Рибонуклеаза хроматографическое разделение

Наибольшей скоростью прохождения колонки обладают компоненты, не способные проникнуть в зерна гелевой фазы. Сефадексы 0-10 и 0-15 служат для фракционирования низкомолекулярных веществ, первый из них используется для веществ с молекулярным весом до 700, а второй — до 1500. Гели сефадекса 0-25 не способны поглощать, а следовательно, и задерживать перемещение по колонке веществ с молекулярным весом 3500— 4500. Этот предел для сефадекса 0-50 лежит в области значений молекулярных весов 8000—10000, а для сефадекса 0-75 эта величина достигает 40000—50000. Медленно перемещаются по колонке низкомолекулярные вещества, для которых коэффициент распределения между гелевой и жидкой фазами приближается к единице. Во многих случаях компоненты смеси при хроматографическом разделении на сефадексах следуют в порядке уменьшения их молекулярных весов. Однако наблюдается иногда и специфическое сорбционное взаимодействие разделяемых веществ с матрицей сефадекса, что влечет за собой увеличение коэффициента распределения К и снижение скорости перемещения по колонке. Так, замедление движения хроматографических зон наблюдается у основных пептидов и аминокислот в основных растворителях и кислых аминокислот и пептидов в кислых растворителях. Наблюдается также повышение степени удерживания в колонке ароматических веществ при гельфильтрации [22]. Ряд белков, таких как рибонуклеаза, лизоцим, трипсин, бычий сывороточный альбумин, в отсутствие солей также сорбируется и удерживается сефадексом при хроматографии. В связи с этим целесообразно проводить элюирование на сефадексах растворами солей или кислот. [c.202]

Как правило, компоненты смеси при хроматографическом разделении на сефадексах следуют в порядке уменьшения их молекулярных весов. Однако иногда наблюдается специфическое сорбционное взаимодействие разделяемых веществ с матрицей сефадекса, что влечет за собой увеличение коэффициента распределения и снижение скорости перемещения на колонке [19], Такие белки, как рибонуклеаза, лизоцим, трипсин, альбумин сыворотки крови быка, в отсутствии солей сорбируются и удерживаются сефадексом при хроматографии из-за присутствия небольшого количества карбоксильных групп в матрице 359, 368]. Вещества, имеющие положительный заряд, задерживаются и при элюировании образуют хвосты , а отрицательно заряженные будут исключаться из гелевой фазы. Эти побочные эффекты устраняются при использовании растворителей с ионной силой не ниже чем 0,02 [164], [c.130]

Основная область научных исследований — биохимия белков. Изучал вторичную структуру ри-бонуклеазы. Обнаружил (1956), что ее молекула состоит из одной длинной нолппептидной цепи, образующей складки , скрепленные дисульфидными мостиками. Разработал метод гидролиза окисленной рибонуклеазы трипсином с предварительным блокированием е-аминогрупп лизина. Предложил метод развертывания полипептид-ной цепи с помощью восстановления 5—5-связей тиогликолевой кислотой, а также метод хроматографического разделения ферментов на фиксированных аналогах субстрата. Изучал зависимость биологической активности фермента от пространственной структуры его молекул и пришел к выводу, что за эту активность ответственна не вся структура. Основоположник нового направления в био- [c.21]

Коммерческие препараты панкреатической рибонуклеазы негомогенны. Они состоят из двух основных компонентов Л и 5, с близкой структурой и свойствами, но различающихся по своей специфичности. На долю компонента Б обычно приходится от 10 до 20% от исходного препарата белка. Разделение фракций Л и осуществляют хроматографически на колонке с КМ-целлюлозой (или на амберлите IR —50/ХЕ-64). [c.113]

Поскольку здесь рассматриьаются общие химические черты ферментативного катализа, мы в большинстве случаев будем избегать подобных осложнений и ограничимся, где это возможно, только простейшим типом мономерного фермента. Белок этого типа — обычно большая молекула, состоящая из одной полипептидной цепи, содержащей, возможно, несколько сот аминокислот и свободно существующая в растворе внутри клетки. Такой белок можно очистить до степени гомогенности (по нескольким различным критериям), используя хроматографические и электрофоретические методы, пригодные для разделения заряженных макромолекул в водной среде [5]. На этой стадии очистки при благоприятных условиях белок можно закристаллизовать. Многие ферменты, таким образом, становятся доступными в качестве вполне определенных органических соединений, удовлетворяющих обычным критериям чистоты, и они, естественно, могут быть синтезированы 6]. Они также могут быть получены в значительных количествах, i e хорошо изученные ферменты — например, трипсин, химотрипсин, лизоцим и рибонуклеаза — доступны в граммовых количествах. Значительное число других доступны коммерчески в миллиграммовых количествах. [c.450]

Рис. 8. Газо-хроматографический анализ гидролизата рибонуклеазы. Разделение аминокислот проводилось в виде N-TФA-мeтилoвыx эфиров на колонке (60x0,15 см) с 5% неопентилгликольсукцината, нанесенным на газ-хром Р. Начальная температура 65° С, при повышении температуры со скоростью 1,5° С/жии сразу же после ввода пробы после 20 мин — 2° С1мин после 42,5 мин — 4° С/мин. Скорость газа-носителя (Аг) — 18 мл мин [49].

Хроматографическое фракционирование рибонуклеазы методом распределительной хроматографии Около 5 мг кристаллической рибонуклеазы, приготовленной по методу с трихлоруксусной кислотой, хроматографируют на колонке диаметром 1,2 см, содержащей 6 г кизельгура (гифло суперсел). Адсорбент растирают с вдвое меньшим по весу количеством органической фазы расслоенной эмульсии из 56 г воды, 20 г сульфата аммония и 24 г мо-ноэтилового эфира гликоля, взбалтывают с водной фазой и вместе с ней вводят в колонку. При проявлении водной фазой происходит отчетливое разделение компонентов (рис. 255). 20 30 0 во Выделение рибонуклеазы в чистом виде [c.916]