Цитометрия проточная клеток

В проточных цитометрах исследуемые клетки или клеточные фрагменты, находящиеся в суспензии, тем или иным способом вводятся в центр узкого ламинарного потока несущей жидкости. Благодаря тому что расход несущей жидкости устанавливается значительно большим, чем расход суспензии с клетками, в сформированном потоке клетки идут одна за другой, в среднем на очень большом по сравнению с их размерами расстоянии. Скорость потока 5—10 м/с, его диаметр обычно составляет 50—150 мкм. Отрезок пути, где происходит измерение, отдельная клетка проходит за время от 1—2 до 30—50 мкс в зависимости от конструкции прибора. Импульсы соответствующей длительности образуются на выходе датчика (или датчиков, если измеряется несколько параметров [c.136]

Проточная цитометрия регистрирует один или более сигналов от каждой индивидуальной частицы, проходящей через световой луч. Следовательно, клетки суспендируют до одиночных, и в суспензии не должно содержаться агрегатов или клеточных обломков. Краситель должен быть специфичным и не вытекать из клеток в среду. [c.197]

Клеточная суспензия может быть использована как в виде живых интактных клеток, так и в фиксированном состоянии. Фиксированные клетки используются для дальнейшего окрашивания и последующего анализа проточной цитометрией. Наиболее часто используется фиксация этанолом. [c.201]

Функционирование иммунной системы обеспечивается клетками многих типов. Совершенно очевидно, что понимание процессов иммунного ответа требует знания того, какие клетки принимают в них участие и взаимодействуют друг с другом. Один из подходов к изучению иммунной системы, которому отдавалось предпочтение в последние несколько лет, состоял в применении клонального анализа, например методов лимитирующих разведений с использованием клональных клеточных линий. Другой подход, который ни в коей мере не подменяет клональный анализ, а скорее дополняет его, заключается в определении гетерогенности популяций по экспрессируемым маркерам клеточной поверхности. В рамках этого второго подхода весьма популярными стали методы проточной цитометрии и сортировки клеток. [c.326]

Задачей проточной цитометрии являются идентификация субпопуляций клеток, определение частоты их встречаемости и получение различных количественных характеристик субпопуляции. Например, при окрашивании спленоцитов антителами против иммуноглобулинов можно отличить клетки с поверхностными иммуноглобулинами от клеток, не содержащих поверхностных иммуноглобулинов определить число клеток каждой из таких субпопуляций выяснить, как много иммуноглобулинов находится на клеточной поверхности (в относительных или абсолютных величинах). [c.326]

В блоке обработки поступающие от детектора сигналы усиливаются, сравниваются на основе выбранных критериев и в зависимости от результатов сравнения производят одно из двух описанных ниже действий, оба эти действия сразу или не производят ни одного из них 1) сигнал посылается на оптическую скамью и клетка отбирается 2) зарегистрированные параметры для клетки посылаются в блок сбора данных. В большинстве проточных цитометров процессинг инициируется, когда сигнал светорассеяния превышает фон на определенное пороговое значение. Поскольку клетки большинства типов дают интенсивный сигнал светорассеяния, включение процессинга по светорассеянию обеспечивает регистрацию данных для всех жизнеспособных клеток. Это важно для оценки доли позитивно или негативно окрашенных клеток в популяции. [c.329]

Для каждого реагента, используемого в проточной цитометрии, необходимо подбирать оптимальную концентрацию. Это можно сделать, обрабатывая клетки, заведомо способные окрашиваться данным реагентом, растворами реагента разной концентрации (рис. 20-8). При высоких концентрациях реагента часто наблюдаются эффекты неспецифического окрашивания. На рис. 20-8, А левый крайний пик существенно сдвинут по отношению к положению того же пика на рис. 20-8, Б—Г. Правильная концентрация реагента — это наименьшая концентрация, при которой пик позитивных клеток имеет максимальную илн близкую к ней интенсивность окрашивания (рис. 20-8, в данном примере). [c.353]

Проточная цитометрия. Метод анализа клеточных популяций в суспензии, основанный на выявлении различий между клетками по маркерам поверхности. [c.562]

Разделы сборника, посвященные методам элютриации и проточной цитометрии, заинтересуют в первую очередь исследователей, работающих в области молекулярной биологии клетки. Эти два новых метода хотя и требуют дорогостоящего оборудования, но зато позволяют получать принципиально новые результаты. При чтении главы о проточной цитометрии особое внимание следует обратить на возможные сферы применения этого метода сравнительный анализ ответов индивидуальных клеток на те или иные воздействия и отбор индивидуальных клеточных популяций, идентичных по тому или иному параметру. В настоящее время, когда появляется все больше данных о гетерогенности клеток в тканях и даже в клеточных культурах, использование проточной цитометрии в сочетании с современными методами клонирования клеток сулит весьма увлекательные перспективы. [c.5]

Чрезвычайно эффективной альтернативой седиментацион-ным методам разделения клеток является электронная сортировка клеток, меченных моноклональными антителами к поверхностным маркерам [гл. 6]. В качестве примера можно привести исследования Ватта с сотрудниками [И], описавших дифференциальное связывание двух моноклональных антител с кроветворными клетками. При последовательной обработке этими антителами удалось выделить с помощью проточной цитометрии популяцию клеток, на 60% обогащенную эритроид-ными предшественниками. Этот метод обеспечивает получение небольшого количества клетак за короткий промежуток времени по сравнению с методом элютриации. Аппаратура для сортировки клеток требует больших материальных затрат как при приобретении, так и при эксплуатации. [c.168]

Чтобы отличить клетки в S-фазе от клеток, находящихся в других фазах цикла, можно использовать включение тимидина, меченного тритием, в ДНК с последующим выявлением изотопа (радиоавтографией или с помощью сцинтилляционпого счетчика). Однако в настоящее время наиболее точный и полный анализ разделяемых клеток может быть проведен с помощью проточной цитометрии (см. гл. 6). [c.178]

Профиль проточной цитометрии для асинхронно делящихся клеток HL60 приведен на рис. 5.5. Этот профиль типичен для постоянных линий клеток, хотя клетки HL60 гетерогенны по содержанию ДНК. 2-10 таких клеток были загружены в ро- [c.178]

Для оценки жизнеспособности разделяемые эритролейкозные клетки в фазе G1 могут быть культивированы в элютриаци-онном буфере (полная среда) при 37,5 °С. Через различное время культивирования отбираются пробы для анализа в проточном цитометре. Получаемые профили (рис. 5.6) свидетель- [c.179]

III. После окрашивания пропустите клетки через проточный цитометр, возбуждаемый ртутной лампой (100 Вт) с запирающим фильтром В012 (3 мм) и одиночным фильтром К590. [c.204]

Стандартным флуорохромом, применяемым в проточной цитометрии, стал флуоресцеинизотиоцианат (ФИТЦ) благодаря тому, что он обладает многими из перечисленных выше свойств, а также тому, что он доступен. Самым серьезным недостатком -ФИТЦ является то, что клетки некоторых типов (например, клетки, культивированные in vitro) интенсивно флуоресцируют в области эмиссии ФИТЦ, и то, что квантовый выход для ФИТЦ невелик. Тем не менее с ФИТЦ удобно работать, и в большинстве случаев для него характерны высокие отношения сигнал/фон. [c.333]

Следует подчеркнуть, что маркеры, экспрессируемые лимфоцитами, можно обнаружить и на клетках иных линий. Так, С044 часто выявляется на клетках эпителия. Молекулы клеточной поверхности можно выявить с помощью флуоресцирующих антител, используемых в качестве зондов (рис. 2.9). На этом подходе основан метод проточной иммунофлуоресцентной цитометрии, позволяющей сортировать и подсчитывать клетки в зависимости от их размеров и параметров флуоресценции (см. гл. 29). С помощью этого метода удается проводить детальную сортировку популяций лимфоидных клеток. [c.23]

Теоретические и практические аспекты рассеяния света клетками и субклеточными частицами довольно полно рассмотрены в [66], а в работах [62, 63] дан обширный обзор рассеяния света бактериями и подобными им частицами. Принципы светорассеяния широко используют, например, при изучении морфологии ядер и клеток методом проточной цитометрии (измеряют рассеяние света вдоль и перпендикулярно потоку [91]), для обследования эпидермальных клеток гониометрическими методами [16],. лазерного контроля деформации эритроцитов [78]. Лазеры широко используют также для быстрого скрининга мочи на наличие в ней бактерий (бактериурия) нефелометрическим методом [6]. [c.542]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология