Флуоресцентные антитела

Рис. 4.17. Политенные хромосомы дрозофилы, обработанные флуоресцентными антителами, связывающимися с 7-ДНК. А. Поперечная исчерченность политенных хромосом на фотографии, сделанной в фазово-кон-

Чрезвычайно чувствительный и избирательный иммуноанализ используется при определении концентраций молекул, к которым могут быть получены антитела. Иммобилизация исследуемого вещества или антитела приводит к значительному упрощению иммуноанализа (радиоиммуноанализ, ферментативный иммуноанализ и метод флуоресцентных антител). [c.380]

Метод непрямой окраски флуоресцентными антителами используется в АТСС в качестве одного из способов подтверждения вида линии клеток. Техника окрашивания включает два этапа. На первом из них из сыворотки кролика получают ви- [c.118]

Области применения методики флуоресцентных антител крайне многочисленны, поэтому приводим лишь некоторые примеры а) локализация антигенов в тканях, в том числе выявление антигенов пневмококков, риккетсий и патогенных вирусов б) специфическое выявление микроорганизмов (серологическая идентификация) в) выявление специфических антител в тканях и жидкостях организма г) локализация гормонов в клетках разных органов и тонкая локализация. [c.292]

В цитоплазме интерфазных клеток, растущих в культуре, микротрубочки можно выявлять с помощью флуоресцентных антител к тубулину, обрабатывая ими клетки после фиксации. Больше всего микротрубочек вокруг клеточного ядра, от которого они расходятся к периферии подобно нитям тонкой паутины (см. рис. 10-61). Места, из которых вырастают микротрубочки, будут лучше всего видны, если после деполимеризации колхицином позволить им некоторое время расти вновь, а затем фиксировать препарат (рис. 10-48). Регенерирующие микротрубочки сначала появляются в виде одной или даух небольших звездчатых структур, после чего происходит их удлинение в сторону клеточной периферии, пока не восстановится первоначальная картина. Если в культивируемых клетках вызвать образование крючкообразных в поперечном сечении структур (для определения полярности), окажется, что у всех микротрубочек свободными остаются плюс-концы, а минус-концы прикреплены к точке инициации роста, т.е. к центру организации. [c.106]

В непрямом методе антитела не сочетаются с флуорохромом. Вместо этого после взаимодействия антител с антигенами в фиксированных препаратах клеток к ним добавляются анти-гамма-глобулиновые антитела, конъюгированные с флуорохромом. Этот метод более чувствителен и позволяет избежать конъюгации каждого индивидуального антитела с флуоресцентным красителем. Так, одни и те же флуоресцентные антитела к антителам кролика (полученные у овец против кроличьих гамма-глобулинов) могут быть использованы для окраски любых антител, образующихся у кроликов и взаимодействующих с вирусными антигенами в продуктивно зараженных или трансформированных клетках. [c.208]

Метод флуоресцентных антител с использованием флуоресцеина [c.208]

Добавление флуоресцентных антител анти-СЗ [c.533]

Иммунологические методики для локализации веществ в клетках, тканях и молекулах флуоресцентные антитела и антитела, связанные с ферритином [c.272]

Примеры использования иммунологических методов в биологическом анализе 263 Примеры использования радиоиммунологического анализа 269 Иммунологические методики для локализации веществ в клетках, тканях и молекулах флуоресцентные антитела и антитела, связанные с ферритином 272 Список литературы 272 Задачи 273 [c.577]

По данным электронной микроскопии, актиновые филаменты состоят из двух цепей глобулярных молекул, имеющих диаметр около 4 нм и образующих двойную спираль, на каждый виток которой приходится 13,5 молекулы (рис. 10-7 и 10-8). Эти цепи составляют основу тонких филаментов скелетных мышц, что следует из результатов рентгеноструктурного анализа и окрашивания 1-дисков флуоресцентными антителами к актину. Однако тонкие филаменты мьшщ состоят не только из актина-они содержат также несколько других белков (см. ниже, разд. 10.1.12). [c.79]

Для энкефалинов выполняются некоторые, но не все, основные критерии для медиаторов с помощью флуоресцентных антител опиатные пептиды были определены гистохимически среди других тканей в дорсальном спинном мозге, т. е. в области, ответственной за проведение болевых сигналов. Они найдены в малых промежуточных нейронах, но не на главных нервных путях, где роль медиатора выполняет другой нейропептид — вещество Р (см. ниже). Это позволяет предположить, что опиатные пептиды могут ингибировать пресинаптическое высвобождение вещества Р (гл. 9). Высокие концентрации энкефалинов присутствуют также еще в одной области — в той части лимбической системы, которая, как известно, участвует в регуляции эмоций. Здесь выполняются и другие критерии для медиатора высвобождение при электростимуляции и имитация электростимуляции вводимым извне пептидом. В качестве тест-систем, которые ингибируются эндогенными и экзогенными опиатами, использовались при этом сокращения подвздошной кишки морской свинки или семявыводящего протока мыши. [c.233]

Однако если культура ведется при низкой плотности клеток в другой, ие совсем стандартной среде на протяжении нескольких недель, в ней неуклонно возрастает доля клеток, подвергающихся фундаментальному изменению вместо коллагена типа II, характерного для хряща, они начинают синтезировать коллаген типа I, характерный для фибробластов. Эти два типа коллагена (их можно различить с помощью флуоресцентных антител) являются продуктами разных генов. По-видимому, в таком опыте часть хондроцитов преЩ)а-щается в фибробласты. За один месяц почти все клетки, растущие в культуре с низкой плотностью, переключаются на синтез коллагена I. Это переключение, видимо, происходит внезапно, так как лишь в очень немногих клетках можно наблюдать одновременный синтез обоих коллагенов. [c.133]

Для выявления специфических молекул в клетках нли тканях и для опреде леиия их локализации можно использовать радиоактивные и флуоресцентны антитела, а также антитела, соединенные с ферментом. В этих случаях связанные антитела вдентифицируют с помощью радиоавтографии, флуорео центной микроскопии или по окрашенному продукту ферментативной peat-ции (см. гл. 4). [c.28]

Рис. 7-3. А. Световая микрофотография цепочек вытянутых митохондрий в живой клетке в культуре ткани млекопитающего. Клетка обработана витальным флуоресцентным красителем (родамином 123), специфически окрашивающим митохондрии. Б. Иммунофлуоресцентная микрофотография той же самой клетки, обработанной (после фиксации) флуоресцентными антителами к микротрубочкам. Обратите внимание, что митохондрии располагаются в основном вдоль микротрубочек. Масштабный отрезок 10 мкм. (С любезного разрешения Lan Во hen )

Пример 2-3. Метод флуоресцентного антитела, С антителами, полученными против частей клеток или белков, может ковалентно связываться флуоресцеин (рис. 2-20). Прибавление такого флуоресцентного антитела к тонким срезам тканей или к клеткам, которые в результате обработки кислотой или ацетоном стали проницаемыми для белка, позволяет локализовать эти вещества. Например, вирусные антигены, компоненты клеточных мембран, гистоны и многие другие вещества можно локализовать этим методом в отдельных клетках или тканях. Белки мышечных волокон, актин и миозин, можно надежно различить при использовании антиактина и антимиозина со связанным флуоресцеином. [c.55]

В химических синтезах различных соединений обычно существует необходимость отделения продукта от реагентов. Например, при получении флуоресцентных антител (гл. 2 и 10) в результате реакции антитела с изотиоцианатом флуоресцеина [c.202]

Для немышечных клеток контроль над сборкой и разборкой миозиновых комплексов имеет особое значение, так как в них сократительные структуры из актиновых филаментов и миозина нередко образуются лишь дпя вьшолнения какой-нибудь специальной функции, после чего снова разбираются. В частности, при делении клетки под ее мембраной появляется так называемое сократимое кольцо - поясок из актиновых филаментов и миозина. Именно за счет его сокраш ения посередине клетки образуется перетяжка, что ведет затем к разъединению двух дочерних клеток (рис. 11-27 см. также разд. 13.5.14). Поскольку сократительное кольцо не является постоянной клеточной структурой, оно должно формироваться в начале деления. Этот процесс можно наблюдать, окрашивая деляшиеся клетки флуоресцентными антителами к миозину. Например, в готовых к делению яйцах морского ежа молекулы миозина вначале равномерно распределены под плазматической мембраной, а затем, по мере образования сократхггельного кольца, мигрируют в экваториальную область распределение их снова становится дисперсным, когда деление клетки завершилось. Каким образом этот процесс контролируется - неизвестно. [c.271]

Когда мембранные органеллы цитоплазмы быстро перемещаются с места на место, они движутся по белковым дорожкам , с которыми соединены специальными мостиками. Как мы уже говорили, движение вдоль мнкротрубочек осуществляется с помощью кинезина и динеино-подобных белков (разд. 11.4.9), а вдоль актиновых филаментов с помощью миозиноподобных белков (разд. 11.2.4). Кластеры рибосом в цитозоле тоже нередко находятся в ассоциации с филаментами гри экстрагарованни клеток неионными детергентами значительная часть аппарата белкового синтеза остается связанной с цитоскелетом. Даже растворимые ферменты, в том числе некоторые ферменты гликолиза, по-видимому, сидят на специфических участках миофибрилл в мышечных клетках и стрессовых волокон в фибробластах, и здесь их молено выявить с помощью флуоресцентных антител. [c.322]

Рис. 17-38. Два последовательных среза одного участка мышцы взрослой курицы, окрашенные флуоресцентными антителами, специфическими для двух разных изоформ миозина. Л. Белые (быстро сокращающиеся) клетки окрашены антителами к быстрому миозину. Б. Красные (медленно сокращающиеся) клетки окрашены антителами к медленному миозину. (G. Gauthieret а ., J. ell Biol, 92, 471-484, 1982.)

Справочник химика 21

Химия и химическая технология