Удельная активность фермента

Удельную активность фермента Рассчитывали, используя следующие формулы [c.382]

Расчет. Для того чтобы определить удельную активность фермента, сначала рассчитывают константу 1 реакции по формуле [c.289]

Удельная активность фермента—-— -ггр--== [c.55]

Дайте определение удельной активности фермента. [c.56]

Удельная активность фермента = =7,4 мкмоль/(мин-мг). [c.48]

При установлении степени очистки ферментного препарата необходимо рассчитать удельную активность фермента, характеризующую содер каиие фермента в исследуемом материале. Под удельной активностью понимают число единиц активности на единицу веса сухого препарата она выражается числом единиц на 1 мг белка. [c.198]

Ранее нами было обнаружено, что при пропускании раствора гиалуронидазы через колонку с хитином происходит сорбция балластных веществ и, возможно, ингибиторов фермента, что приводит к увеличению удельной активности фермента. Использование обнаруженного нами факта при разработке технологии очистки гиалуронидазы требует дальнейшего изучения этого процесса и, в частности, определения емкости сорбента. Для этого на колонки с одинаковым объемом сорбента наносили различные количества фермента. Результаты экспериментов сведены в таблице. [c.95]

Международного биохимического союза рекомендован единый условный способ выражения абсолютных количеств фермента. За единицу количества фермента (Е) принимается такое его количество, которое катализирует превращение 1 мкмоля субстрата в 1 мин в стандартных условиях действия фермента (температура 25°, оптимальная концентрация субстрата и оптимальное значение pH). Производными единицами являются кило-Е (1000 Е) и милли-Е (0,001 Е). Содержание фермента в биологическом материале и в выделяемых ферментных препаратах может быть выражено числом единиц фермента на 1 мг веса или 1 мг белкового азота. Эта величина носит название удельной активности фермента. Сам по себе этот термин нельзя признать вполне удачным, поскольку здесь идет речь о содержании фермента в материале. Термин активность правильнее относить к свойствам фермента (см. ниже раздел Активность ферментов ). [c.10]

При кристаллизации в ряде случаев происходит увеличение удельной активности фермента или (и) освобождение от примесей сопутствующих ферментов. Поэтому данную стадию можно рассматривать как один из способов очистки энзимов. [c.205]

Обычный ход выделения и очистки фермента, возрастание его удельной активности, выход на отдельных этапах видны на схеме, приведенной на стр. 210. Для получения высокоочищенного препарата чаще всего приходится применить 6—12 операций (чем их меньше, тем, естественно, лучше). При этом удельная активность фермента может быть повышена в сотни и даже тысячи раз, но потеря активности при этом может составлять до 90% и даже больше. [c.139]

Для выражения активности в практической работе с ферментами часто пользуются произвольными понятиями удельной и молярной активности. Удельную активность фермента принято выражать числом единиц ферментативной активности на 1 мг белка (или числом каталов на 1 кг активного белка). Количество молекул субстрата, подвергающихся превращению одной молекулой фермента в продукт в процессе реакции в единицу времени при полном насьш1ении фермента субстратом, принято называть числом оборотов фермента, или молярной активностью (молярная каталитическая активность выражается в каталах на 1 г-моль фермента). Одна молекула каталазы эритроцитов способна, например, расщепить в 1 с 44000 молекул перекиси водорода . [c.158]

От молекулы папаина можно отделить две трети составляющих ее аминокислотных остатков без изменения специфичности и удельной активности фермента. Многие другие ферменты также удается в значительной степени модифицировать, так что утраты активности фермента при этом не произойдет. Эти факты, показывающие, что число аминокислотных остатков, обусловливающих каталитическую активность фермента, невелико, дают нам надежду, что вскоре можно будет создавать ферменты для органических синтезов или даже исправлять врожденные ошибки в обмене веществ. [c.107]

Удельную активность фермента принято выражать числом единиц ферментативной активности на 1 мг белка. [c.81]

Метод ионообменной хроматографии в сочетании с электрофорезом применяется при разделении максимально очищенных смесей белков и гормонов из частично очищенных препаратов. На последней стадии очистки часто применяют метод кристаллизации. Для этого добавляют к концентрированному раствору фермента насыщенный раствор сернокислого аммония или спирт до заметного помутнения. Затем раствор оставляют стоять без помешивания несколько дней на холоде или при комнатной температуре до выпадения кристаллов. Выпавшие кристаллы отделяют и повторяют перекристаллизацию, каждый раз измеряя удельную активность фермента. Первоначально полагали, что кристаллические ферменты являются чистыми, свободными от примеси соединениями. Но вскоре было установлено, что степень чистоты многих кристаллических ферментов не превышала 50%, [c.128]

В начале этого века, когда появились методы определения удельной активности ферментов, были начаты работы по выделению из клеточных экстрактов отдельных ферментов, катализирующих ту или иную реакцию, и выяснению их химической природы. При выделении фермента обычно проводят фракционирование экстракта с помощью какого-нибудь химического метода, а затем определяют ферментативные удельные активности полученных фракций. Любая фракция, ферментативная удельная активность которой выше, чем в исходном, нефракционированном экстракте, считается обогащенной ферментом. Эту фракцию можно затем подвергнуть второму циклу фракционирования в надежде, что одна из полученных при этом фракций будет обладать еще более высокой удельной активностью [c.82]

Содержание ферментов в ферментных препаратах определяется числом единиц фермента на 1 мг или 1 г препарата или на 1 мг белкового азота. Данная величина называется удельной активностью фермента, являющейся весьма произвольной величиной. [c.27]

Фиксировано меченого азота атмосферы, хг Удельная активность фермента [c.218]

Нами было обнаружено, что гиалуронидаза не сорбируется на хитине, в то же время хитин сорбирует балластные вещества из препарата, ЧТО приводит к увеличению удельной активности фермента. Перед использованием хитин отмывали 0.1 М уксусной кислотой (pH 2.9), затем физиологическим раствором (ФР). Активность гиалу- [c.96]

Получают препарат II изозима гексокиназы из растворимой клеточной фракции скелетных мышц крысы. После определения белка микробиуретовым методом оценивают удельную активность фермента, а также степень очистки. При этом учитывают, что на долю II изозима гексокиназы приходится 60% от общего содержания фермента в растворимой клеточной фракции скелетных мышц. [c.376]

В приведенных ниже примерах с р-галактозидазой в качестве источника ферментов использовали обработанные толуолом клетки Е. соИ. Методика определения удельной активности фермента и обработка клеток толуолом описаны в разд. 18.2.8. [c.392]

Эти же процедуры по стандартизации следует провести с клетками культуры Б. После расчета ферментативной активности, приходящейся на единицу биомассы (1 мг или 1 мкг сухого веса или одна единица оптической плотности при 420 нм), и сравнения полученных результатов с результатами для клеток культуры А определяют удельную активность фермента, присутствующего в каждой культуре. Клетки культуры Б, подвергавшиеся катаболитной репрессии, имеют более низкую по сравнению с клетками культуры А активность р-галактозидазы на единицу биомассы. [c.394]

С особой убедительностью энергетическая природа эффекта аггравации выявляется весьма отчетливой зависимостью между удельной активностью ферментов (т. е. числом превращающихся молекул субстрата на одну активную группу фермента или на одну молекулу в одну секунду) и тепловым эффектом энзиматической реакции Рреакц (см. табл. 3 и прямую / на рис. 2). Это приводит к важному результату, что удельная активность ферментов ферм. рассчитанная на одну простети-ческую группу, может быть выражена для ряда ферментов общей показательной функцией от теплового эффекта катализируемой реакции [c.51]

В подобной системе существуют два разных типа иммобилизованных тетрамеров в первом из них связь с носителем образуют субъединицы одного димера, во втором — по одной субъединице из разных димеров. В диссоциирующих условиях тетрамер I типа переходит в два димера иммобилизованный и растворимый (который в дальнейшем удаляется при промывании), тетрамер II типа остается неизменным. Таким образом, при иммобилизации ГАФД через две субъединицы возможно получить систему, содержащую одновременно димеры и тетрамеры. Корреляция удельной активности фермента с рассчитанным количеством образовавшихся димеров и сохранившихся тетрамеров позволяет судить об активности димерной формы. [c.384]

Рассчитывают удельную активность фермента. Для этого надо знать содержание ферментного препарата в 1 мл пробы и концентрацию белка в нем. Так, если в 4 мл пробы содержится 0,4 мл ферментного препарата, то в 1 мл пробы — 0,1 мл фермента. Концентрацию белка в ферментном препарате определяют заранее биуретовым методом или пользуются готовым результатом. Например, концентрация белка в ферментном препарате [c.48]

В некоторых случаях при 6- 1 удельная активность ферментов в адсорбционных слоях падает не до нуля, а до некоторого предельного значения, что отвечает в простейшем случае более высокой активности изолированных глобул на носителе и примерно одинаковой активности каждой глобулы в ассоциате любого состава. Такие данные наблюдались для сукцинатдегидрогеназы на гидрофильном лецити-новом монослое (С+лец) [11] и цитохрома с на той же поверхности [10] (см. рис. 48). В работе [71 для глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы на гидрофобном лецитиновом монослое (ЗЮа+лец) наблюдалось прохождение удельной активности через максимум. Это можно сопоставить с преимущественной активностью парных ассоциатов фермента и малой активностью остальных комплексов. Все-таки общее количество [c.293]

С помощью описанного выше теста на треониндегид-ратазу измеряют удельную активность фермента в клетках, выращенных в течение ночи в трех описанных выше средах. В культуре 2 должна выявляться более низкая ферментативная активность, чем в культуре L Культура 3 будет подвергаться дерепрессии относительно культуры 2 из-за постепенного снижения внутриклеточной концентрации L-изолейцина (содержание L-изолейцина в культуре 3 понижено с самого начала, и, кроме того, его поглощение ингибируется двумя другими аминокислотами). [c.417]

Удельная активность фермента. Количество микромолей субстрата, преобразуемое препаратом фермента в 1 мин в расчете на 1 мг белка при 25°С. [c.1020]

Осадок между 40 и 90% насы-ш ения растворяли в небольшом количестве фосфатного буфера (pH 7 и пропускали через колонку сефадекса Ж-50 для отделения нжзкомолекулярных соедийений и снижения моляр-ности раствора. Последующее пропускание белка через колонку Ж-200 позволяет разделить полифенолоксидазу на две части (рис. 3). Однако при этом не происход ит существенного увеличения удельной активности ферментов. Поэтому в целях дальнейшей очистки белок вносится в колонку ДЭАЭ-целлю-лозы. [c.157]

В истинных металлоэнзимах ион металла прочно связан в строго определенных стехиометрических соотношениях с теми или иными химическими группировками апофермента (или с простетической группой, например порфнриновой). При диализе раствора металлоэнзима (или при обработке его ионообменными смолами) обычно не происходит отделения металла от белка и не обнаруживается снижения удельной активности фермента. [c.135]

Таким образом, выделенные препараты фермента катализируют in-vitro фиксацию атмосферного азота с образованием аммиака в качестве конечного неорганического продукта фик-сации,- Неизмельченные клубеньки, изолированные от корней люпина за 24 часа до опыта, и взвесь бактерий Rhizobium, выделенных из клубеньков люпина, не фиксировали азота. Удельная активность фермента обычно выражается числом -оборотов, т. е. числом молей субстрата (в данном случае N2), прореагировавшего за 1 минуту с одним молем фермента. Для тех случаев, когда молекулярный вес фермента неизвестен, его принимают за 100000. [c.216]

При работе с ферментами большое значение имеет загрязнение препаратов неактивными белками. Если адсорбция фермента определяется по убыли каталитической активности исходного раствора, то количество активного фермента, перешедшего из раствора на поверхность, определяется точно и не зависит от примесных белков. Хотя фактическая степень заполнения белкового слоя естественно окажется выше (в связи с присутствием неактивнных белков), экстраполяция к 0 = О дает истинную величину весовой удельной активности А (0), на которую не влияет присутствие посторонних белков, поскольку при малых степенях заполнения происходит диссоциация всех комплексов. Однако в подобных случаях иногда можно прийти к неправильному заключению о повышении удельной активности фермента на носителе при одинаковых значениях этой величины для раствора и адсорбционного слоя, так как наличие неактивных белков всегда занижает удельную весовую активность препарата, взятого в виде водного раствора фермента. [c.294]

Часто пгхоцят удельную активность фериептоъ, которая определяется как отношение числа единиц фермента в образце к его массе. Например, если в 1 г ткани печени содержится 140 ед. лактатдегидрогеназы и 200 мг белка, то удельная активность фермента равна 140/200 = = 0,7 мкмоль/(мин мг). Удельной активностью часто пользуются при очистке ферментов по мере удаления посторонних белков доля выделяемого фермента в препарате увеличивается, следовательно, возрастает его удельная активность. По возрастанию удельной активности оценивают эффективность отдельных стадий очистки. [c.113]

При определении удельной активности фермента в клетках необходимо учитывать ряд факторов. Прежде всего, следует использовать насыщающие концентрации субстратов. В этом случае возможно определение количества единиц ферментативной активности, присутствующих в данном препарате, при условии линейной зависимости активности как от времени реакции, так и от количества присутствующего фермента. Выполненйе этого условия проверяют эмпирически для каждого -слу- [c.391]

Разработаны методы культивирования Breviba terium sp., обеспечивающие высокую декарбоксилазную активность, участвующую в синтезе лизина. Наибольшая удельная активность фермента на полусинтетической среде наблюдается через 18— 20 ч роста культур, т. е. в конце экспоненциальной фазы, на ме-лассной — в середине экспоненциальной фазы роста. [c.348]

Результаты исследования влияния общего рентгенов ского облучения на функциональные свойства Ыа , К -АТФазы мембраи клеток печени крысы показали, что торможение удельной активности фермента отмечается в течение длительного времени (1ч — 60 сут) после прекращения воздействия радиации. Яе-рез 1 ч потеря активности фермента составляла 87 %. Через 30 и 60 сут у выживших животных наблюдалась полная инактивация фермента. [c.145]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология