Креатинкиназа

Ткани, имеющие большой динамический диапазон энергетического обмена (скелетная и сердечная мыщцы), а также мозг содержат креатинкиназу (с. 291). Во внутренней мембране митохондрий скелетных мышц, сердца и мозга содержится креатинкиназа, отличная по электрофоретической подвижности и термолабильности от трех изоферментов креатинкиназы цитоплазмы. Активность креатинкиназы в митохондриях достаточна для того, чтобы в присутствии избытка креатина обеспечить превращение всего образующегося в процессе окислительного фосфорилирования АТФ в креатинфосфат. Освобождающийся при этом АДФ вновь фосфорилируется в митохондриях. Таким образом, высокая активность креатинкиназы в митохондриях может поддерживать работу дыхательной цепи на постоянно высоком уровне в тканях, лишь периодически испытывающих потребность в большом количестве АТФ. [c.479]

В реакционную смесь объемом 5 мл добавляют компоненты ферментативной реакции в конечной концентрации 50 мМ трис-НС1, pH 7,2 10 мМ креатинфосфат 10 мМ АМФ, 5 мМ М (СНзСОО)2, раствор креатинкиназы. Если в препарате фермента отсутствует примесь аденилаткиназы, АМФ в реакционную смесь не добавляют. Смесь выдерживают 5 мин при 30° С, после чего реакцию запускают добавлением АДФ (1 мМ), быстро перемешивают и затем каждые 2—3 мин отбирают по 0,5 мл раствора. Пробы помещают в заранее приготовленную смесь, состоящую из 1 мл 1%-ного щелочного раствора а-нафтола и 0,5 мл 0,05%-ного раствора диацетила. Каждую пробу после доведения ее объема до 5 мл через 30 мин колориметрируют при 540 нм. Первая проба (взятая в течение первых 20 с) может служить контрольной, но лучше ее готовить без добавления АДФ. [c.293]

Креатин (метилгуанидинуксусная кислота) является обязательной составной частью поперечнополосатой мускулатуры. Содержание креатина в скелетных мышцах достигает 400—500 мг%, в сердечноГ мышце креатина в 2—3 раза меньше. Креатин найден также в ткани мозга (около 100 мг%) и в значительно меньших количествах в паренхиматозных органах (10—50 мг%).) В мышечной ткани креатин содержится как в свободном виде, так и в виде фосфорилированного производного (креатинфосфата, фосфокреатина), который образуется в результате обратимого переноса фосфорильного остатка с АТФ на креатин. Реакция катализируется креатинкиназой (АТФ креатин—фосфо-трансфераза, КФ 2.7.3.2). [c.189]

Выделение и очистка креатинкиназы из скелетных мышц кролика [c.295]

Креатинкиназа катализирует обратимую реакцию переноса фосфорильной группы с АТФ на креатин с образованием богатых энергией [c.291]

Все цитоплазматические креатинкиназы обладают близкими молекулярными массами, коэффициентами седиментации. Они состоят из двух полипептидных цепей, молекулярная масса которых равна 40 000—43 ООО Да. [c.292]

Митохондриальный фермент выделен в виде димера, гексамера и октамера. Изоферменты креатинкиназы различаются по электрофоретической подвижности, по кинетическим свойствам, по термостабильности, по аминокислотному составу, по количеству и реактивности 5Н-групп, аргининовых остатков и другим свойствам. Мышечный изофермент (ММ) более стабилен, чем мозговой (ВВ) и митохондриальный при изменении pH и температуры. Они устойчивы в диапазоне pH 6,0—9,5, но при этом к раствору мозгового и митохондриального изоферментов необходимо добавлять 5Н-восстанавливающие реагенты (2-меркаптоэтанол и др.). Оптимальные значения pH активности для изоферментов практически одинаковы и равны 9 — для прямой реакции (синтеза креатинфосфата) и 7 — для обратной реакции (расщепления креатинфосфата). [c.292]

Величины кажущихся констант Михаэлиса для субстратов колеблются в зависимости от природы используемого буфера, pH, температуры, источника выделения фермента и прочих условий. Кажущиеся константы Михаэлиса цитоплазматических креатинкиназ равны для Mg—АТФ—0,5—1,0 мМ Mg—АДФ—0,2—0,8 мМ для креатина — [c.292]

Определение активности креатинкиназы [c.293]

Креатинкиназа — 2 мг/мл. В 50 мМ растворе трис-НС1 буфера (pH 7,2) хранят в замороженном состоянии, перед определением активности однократно размораживают и разводят тем же буфером. [c.293]

Пируваткиназу, лактатдегидрогеназу и креатинкиназу растворяют в 50 мМ глицил-глициновом буфере, pH 8,0. [c.294]

Е). Обратимое действие креатинкиназы обеспечивает быстрый пе- [c.99]

Ферменты. В мозговой ткани содержится большое количество ферментов, катализирующих обмен углеводов, липидов и белков. До сих пор в кристаллическом виде из ЦНС млекопитающих вьщелены лишь некоторые ферменты, в частности ацетилхолинэстераза и креатинкиназа. [c.630]

В результате трансметилирования от S-аденозилметионина [уравнение (14-18), стадия б] гуанидинуксусная кислота превращается в креатин. играющий особенно важную роль в мышцах. Креатинкиназа об- [c.98]

Прежде всего ресинтез АТФ обеспечивается трансфосфорилированием АДФ с креатинфосфатом. Данная реакция катализируется ферментом креатинкиназой [c.654]

Гексокиназа (10 М) Фосфорилаза (10 М) Алкогольдегидрогеназа (5-10-Щ) Креатинкиназа (310 М) Глюкоза (3- Ю М) 1 АТФ (210-3 М) 1 Глюкоэо-1-фосфат (2-Ю ЗД) ( Гликоген (10 б М) / НАД (4 10- М) Этанол (4-10-2 М) / Креатин (2-10 2 м) АТФ (4-10-3 М) >1010 >1011 >5-10 >101 [c.6]

Набор белков-маркеров с известной молекулярной массой. Кроме белков, указанных на с. 107, можно использовать химо-трипсиноген А (25 700 Да), креатинкиназу из мышц кролика (80000 Да), глицеральдегидфосфатдегидрогеназу (144000 Да),, пируваткиназу (237 ООО Да) и др. [c.118]

С открытием митохондриальной креатинкиназы креатинфосфат стал рассматриваться не просто как резерв макроэргического фосфата в клетке, а как основной переносчик химической энергии от митохондрий к местам ее утилизации в клетке. Митохондриальная креатинкиназа превращает синтезированный в митохондриях АТФ в креатинфосфат в виде креатинфосфата энергия транспортируется к местам ее утилизации, где и происходит обратная реакция образования АТФ из креатинфосфата и АДФ с помощью цитоплазматических нзофермен-тов. [c.292]

В спектрофотометрическую кювету вносят следующие компоненты (указаны конечные концентрации) 50 мМ трис-НС1, pH 7,2 1,0 мМ АДФ 30—10 мМ Мд(СНзСОО)г 2 мМ глюкозу 0,25 мМ НАДФ гексокиназу 0,5 ед/мл дегидрогеназу глюкозо-6-фосфата 0,5 ед/мл, креатинкиназу. Следят за изменением оптической плотности если из- [c.294]

Осаждение креатинкиназы спиртом. Выпавший за ночь небольшой осадок удаляют центрифугированием при 1000 g в течение 30 мин. Из прозрачного центрифугата осаждают креатинкиназу, доводя концентрацию этанола до 70 o6.%i тщательно следя за тем, чтобы температура смеси не поднималась выше О—2° С. Осадок фермента собирают центрифугированием при 2000 g в течение 20 мин, растворяют в небольшом объеме 0,01 М глицин-NaOH буфера, pH 9,0 (или в 0,05 М трис-НС1 буфере, pH 8,0). [c.295]

Было также высказано предположение о том, что именно креатинфосфат является той формой высокоэргического фосфата, которая переносится из митохондрий в другие части клетки. В настоящей работе предлагается ознакомиться с влиянием креатина на дыхание митохондрий сердца и определить 5о,5 митохондриальной креатинкиназы для креатина и АТФ. [c.479]

В экспериментах, выполненных в ранний период исследований, было обнаружено, что для фиксации N2 в бесклеточных экстрактах требуется пируват натрия. Наблюдалось также накопление в больших количествах СО2 и Нг. Оказалось, что пируват расщепляется под действием пируват-формиат-лиазы (рис. 8-19), поставляя клеткам два важных продукта АТР и восстановленный ферредоксин. Пируват можно было заменить смесью АТР, Mg + и F Ibo t. Кроме того, восстановленный ферредоксин можно было заменить небиологическим восстановителем дитионитом (S2O4 ). Поскольку ADP оказывает на нитрогеназную систему ингибирующее действие, лучшим способом образования АТР оказалось использование АТР-генерирующей системы в виде смеси креа-тинфосфата (дополнение Ю-Е), креатинкиназы и небольшого количества ADP. [c.83]

Г. участвует в превращ. глюкозы при брожении, гликолизе, оказывает существенное влияние на пентозофосфатный цикл и биосинтез гликогена. Ее используют для исследования активности ряда ферментов, напр, креатинкиназы при диагностике инфаркта миокарда. Данные по активности Г [c.512]

Особый интерес для клиники представляет гюследование активности индикаторных ферментов в сыворотке крови, так как по появлению в плазме или сыворотке крови ряда тканевых ферментов в повышенных количествах можно судить о функциональном состоянии и поражении различных органов (например, печени, сердечной и скелетной мускулатуры). При остром инфаркте миокарда особенно важно гюследовать активность креатинкиназы, АсАТ, ЛДГ и оксибутиратдегидрогеназы. [c.579]

Ее катализирует фермент креатинкиназа, к-рая представлена в клетках двумя формами (цитоплазматич. и митохондриальной), различающимися по своим св-вам. В условиях, когда энергия АТФ мышечной клетки расходуется на ее сокращение (при зтом образуется АДФ и HjPO ), равновесие Р ЦИИ смещается вправо и нормальный уровень АТФ восстанавливается. Содержание К. к. в покоящейся мышце в [c.506]

Схема 7.в-10. Пути реакций согласно связанному с редокс-ферментом ампе-рометртчесиому измерению с помощыо редокс-к№диатора. 6 — определение глюкозы (л)- -(б)—определение креатина, креатинкиназы или гексокиназы, [c.539]

Многие белки in situ присутствуют в значительно более высоких концентрациях, чем обычно бывает необходимо для реализации их специфических функций, например катализа определенных химических реакций. Это указывает на то, что белки возможно используются в качестве формы хранения аминокислот и (или) что они выполняют некие еще не известные нам функции. Например, высокая концентрация креатинкиназы в мышце (20 мг на 1 г ткани [751]) оставалась непонятной до тех пор, пока не установили, что этот белок функционирует не только как фермент, но также в форме, составляющей М-диск, как структурная опора сократительного аппарата [752]. [c.282]

Подобные рассуждения приложимы и к электростатическим взаимодействиям. Ионные пары между моновалентными ионами существенны в неполярных растворителях, однако их стабильность в воде мала. Значительные эффекты наблюдаются в том случае, когда один из ионов является полиэлектролитом 85], в этом случае могут образовываться стабильные комплексы с полиэлектролитами противоположного заряда. Полилизин, например (поликатион при нейтральном pH), образует нерастворимый комплекс с ДНК (полианионом) 86]. Во многих внутрибелковых и фермент-субстратных взаимодействиях электростатические силы усиливают водородные связи, как в солевом мостике СО НзМ описанном выще для химотрипсина, а также в случае бифункциональных взаимодействий (52) между карбоксилат- или фосфат-анионом и гуанидиновой группой аргинина, наблюдаемых, например, в активном центре креатинкиназы [87]. [c.504]

Диагностическое значение имеет также исследование аьсгивности изоферментов креатинкиназы в сыворотке крови. Существуют по крайней мере 3 изофермента креатинкиназы ВВ, ММ и MB. В мозговой ткани в основном присутствует изофермент ВВ (от англ. brain-мозг), в скелетной мускулатуре —ММ-форма (от англ. mus le—мышца). Сердце содержит гибридную МВ-форму, а также ММ-форму. Изоферменты креатинкиназы особенно важно исследовать при остром инфаркте миокарда, так как МВ-форма в значительном количестве содержится практически только в сердечной мышце. Повышение активности МВ-формы в сыворотке крови свидетельствует о поражении именно сердечной мышцы. [c.580]

Значительное количество ферментов в мозговой ткани находится в нескольких молекулярных формах (изоферменты) ЛДГ, альдолаза, креатинкиназа, гексокиназа, малатдегидрогеназа, глутаматдегидрогеназа, холинэстераза, кислая фосфатаза, моноаминоксидаза и др. [c.630]

В последнее время появились данные, доказывающие, что креатинфосфат в мышечной ткани (в частности, в сердечной мышце) способен выполнять не только роль как бы депо легкомобилизуемых макроэргических фосфатных групп, но также роль транспортной формы макроэргических фосфатных связей, образующихся в процессе тканевого дыхания и связанного с ним окислительного фосфорилирования. Предложена схема переноса энергии из митохондрий в цитоплазму клетки миокарда (рис. 20.7). АТФ, синтезированный в матриксе митохондрий, переносится через внутреннюю мембрану с участием специфической АТФ—АДФ-транслоказы на активный центр митохондриального изофермента креатинкиназы, который расположен на внешней стороне внутренней мембраны в меж-мембранном пространстве (в присутствии ионов Mg ) при наличии в среде креатина образуется равновесный тройной фермент-субстратный комплекс креатин—креатинкиназа—АТФ—Mg , который затем распадается с образованием креатинфосфата и АДФ —Mg . Креатинфосфат диффундирует в цитоплазму, где используется в миофибриллярной креатинкиназной реакции для рефосфорилирования АДФ, образовавшегося при сокращении. Высказываются предположения, что не только в сердечной мышце, но и в скелетной мускулатуре имеется подобный путь транспорта энергии из митохондрий в миофибриллы. [c.655]

Биохимия Том 3 (1980) -- [ c.83 , c.98 , c.99 ]

Биологическая химия Изд.3 (1998) -- [ c.580 , c.654 , c.655 , c.660 ]

Биологическая химия (2002) -- [ c.140 ]

Теоретические основы биотехнологии (2003) -- [ c.144 ]

Аффинная хроматография (1980) -- [ c.309 ]

Основы биохимии Т 1,2,3 (1985) -- [ c.426 , c.662 , c.757 ]

Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков (1974) -- [ c.377 ]

Метаболические пути (1973) -- [ c.81 ]

Методы и достижения бионеорганической химии (1978) -- [ c.385 , c.389 ]

Биохимический справочник (1979) -- [ c.110 , c.138 ]

Неорганическая биохимия Т 1 _2 (1978) -- [ c.445 , c.452 , c.656 , c.662 , c.666 , c.669 , c.670 , c.672 , c.676 ]

Ферменты Т.3 (1982) -- [ c.2 , c.2 , c.3 , c.7 , c.86 , c.135 , c.170 ]

Биохимия человека Т.2 (1993) -- [ c.136 ]

Биохимия человека Том 2 (1993) -- [ c.136 ]

Нейрохимия (1996) -- [ c.87 , c.181 ]

Введение в биомембранологию (1990) -- [ c.48 ]

Электрофорез в разделении биологических макромолекул (1982) -- [ c.286 ]

Иммуноферментный анализ (1988) -- [ c.30 , c.31 , c.317 , c.326 , c.334 , c.335 , c.337 , c.393 , c.394 ]

Биосенсоры основы и приложения (1991) -- [ c.16 , c.426 ]

Цитоскелет Архитектура и хореография клетки (1987) -- [ c.51 , c.94 ]

Биологическая химия (2004) -- [ c.99 , c.527 ]

Биохимия Т.3 Изд.2 (1985) -- [ c.270 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология