляет собой гликопротеид, состоящий из 4 субъединиц. Каждая субъединица имеет молекулярную массу около 30 кДа и содержит ионы меди и цинка. Кроме более высокой молекулярной массы, субъединица экстра-целлюлярной СОД отличается от субъединицы цитоплазматической Си-, гп-СОД аминокислотным составом, антигенными свойствами и генным локусом, кодирующим аминокислотную последовательность апофермента. Каталитическая активность экстра-целлюлярной СОД значительно ниже, чем у цитоплазматического фермента. [c.37]

Тонкое строение жгутиков. Жгутики представляют собой спирально закрученные нити. У разных бактерий они различаются по своей толщине (12-18 нм), длине (до 20 мкм), а также по длине и амплитуде витка. Эти параметры характерны для каждого вида. У некоторых бактерий могут образовываться жгутики разных типов. Нити жгутиков состоят из специфического белка флагеллина.. Они построены из субъединиц с относительно малой молекулярной массой. Субъединицы располагаются по спирали вокруг внутреннего свободного пространства (подобно белковым молекулам в вирусе табачной мозаики см. разд. 4.1). Таким образом, структура жгутика определяется свойствами белковых субъединиц. [c.67]

Реакция протекает с выделением энергии (ЛС = —7,5 ккал/моль). В тканях млекопитающих известны три изозима пируваткиназы, каждый состоит из четырех идентичных субъединиц. Изозимы имеют молекулярную массу от 200 000 до 250 000 Да молекулярная масса субъединицы — от 50000 до 61 000 Да. Фермент характеризуется высокой специфичностью по отнощению к фосфоенолпирувату, менее специфичен к нуклеотидному субстрату. Пируваткиназа относится к группе аллостерических ферментов. Изозимы пируваткиназы отличаются своими регуляторными свойствами. Ферментативная реакция, катализируемая высокоочищенной пируваткиназой из скелетных [c.269]

Электрофорез проводят в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН). Таким путем можно определить молекулярные массы субъединиц олигомерных белков [74 — 76]. Молекулы ДСН образуют за счет гидрофобного взаимодействия комплексы с полипептндными цепями, характеризующиеся постоянным отношением ДСН белок. Тогда электрофоретическую поднижность можно выразить как функцию молекулярной массы и сравнить с подвижностью стандартного белка. Метод отличается высоко скоростью (2 — 4 ч) и требует для одного определения, как правило, лишь 10 — 50 мкг белка. В последнее время ДСН-электрофорез проводят также на стеклянных шариках с контролируемым размером пор (120 — 200 нм). Комплекс ДСН — белок не адсорбируется на носителе, интервал определяемых молекулярных масс 3 500 — 12 ООО [77]. [c.362]

Проведен анализ некоторых субъединиц (табл. 6Б.14). Результаты, полученные Данно и др. [76], подтверждают различие субъединиц глютеинов по составу. По содержанию глицина, пролина, тирозина, фенилаланина и основных аминокислот субъединицы с молекулярной массой свыше 90 000 Да можно отличить от других. Среди субъединиц с более высокой молекулярной массой субъединица 95 000 Да превосходит другие по содержанию основных аминокислот. [c.206]

В клетках эукариотических организмов обнаружены четыре ДНК-полимеразы а, р, V и 6. ДН К-полимераза а считается основным ферментом ядерной репликации. Содержание этого фермента заметно возрастает во время S-фазы клеточного цикла, когда происходит активный синтез ДНК- Только эта ДНК-полимераза подавляется афидиколином — ингибитором синтеза ДНК эукариот. Фермент состоит из нескольких субъединиц разного размера. Например, у дрозофилы молекулярные массы субъединиц составляют 148, 58, 46 и 42 кД. Полимеразная активность присуща самой большой из субъединиц. Молекулярная масса нативной эукариотической ДНК-полимеразы а составляет около 500 кД. Так же как в случае ДНК-полимеразы IИ . o/ , эффективность и высокая процессивность работы полимеразы а зависят до дополнительных субъединиц, которые сами по себе полимеризующей активностью не обладают. Одна из субъединиц ДНК-полимеразы а оказалась ДНК-праймазой — ферментом, необходимым для инициации новых цепей ДНК (см. ниже) ассоциация с праймазой не характерна для ДНК-полимераз бактерий. [c.50]

По трудоемкости все эти процедуры, с одной стороны, и определение величины ф/<3с, с другой стороны, примерно одинаковы. Методы коррекции особенно ценны тем, что все они указывают на избирательное связывание с белко.м именно гуанидинхлорида, а не воды. Количество связанных молекул растворителя составляет от 0,01 до 0,17 г на 1 г белка. Возможно, впрочем, что этот разброс является в значительной мере результатом низкой точности измерений количества связанной воды. Значениями молекулярных масс субъединиц после внесения поправки часто пользуются как подходящими , поскольку, например, сумма молекулярных масс субъединиц обычно хорошо совпадает с молекулярной массой соответствующего интактного белка. В то же время важно знать, что, например, молекулярные массы субъединиц альдолазы (50 000), полученные таким путем, не согласуются с данными, полученными при помощи других методов, как показали Эдельштейн и Шахман. Кроме того, по тем же данным зто пока единственный белок, который избирательно связывает воду. Возможно, основное предположение, на котором базируется описанная выше экстраполяция по Эдельштейну и Шахману (а именно что на избирательное связывание не влияет сжимаемость гуанидинхлорида), неверно. Подробное обсуждение этого вопроса читатель найдет в работе [16]. [c.221]

Из симметрии дифрактограммы рентгеновских лучей [35, 36] получены доказательства существования субъединиц в апоферри-тине. Эти данные были подтверждены разрушением агрегатов до приблизительно 25 субъединиц [32, 43]. Молекулярная масса субъединиц, определенная рядом методов, равна приблизительно [c.304]

Пептидная фракция Молекулярная масса субъединицы Число молекул на клетку, X 10 Степень ассо1щации Функция Связь с белками [c.32]

Статистическая обработка данных для 500 белков показала, что наиболее вероятная область молекулярных масс мономеров приходится на 0 000—60 000 [63]. Действительно, молекулярные массы субъединиц более чем 7з изученных к настоящему времени белков располагаются в указанном диапазоне. Примерно 50% этих белков составляют димеры, 30% — тетрамеры, 8% — гексамеры. [c.26]

Белок Источник Молекулярная Число субъеди-масса белка ниц Молекулярная масса субъединиц [c.127]

Белок Молекулярная масса Субъединицы Изоэлектрнче- Специфичность Специфичность к пос- Длина Константа Коопера- [c.361]

I типа присутствует в нейронах мозга, и ее нередко называют нейрональной конститутивной синтетазой N0. Активность конститутивной NO-синтетазы наиболее высока в нейронах мозжечка и в астроглии. Этот фермент представляет собой гомодимер (состоит из двух одинаковых субъединиц) с молекулярной массой субъединицы 160 к Да и характеризуется обратимым связыванием с кальмодулином. Регуляция этого фермента осуществляется при [c.20]

Аминокислотный состав также может дать сведения о предполагаемой гетерогенности препарата, при условии, что точно определены количества двух или более аминокислот и известна молекулярная масса субъединиц фермента. Если молярное содержание этих аминокислот нельзя выразить простым отношением, связанным с размером данного полипептида, то, вероятно, это объясняется присутствием большого количества примеси. Например, если известно, что молекулярная масса полипептида близка к 30000 дальтон, а количества триптофана и тирозина, определенные спектрофотометрически [193], равны соответственно 5,1 и 6,5 остатка на 30 000, то либо эти определения недостаточно корректны, либо в препарате присутствует примесь, отличающаяся от основного компонента соотношением триптофана и тирозина. По очевидным причинам такие аргументы могут быть убедительными только в случае небольших по размерам полипептидов, причем отношение между количествами каких-либо двух аминокислот, равное целому числу, не служит доказательством гомогенности препарата. Эти расчеты становятся более ценными, когда имеются данные о гомогенности препарата, полученные другими методами, но точная молекулярная масса белка не известна. Тогда точное молярное отношение двух или более аминокислот дает возможность рассчитать молекулярную массу с некоторой достоверностью. [c.331]

Таким же методом (рис. 5.5), но с использованием в качестве злюента 6 М гуанидингидрохлорида, можно довольно быстро определять молекулярные массы субъединиц белков. В этом растворе молекулы белков полностью теряют свою конформацию (гл. 6), и, таким образом, форма молекул не влияет на правильность определения молекулярной массы, как это имеет место в случае гель-фильтрации нативных белков. Отметим, что, прежде чем приступать к анализу белка данным методом, следует восстановить ди-сульфидиые связи. [c.133]

Оказалось, что число субъединиц в эпимолекулах колеблется в очень широких пределах от 2 до 162. Наиболее часто в составе молекул-мультимеров насчитывается 2 или 4 протомера, гораздо реже—6, 8, 10, 12 или 24 и в редчайших случаях—их нечетное количество. Четвертичной структурой обладают в основном белки с молекулярной массой выше 50000—60000, а белки с меньшими молекулярными массами существуют, как правило, в виде мономеров. Критическим пределом молекулярной массы белковой молекулы, сверх которого белок в большинстве случаев обладает четвертичной структурой, считают 100 ООО. Что касается молекулярных масс субъединиц, то они принимают самые разнообразные значения, от нескольких тысяч (например, 6000 у инсулина) до 330000 (у каждой из двух субъединиц тиреоглобулина—белка щитовидной железы, ответственного за биосинтез гормона тироксина—см. гл. XII). [c.76]

Холинэстеразы из хлоропластов большинства исследованных растений име]Ш молекулярную массу субъединиц 31-63 кДа, что сопоставимо с холинэстеразой из микросом кролика (65-70 кДа). Высокомолекулярные формы холинэстераз из листьев иногда разделялись на субъединицы с меньшими молекулярными массами, хотя считают, что белки с молекулярной массой 63,1 кДа являются мономерными. Более мелкие пептиды (< 60), как считают исследователи холинэстераз животных, являются продуктами автопротеолиза самого фермента. В отличие от большинства холинэстераз, молекулярные массы эстераз др тих растений (например, плодов тыквы) составляют 36 и 18 кДа. [c.66]

По современным представлениям в состав моноаминооксидазы входит медь, соединенная сульфогидрильными группами с белком. Полагают, что медь необходима для активации реакционного центра, в который входят две сульфогидрильные группы, два гистидиновых остатка и один ковалентно связанный флавинадениндинуклеотид. Молекулярная масса субъединиц выделенного из клеток животных фермента составляет 100 кДа, однако встречаются разновидности с ММ 89, 44, 75, 52 кДа. [c.76]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология