Пируваткиназа

Желтый фермент Пируваткарбоксилаза Пируваткиназа Рибонуклеаза [c.271]

Скорости обмена пирувата и молекулы Н2О между водой и комплексом с Мп , либо свободным, либо встроенным в активный центр пируваткиназы [c.32]

Пируваткиназа катализирует необратимую реакцию превращения фосфоенолпирувата в пируват, сопровождающуюся образованием АТФ [c.269]

Определение активности пируваткиназы [c.270]

Активность пируваткиназы определяют по образованию пирувата, количество которого измеряют в системе, содержащей лактатдегидрогеназу и НАДН [c.270]

Пируваткиназа. Раствор фермента разводят трис-НС1 буфером непосредственно перед определением активности. [c.270]

Выделение и очистка пируваткиназы из скелетных мышц кролика [c.271]

Концентрацию АДФ измеряют в сопряженной с пируваткиназой и лактатдегидрогеназой системе по количеству образовавшегося НАД по следующей схеме [c.293]

Пируваткиназу, лактатдегидрогеназу и креатинкиназу растворяют в 50 мМ глицил-глициновом буфере, pH 8,0. [c.294]

Альдолаза, триозофосфатизомераза и а-глицерол-З-фосфатде-гидрогеназа (по схеме I) пируваткиназа и лактатдегидрогеназа (по схеме II). [c.240]

РЕГУЛЯЦИЯ АКТИВНОСТИ ПИРУВАТКИНАЗЫ СКЕЛЕТНЫХ МЫШЦ [c.333]

Мышцы ( 5 г) задних конечностей декапитированного животного помещают в ледяную среду выделения. После охлаждения ткань обсушивают фильтровальной бумагой, переносят в чашку Петри, стоящую на льду, очищают от жира и соединительной ткани, измельчают ножницами. Навеску тканевой кашицы гомогенизируют в стеклянном гомогенизаторе Поттера с тефлоновым пестиком, имеющим нарезку в 6-кратном по отношению к весу ткани объеме среды выделения. Тканевый гомогенат центрифугируют при 15000 д в течение 20 мин. Супернатант после центрифугирования, представляющий собой 14%-нук> растворимую клеточную фракцию, фильтруют через 4 слоя марли и хранят порциями при —5°С в течение 2 нед. Размораживают при комнатной температуре и перед определением активности пируваткиназы разводят средой выделения до конечного разведения 1 200. [c.334]

Изучение свойств пируваткиназы [c.335]

Определяют активность пируваткиназы в растворимой клеточной фракции мышц в день выделения и после хранения препарата при -5"С. [c.335]

Исследуют влияние 10 мМ фенилаланина на активность пируваткиназы в диапазоне значений pH 7,2—8,4. [c.336]

Выделение, очистка пируваткиназы из мышц кролика и изучение ее кинетических и регуляторных свойств. [c.503]

Фермент является тетрамером и в тканях млекопитающих представлен тремя изоформами, среди которых наиболее распространены L-пируваткиназа, или печеночный изозим, и М пируваткиназа, иначе мышечный изозим. Общепризнанным является представление о L-пи-руваткиназе печени как об одном из ключевых ферментов гликолиза. Проблема регуляторной роли jWi-пируваткиназы в контролировании гликолиза в скелетной мышце остается нерешенной. Отчасти это связано с тем, что к пируваткиназе мышечной ткани применимы не все критерии, согласно которым, по современным представлениям, фермент может выдвигаться на роль ключевого. В частности, является спорным вопрос об аллостерической природе фермента, а также о проявлении им кооперативных свойств при взаимодействии с субстратами. Возможная причина противоречий связана, по-видимому, с выраженной конформационной подвижностью [-изозима пируваткиназы, вследствие чего фермент утрачивает кооперативные свойства при изменении pH или ионного состава среды. [c.333]

При сравнении с неферментативными комплексами значения k—i оказываются, как правило, меньше аналогичных констант скоростей. Причину этого следует искать как в рассмотренных стерических затруднениях, ограничивающих скорость диффузии в поверхностном слое белковой глобулы так и в высокой прочности многоточечных (хелатных) комплексов с участием ферментов (/fa oq раздел Прочность комплексов фермент — лиганд этой главы). Так, из табл. 5 видно, что даже молекула воды обменивается между раствором и координационной сферой Мп бйстрее в случай свободного иона, чем встроенного в активный центр пируваткиназы [65]. [c.31]

Определение активности пируваткиназы. Активность фермента определяют энзиматическим методом по количеству образовавшегося в ходе реакции пирувата. Метод основан на использовании сопряженной лактатдегидрогеназной реакции (с. 270). За ходом реакции следят на спектрофотометре по уменьшению оптической плотности при 340 нм в результате окисления НАДН. Показания прибора регистрируют каждые 30 с в течение 3 мин. [c.334]

Набор белков-маркеров с известной молекулярной массой. Кроме белков, указанных на с. 107, можно использовать химо-трипсиноген А (25 700 Да), креатинкиназу из мышц кролика (80000 Да), глицеральдегидфосфатдегидрогеназу (144000 Да),, пируваткиназу (237 ООО Да) и др. [c.118]

Встречается и обратная ситуация, когда 5-образная кривая в присутствии аллостерического эффектора превращается в гиперболическую. Например, пируваткиназа скелетных мышц характеризуется кинетикой Михаэлиса, но в присутствии аллостерического ингибитора (фенилаланина) кривая зависимости скорости реакции от концентрации субстрата становится 5-образной, при этом сродство фермента к субстрату (фосфоенолпирувату) уменьшается. Изменение кинетических свойств под действием аллостерических эффекторов обусловлено конформационной перестройкой молекулы белка. С помощью сшивающих реагентов или каких-либо других воздействий на структуру белка можно наблюдать потерю чувствительности фермента к аллосте-рическим эффекторам. Для выявления аллостерических свойств иногда необходимо изменить условия определения активности сместить pH реакционной среды в кислую или щелочную область от рН-оптимума или исследовать влияние эффектора при ненасыщенной концентрации субстрата. [c.215]

М сульфата аммония) отделяют центрифугированием (15 мин, 10 000 g). Эта фракция содержит альдолазу, глицерол-З-фосфатдегид-рогеназу, пируваткиназу и лактатдегидрогеназу. Влажный осадок растворяют в полуторакратном по объему количестве воды с ЭДТА, что снижает концентрацию сульфата аммония приблизительно до [c.268]

Реакция протекает с выделением энергии (ЛС = —7,5 ккал/моль). В тканях млекопитающих известны три изозима пируваткиназы, каждый состоит из четырех идентичных субъединиц. Изозимы имеют молекулярную массу от 200 000 до 250 000 Да молекулярная масса субъединицы — от 50000 до 61 000 Да. Фермент характеризуется высокой специфичностью по отнощению к фосфоенолпирувату, менее специфичен к нуклеотидному субстрату. Пируваткиназа относится к группе аллостерических ферментов. Изозимы пируваткиназы отличаются своими регуляторными свойствами. Ферментативная реакция, катализируемая высокоочищенной пируваткиназой из скелетных [c.269]

Определение белка проводят микробиуретовым методом (с. 81). Концентрацию очищенной пируваткиназы можно измерять спектро- фотометрически при 280 нм, используя коэффициент aW=5,5. [c.271]

Если в препарате пируваткиназы имеется примесь аденилаткиназы и лактатдегидрогеназы, то ее можно удалить с помощью гельфильтрации на колонке (50x2,5 см) с сефадексом G=200. На колонку наносят 10—20 мг белка и элюируют со скоростью 10—15 мл/ч 50 мМ К-фосфатным буфером, содержащим 10 мМ 2-меркаптоэтанол, pH 7,0. [c.272]

Пируваткиназа принадлежит к группе ферментов гликолитиче-ской цепи и катализирует практически необратимую реакцию трансфосфорилирования между фосфоенолпируватом и Mg—АДФ с образованием пирувата и Mg—АТФ (с. 269). [c.333]

АТФ, НАДН, лимонной и жирными к-тами, стимулируется АДФ и АМФ. Р-ции II и IV катализируются соотв. гексоки-назой и пируваткиназой, активность к-рых регулируется адениловыми нуклеотидами, промежуточными продуктами Г. и цикла трикарбоновых к-т. У животных и человека в регуляции Г. принимают участие также гормоны. [c.580]

Оксалоацетат может также подвергаться ферментативному декарбоксилированию в пируват [см. реакцию (9-8)], протекающему, вероятно, через образование енолят-аниона, но без стадии фосфорилирования, изображенной на схеме (7-76). Фермент пируваткиназа (гл. 9, разд. Д,1), который обычно катализирует образование пирувата в енольной форме, по-видимому, идентичен оксалоацетатдекарбоксилазе [162а]. [c.173]

Биохимия Том 3 (1980) -- [ c.194 , c.338 ]

Принципы структурной организации белков (1982) -- [ c.19 , c.61 , c.110 , c.112 , c.119 ]

Биологическая химия Изд.3 (1998) -- [ c.332 , c.343 , c.359 ]

Принципы структурной организации белков (1982) -- [ c.61 , c.110 , c.112 , c.119 , c.191 ]

Биохимия (2004) -- [ c.246 ]

Аффинная хроматография (1980) -- [ c.163 ]

Биохимия растений (1966) -- [ c.126 ]

Основы биохимии Т 1,2,3 (1985) -- [ c.229 , c.450 , c.454 , c.800 ]

Общая микробиология (1987) -- [ c.223 , c.226 , c.249 , c.264 ]

Метаболические пути (1973) -- [ c.14 , c.27 ]

Основы биологической химии (1970) -- [ c.280 , c.281 , c.290 ]

Биохимия растений (1968) -- [ c.114 ]

Кинетические методы в биохимическихисследованиях (1982) -- [ c.174 ]

Стратегия биохимической адаптации (1977) -- [ c.0 ]

Биохимический справочник (1979) -- [ c.122 , c.138 ]

Неорганическая биохимия Т 1 _2 (1978) -- [ c.446 , c.448 , c.462 , c.472 ]

Химия биологически активных природных соединений (1976) -- [ c.70 ]

Ферменты Т.3 (1982) -- [ c.2 , c.7 , c.40 , c.83 ]

Биохимия человека Т.2 (1993) -- [ c.183 , c.185 , c.197 , c.215 , c.216 , c.261 ]

Проблема белка (1996) -- [ c.318 ]

Генетика человека Т.3 (1990) -- [ c.18 ]

Биохимия человека Том 2 (1993) -- [ c.183 , c.185 , c.197 , c.215 , c.216 , c.261 ]

Химия протеолиза Изд.2 (1991) -- [ c.370 ]

Биологические мембраны Структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами (2000) -- [ c.82 , c.85 ]

Физиология растений (1989) -- [ c.140 , c.169 ]

Основы биохимии (1999) -- [ c.347 ]

Структура и механизм действия ферментов (1980) -- [ c.257 , c.265 , c.308 ]

Биологическая химия (2004) -- [ c.34 , c.255 , c.274 , c.275 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология