Гельфильтрация

Гельфильтрация — один из видов распределительной хроматографии, при котором гели с пространственной сетчатой структурой, обладающие свойствами молекулярных сит, используются для фракционирования по молекулярному весу или для очистки полисахаридов от примесей [c.140]

Метод гель-хроматографии [9, гл 5], [10] (гельфильтрации) основан на том, что макромолекулы в зависимости от их размеров и формы обладают различной способностью диффундировать из раствора в микропоры сшитого геля (сефадекс, сшитые сополимеры акриламида, стирола и т д), находящегося в колонне При этом макромолекулы, проникшие в гель, задерживаются в колонне [c.551]

Развитие методов гельфильтрации, ионообменной хроматографии, ультрацентрифугирования, а также разработка и автоматизация методов анализа первичной структуры макромолекул позволили в сравнительно короткие сроки расшифровать последовательность аминокислотных остатков в токсических полипептидах большинства змей. [c.57]

Основные успехи разделения биополимеров в гетерогенных системах достигнуты при использовании равновесия между раствором и твердой фазой. Одними из наиболее ранних приемов, сохранивших свое значение и до настоящего времени, являются методы осаждения и кристаллизации. Еще большее значение в настоящее время играют процессы сорбции и их динамическая модификация — процессы хроматографии. Одноактная сорбция белков на окислах металлов и других минеральных сорбентах служит для очистки белков и ферментов уже несколько десятилетий. К этим процессам присоединилась избирательная сорбция белков ионообменными смолами. Одним из наиболее значительных достижений современной физической химии в области фракционирования сложных смесей веществ, в частности белков, нуклеиновых кислот, полипептидов, аминокислот и нуклеотидов, явилась хроматография, особенно в виде ее ионообменной модификации и гельфильтрации на сефадексах. [c.7]

Сефадексы G-100 (для гельфильтрации), G-50 (тонкий), КМ-сефадекс (G-25). [c.255]

Снижение конденсированности и молекулярного веса реагента показывает также адсорбционное разделение (гельфильтрация) на колонках сефадекса, представляющих собой обратные молекулярные сита [1501. При обработке хроматами, как видно из наших измерений, исчезает высокомолекулярная фракция с молекулами более 10 тыс. мк. Для УЩР и окисленного УЩР на рис. 17 и 18 [c.117]

Быстрому развитию науки в этой области способствовало широкое применение новейших методов анализа и разделения смеси веществ, основанных на использовании бумажной, колоночной и газожидкостной хроматографии, фракционного осаждения, инфракрасной спектроскопии, электрофореза, ионообменной хроматографии, гельфильтрации и др. Большое значение в этой области также имел накопленный опыт по синтезу специальных свидетелей для количественной хроматографии, особенно частично метилированных сахаров с известным расположением метоксильных групп. [c.6]

I осаждение солями аммония - гельфильтрация [c.59]

Водный раствор 111. Чистый фермент I гельфильтрация Обессоленный раствор 1 выпаривание [c.59]

Метод гельфильтрации, или метод молекулярных сит, был разработан совсем недавно, но сейчас уже прочно вошел в биохимическую препаративную технику. Для этого способа фракционирования применяют различные гели, но чаще всего сефадекс. Он представляет собой трехмерную полисахаридную сеть и со- [c.152]

Разделение белковых фракций сыворотки можно осуществить путем высаливания (см. работу 41), отделяя каждую выпавшую фракцию фильтрованием. Более совершенным является электрофоретическое разделение белков сыворотки и применение гельфильтрации (стр. 55). [c.225]

Рис. 68. Схема опыта по гельфильтрации. (ПоАЗзано более быстрое продвижение крупных молекул белка)

VI. СОРБЦИЯ И ХРОМАТОГРАФИЯ БЕЛКОВ НА ИОНООБМЕННЫХ СМОЛАХ И МЕТОД ГЕЛЬФИЛЬТРАЦИИ [c.187]

Наибольшей скоростью прохождения колонки обладают компоненты, не способные проникнуть в зерна гелевой фазы. Сефадексы 0-10 и 0-15 служат для фракционирования низкомолекулярных веществ, первый из них используется для веществ с молекулярным весом до 700, а второй — до 1500. Гели сефадекса 0-25 не способны поглощать, а следовательно, и задерживать перемещение по колонке веществ с молекулярным весом 3500— 4500. Этот предел для сефадекса 0-50 лежит в области значений молекулярных весов 8000—10000, а для сефадекса 0-75 эта величина достигает 40000—50000. Медленно перемещаются по колонке низкомолекулярные вещества, для которых коэффициент распределения между гелевой и жидкой фазами приближается к единице. Во многих случаях компоненты смеси при хроматографическом разделении на сефадексах следуют в порядке уменьшения их молекулярных весов. Однако наблюдается иногда и специфическое сорбционное взаимодействие разделяемых веществ с матрицей сефадекса, что влечет за собой увеличение коэффициента распределения К и снижение скорости перемещения по колонке. Так, замедление движения хроматографических зон наблюдается у основных пептидов и аминокислот в основных растворителях и кислых аминокислот и пептидов в кислых растворителях. Наблюдается также повышение степени удерживания в колонке ароматических веществ при гельфильтрации [22]. Ряд белков, таких как рибонуклеаза, лизоцим, трипсин, бычий сывороточный альбумин, в отсутствие солей также сорбируется и удерживается сефадексом при хроматографии. В связи с этим целесообразно проводить элюирование на сефадексах растворами солей или кислот. [c.202]

Проницаемость сефадекса для молекул белков, а следовательно, и скорость прохождения колонки белками при гельфильтрации определяются не столько молекулярным весом, сколько размерами макромолекул белков. Это видно на рис, 2, где приведень выходные [c.202]

Если в препарате пируваткиназы имеется примесь аденилаткиназы и лактатдегидрогеназы, то ее можно удалить с помощью гельфильтрации на колонке (50x2,5 см) с сефадексом G=200. На колонку наносят 10—20 мг белка и элюируют со скоростью 10—15 мл/ч 50 мМ К-фосфатным буфером, содержащим 10 мМ 2-меркаптоэтанол, pH 7,0. [c.272]

Новым чрезвычайно перспективным методом хроматографического анализа является гельфильтрация или метод молекулярных сит. В основе метода лежит различная скорость продвижения молекул через гель специального материала — сефадекса или молселекта. Сефадекс представляет декстран, подвергнутый химической обработке с образованием пористых гранул, внутрь которых могут проникать различные вещества. При увеличении числа внутренних связей в грануле размер молекул,способных проникать [c.172]

Сапонины, образующие коллоидные растворы, очищают от примесей, дающих истинные растворы (моносахариды, минеральные вещества), с помощью диализа и электролиза. Хорошие результаты очистки сапониновых фракций от растительных питмеитов и восстанавливающих сахаров получены при гельфильтрации на сефЗ дексах У-25, У-50, А-25. [c.45]

Сефадексы широко используются в последнее время для обес-солнвапия растворов белков вместо диализа, а также для концентрирования белка в растворе, что основано на большой гидрофиль-ности матрицы. Синтез ионообменных материалов на базе сефадекса значительно расширяет сферу использования гельфильтрации. [c.172]

Тайпоксин (Karlsson, 1973) является слабо кислым белком (ИЭТ pH 5), который диссоциирует при pH 3 на две субъединицы, очищенные гельфильтрацией. Молекулярный вес комплекса 42000, субъединицы 1—30000, [c.72]

Метод гельфильтрации основан на способности набухшего геля захватывать небольшие растворенные молекулы и не задерживать молекулы, превышающие определенную величину. Те молекулы, размеры которых превышают величину отверстий пространственной сетчатой структуры, быстрее проходят между зернами геля, чем молекулы меньших размеров, проникающие через отверстия попереч-носшитой структуры внутрь геля, и, таким образом, вынуждены проходить по значительно более длинному -пути. В таких условиях из геля позже всего вымываются молекулы наименьших размеров. [c.140]

По мере увеличения молекулярного веса растет разжижающая способность, максимальная у последних фракций диализа и у не-днализуемого через целлофановую перегородку остатка, содержащего до 70% сухого вещества окзила. Гельфильтрация через колонки сефадексов показала, что основная часть окзила имеет молекулярный вес не менее 10 ООО и 45% его превышает 50 ООО, в то время как у исходной ССБ эта фракция составляет не более 15%. [c.150]

Гельфильтрация. Для гельфильтрации берут смесь гемоглобина крови с растиором рибофлавина (иитамип В2). [c.34]

Более убедительными были работы, посвященные очистке выделенных соединенрй методами хроматографии, гельфильтрации и электрофореза. Наибольший интерес в этом отношении представляет исследование лигнинуглеводных комплексов из черного щелока, полученного при сульфатной варке древесины березы [19]. Фракционным осаждением, электрофорезом в колонках с гелем хроматографией на геле удалось показать, что основная масса растворённого лигнина не содержала связанных углеводов. Однако часть лигнина выделялась вместе с гемицеллюлозами. Попытки разделить их методами электрофореза и гельфильтрации не дали положительных результатов. В процессе разделения указанными методами углеводы перемещались с лигнином примерно в одной пропорции. Отсюда был сделан вывод о существовании лигнингемицеллюлозного комплекса в черном щелоке. [c.295]

Эффективность разделения частиц при гельфильтрации в значительной степени зависит от подготовки самой колонки [3]. Колонку заполняют гранулами геля, набухшими в воде. Для этого сухой гель перемешивают с 10—20-кратным объемом дистиллированной воды или солевого раствора (0,1—1%-иого Na l) и оставляют на некоторое время при периодическом перемешивании. Затем раствор декантируют для удаления мелких частиц. Размешивание геля с водой и декантацию раствора повторяют несколько раз. [c.141]

Гельфильтрацию можно успешно применять для разделения растворимых в воде полисахаридов и олигосахаридов. Детальная характеристика гелей, выпускаемых промышленностью, дана Детерманом [6]. [c.142]

Хроматографическую гельфильтрацию нерастворимых в воде гемицеллюлоз проводят в растворах кадоксена (кадмийэтилендиамииа) [7]. [c.142]

Аналогичное исследование [10] было проведено при получении из еловой древесины холоцеллюлозы. Перешедшие в раствор продукты окисления лигнина и водорастворимые гемицеллюлозы подвергались разделению путем гельфильтрации на сефадексе 0-100. Было показано, что в различных фракциях соотношение лигнина и углеводов было относительно постоянным. На основании этих исследований был сделан вывод о возможности существования небольших количеств лигнинуглеводных соединений, в которые входит как галактоглюкоманнан, так и 4-0-метилгклюкуроноксилан. Необходимо, однако, отметить, что сефадекс разделяет вещества по размерам макромолекул, что ие является безусловным доказательством наличия химических связей среди компонентов одной фракции. [c.292]

В последние годы для разделения белков с различными молекулярными весами широко применяется метод хроматографии на сефадексе (гельфильтрация). Сефадекс представляет собой мелкозернистый порошок, изготовленный из полисахарида декстрана, углеводные цепочки которого дополнительно соединены мостиками глицерина. В результате каждое зерно сефадекса представляет собой клубок из полисахаридных цепей, внутрь которого могут проходить вещества с определенным для каждого типа сефадекса молекулярным весом. При фильтровании раствора, содержащего смесь бел- [c.55]

В настоящее время строение рецепторного участка на молекуле альбумина, связывающего 1,4-бенздиазепины, не известно. Однако по имеющимся данным можно утверждать, что такой участок обладает высокой структурной специфичностью по отношению к 1,4-бенздиазепинам. Методами гельфильтрации и кругового дихроизма показано [318, 319], что молекула ЧСА имеет один участок связывания для бенздиазепинов. В УФ-спектре бенздиазепины дают два максимума поглощения — вблизи 230 и 310 нм [3201. Первая полоса обычно интенсивнее и обусловлена переходом бензольного кольца молекулы 1,4-бенздиазепина, а вторая образуется вследствие резонанса хромоформной группы — 0 == Ы с бензольным кольцом. Частичное насыщение фенила не приводит к изменению интенсивности и максимумов поглощения различных бенздиазепинов. [c.235]

Стереоспецифичность связывания бенздиазепинов с ЧСА характерна для гемисукцината оксазепама (СХ). Интересно отметить, что стереоспецифичностью связывания обычно обладают лиганды, имеющие несколько участков связывания на макромолекуле, например варфарин, барбитураты, азокрасители и др. Для них сродство к альбумину незначительно. Гемисукцинат оксазепама — первое соединение, обладающее большой стереоспецифичностью и сродством к молекуле ЧСА [336]. Методами гельфильтрации и кругового дихроизма установлено, что соединение СХ, имеющее 8-конфигурацию, в 40 раз превышает сродство К-энантиомера к альбумину. Такая высокая стереоспецифичность характерна только для Ь-триптофана. На основе эквимолярных концентраций триптофана и 1,4-бенздиазепинов найдено, что последние вытесняют триптофан из участков связывания на ЧСА. Характер замещения для них конкурентный [c.238]

По ходу варки через каждый час из термостата извлекали ампулу и твердую фазу центрифугированием отделяли от раствора. Остаток Промывали, высушивали и затем растворяли в ДМСО. Полученный >аствор фракционировали гельфильтрацией на сефадексе С-75. Элюен-гом служил ДМСО. [c.267]

Методы аыделения полисахаридов аесьма разнообразны. К ним относятся экстракция (водой, щелочами, разбавленными кислотами), осаждение (спиртом, сульфатом аммония, бромидами цетилтриметиламмония и цетилпиридиния), хроматография (ионообменная, гельфильтрация), ультрафильтрация и ультрацентрифугирование. [c.467]

В методе гельфильтрации на сефадексе (декстраны, сшитые эиихлоргидрином) молекулярную массу биополимеров (белки, гормоны, ферменты) с формой макромолекулы, близкой к сфериче-хкой, находят из зависимости положения пиков на кривых элюирования от молекулярной массы [8] (рис. 170). Метод дает ошибку, не превышающую 10%, не требует сложного оборудования и допускает автоматизацию. [c.546]

X600X 1050 мм 50 кг Проведение молекулярной адсорбции, распределительного обмена между двумя жидкими фазами, гельфильтрации с использованием сефадексов ионообменный хроматографический анализ очистка хроматографической бумаги, смол и сефадексов получение сухих веществ из элюатов. [c.328]

Иззгчение состава катехинов черного чая новой технологии, проведенное методом хроматографии на бумаге, показало, что такой чай содержит практически полный набор катехинов, свойственных зеленому чайному листу [20]. Помимо этого, была предпринята попытка выделить кристаллические катехины из черного чая, полученного с применением новой технологии. Использовали грузинский черный чай высшего сорта с оценкой 5 баллов и содержанием танина, 19%. Из препарата танина методом гельфильтрации на сефадексе Ж-100 в сочетании о методом препаративной хроматографии на бумаге били вщелеяы четыре катехина в кристалла [c.222]

После выделения и операций предварительной очистки ферменты фракционируют и получают высокоочищенные препараты. Наиболее распространенными способами более высокой очистки являются фракционирование действием органических растворителей, нейтральных солей, при помощи адсорбционных методов, ионообменной хромотографии, очистка ферметных белков кристаллизацией. Менее употребительны — фракционирование с помощью ионов тяжелых металлов, гельфильтрации, электрофореза, а также некоторые другие способы. [c.145]

Потребовалось выполнить исключительно большую экспериментальную работу по выбору п синтезу сорбентов и изучению условий проведения хроматографических процессов, прежде чем были созданы современные весьма изяш,ные хроматографические методы фракционирования макромолекул. Затруднения, возникшие при разработке этих методов, связаны прежде всего с необратимостью сорбции и малой емкостью сорбции белков. Период поисковых работ включал изучение распределительной хроматографии [1, 4] и молекулярной сорбционной хроматографии, в том числе весьма удачный для своего времени разработанный Тизелиусом метод хроматографии на фосфате кальция [2] и высаливающий хроматографический процесс [3], в котором емкость сорбции белков резко увеличивалась при высоких концентрациях электролита в растворе. Все эти методы, однако, уступили свое место высокоэффективной хроматографии белков на некоторых типах ионообменных смол, на модифицированных целлюлозах и методу гельфильтрации на сефадексах. Имеется значительное число обзоров по хроматографии белков, среди которых наиболее подробными являются статьи Циттла [4] и Мура и Штейна [5]. [c.188]

Из приведенных данных видно, что молекулы трипсина, а еще в большей мере химотрипсина, теряют способность проникать в зерно сорбента, что связано, естественно, с увеличением размеров макромолекул. У химотрипсина это происходит даже несмотря на образование трех осколков из каждой макромолекулы. Совершенно иначе ведет себя рибонуклеаза. Разрушение дйсульфид-ных мостиков и дальнейшее ацетамидирование приводят к увеличению проницаемости смолы этими макромолекулами, т. е. к уменьшению их размеров. Метод одноактной сорбции белков ионообменными смолами с целью анализа размеров макромолекул может быть сопоставлен с хроматографическим фракционированием белков методом гельфильтрации на сефадексе. Одноактная сорбция на ионитах и гельфильтрация на сефадексах приводят к идентичным суждениям об изменчивости морфологии белков после разрыва дисульфидных групп в трипсине, лизоциме и рибонук-леазе. [c.198]

Те же идеи — использование принципа молекулярных сит, но уже на пористых материалах, обладающих весьма малым сорбционным сродством по отношению к сорбатам, и не в одноактном, а в многоактном колоночном процессе — послужили основой для создания нового хроматографического метода — гельфильтрации. Первая работа по гельфильтрации была выполнена на крахмале [20]. Однако настоящий успех этого метода связан с получением и использованием гелей сшитого декстрана — сефадексов [21]. Фракционированный порошок сефадекса после его набухания в воде или в растворе помещается в колонку, заполненную той же жидкостью, в которой он набухал. Обычный хроматографический процесс в такой колонке протекает при элюировании предварительно введенной в верхнюю часть колонки смеси веществ с помощью воды или раствора электролита, чаще всего [c.201]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология