Среда Игла минимальная

ЛПС —липополисахарид грамотрицательных бактерий МСИ —минимальная среда Игла [c.469]

Данная концентрация питательных веществ может поддерживать существование только определенного количества клеток. При истощении того или иного питательного вещества клетки часто могут использовать другие вещества, но на практике такой путь используется редко, поскольку он всегда сопровождается снижением скорости роста (например, при индукции альтернативных ферментов). Если минимальные среды, такие как МЕМ или основная базальная среда Игла, используются с сывороткой в качестве единственной добавки, то проблема истощения возникает скорее, чем при использовании полных сред (например, среды 199) или сред с добавками гидролизата лактальбумина, пептона или БСА (сред, включающих многие жирные кислоты). К питательным веществам, истощающимся в первую очередь, относится глутамин, частично вследствие его спонтанной циклизации до пирролидоновой карбоновой кислоты, а также в результате ферментативного превращения (ферментами сыворотки и клетск) в глутаминовую кислоту, лейцин и изолейцин. Диплоидные клетки человека почти уникальны по интенсивной утилизации цистина. Многочисленные публикации об аргинине как лимитирующем факторе, по-видимому,, ошибочны вследствие частого загрязнения клеток микоплазмой. Напомним, что то или иное питательное вещество перед истощением начинает тормозить рост клеток. По мере снижения концентрации аминокислот клеткам становится все труднее-поддерживать достаточный внутриклеточный пул. Проблема [c.63]

Ж, Минимальная основная среда Игла [c.273]

ИЗ других источников углерода. Удаление любого из семи витаминов приводило к развитию симптомов недостаточности. Таким образом, Игл, используя метод культивирования клеток, продемонстрировал питательные потребности клеток мыши и человека. При культивировании клеток в БСИ среду необходимо обновлять, и поэтому БСИ была вскоре заменена на минимальную среду Игла (МСИ) (гл. 7 и приложение 1), в которой концентрация различных компонентов была повышена, что обеспечивало непрерывный рост клеток в культуре в течение нескольких суток без смены среды. [c.21]

Е. Минимальная основная среда Игла (МСИ) [c.348]

Базальная среда Игла (БСИ) требует ежедневной смены для поддержания непрерывного роста культуры, а минимальная среда Игла (МСИ) может поддерживать рост клеток в течение нескольких дней. [c.78]

МСИ минимальная среда Игла [c.242]

Готовят растворы фиколла в минимальной среде Игла в концентрациях, указанных в табл. 1, охлаждают до 4°С и доводят pH до 7,2. Если нужно, добавляют азид натрия до конечной концентрации 0,05% (см. разд. VI, В, 3). [c.258]

Двукратный концентрат минимальной среды Игла, модифицированной Дульбекко (Gib o, № 430-2100, прежде Н-21). Одиу упаковку порошка (13,4 г) растворяют в 500 мл воды, фильтруют через 0,45-микрометровую мембрану и хранят при 4 С. [c.293]

В настоящее время одним из лучших в этом отношении объектов являются культуры животных клеток. Эти в некоторой степени искусственные системы представляют собой отдельные клетки, выделенные из тканей какого-либо животного, которые в процессе адаптации к условиям существования in vitro претерпевают дедифференцировку с потерей специфических функций. Вместе с тем такие микрообъекты приобретают способность к стабильному самостоятельному росту, характер которого определен общими законами роста и развития популяции. Существует большое число таких перевиваемых клеточных линий, достаточно полно охарактеризованных и сохраняющих на протяжении многолетних наблюдений свои свойства. Что касается питательных сред, то, являясь в большинстве своем полусинтетическими, они компонуются на основе индивидуальных аминокислот и витаминов, растворяемых в глюкозо-солевом растворе при добавлении некоторого количества сыворотки крови (чаще всего крупного рогатого скота). Прописи используемых в настоящее время питательных сред созданы путем исключения тех компонентов в исходных, достаточно сложных питательных средах, которые не принимают участия в процессе роста популяции. Широко используемая в подобного рода исследованиях так называемая минимальная среда Игла или ее модификация—среда ПС [144] представляет собой минимальный набор компонентов, действительно необходимых для роста и размножения животных клеток. [c.230]

В 12 вращающихся бутылей Винчестер посеять по 2-10 клеток ВНКС13 в МСИТС (минимальная среда Игла с 10% триптозофосфатного бульона и 10% сыворотки теленка) и выращивать при 37 °С в течение 3 дней. [c.199]

МСИЮ минимальная среда Игла с 10% сыворотки теленка [c.242]

МСИП минимальная среда Игла с сывороткой плода крупного [c.242]

Обычно принималось, что клеточные культуры поддерживались в виде монослоя или суспензий, варьирующих по их ростовым свойствам in vitro, и что клетки со способностью расти в суспензии как агрегаты могут обладать более высокой онкогенной потенцией. Для клеток, растущих монослоем или в суспензии как и для клеток с их комбинированным ростом, можно подобрать условия культивирования. Методы и схемы субкультивирования и выбор среды, в которой клетки будут расти, крайне важны. Некоторые предназначены для роста клеток в суспензии. Культуральные среды, используемые для размнояшния клеток в монослое, высоко вариабельны, и специфический выбор особенной среды редко проводится исследователями. Например, обоснованно ли сравнивать свойства клеток, растущих в минимальной среде Игла, свободной от антибиотиков, но содержащей 10 % эмбриональной телячьей сыворотки, с клетками, растущими в среде Ham (F-10), содержащей 5 % телячьей сыворотки, 1 % лошадиной сыворотки, 10 % триптозофосфатного бульона, 1 % экстракта куриных эмбрионов и антибиотики. [c.192]

IMDM — модифицированная Исковым среда Дюльбекко МЕМ—минимальная среда Игла [c.9]

После центрифугирования супернатант удаляют, а клеточный осадок осторожно ресуспендируют в 5—10 мл полной культуральной среды, содержащей сыворотку плода коровы (СПК). Мы обычно используем минимальную среду Игла (МСИ), модифицированную Дульбекко (МСИД МсКеагп et al., 1984), с добавлением сыворотки, однако применение среды RPMI-1640 также дает хорошие результаты. Далее мы будем называть полную среду для гибридов средой МСИД. После слияния определяют число жизнеспособных клеток, которое является показателем эффективности методики (обычно выход >70—80% живых клеток). [c.181]

Суспензию клеток готовят в модифицированной Дульбекко минимальной среде Игла (МСИД), содержащей 20% СПК и 10% диметилсульфоксида (ДМСО). [c.461]

Бараньи эритроциты получали от одного и того же животного и выдерживали в растворе Олсвера при 4°С не меньше недели. Сгустки и нити фибрина удаляли. Для каждого опыта брали порцию эритроцитов и трижды отмывали в минимальной среде Игла, центрифугируя 10 мин при 800g. В 1 мл плотного осадка содержалось 2-10 эритроцитов. [c.254]

Для опыта брали селезенки не меньше чем от трех мышеи, помещали в пластмассовую чашку Петри с 10 мл холодной минимальной среды Игла (во льду). Держа селезенку за один конец пинцетом с тонкими изогнутыми браншами, надрезали ножницами ее соединительнотканную капсулу на другом конце. Через полученное отверстие другим тонким пинцетом выжимали клетки. При этом капсула защищает клетки от механического повреждения, возможного при прямом контакте с пинцетом. Энергичное пипетирование суспензии тонко оттянутой пастеровской пипеткой способствовало диспергированию клеточных агрегатов. Полученную суспензию оставляли на 10 мин в наклонно поставленной чашке Петри для осаждения оставшихся клеточных агрегатов. Затем две верхние трети суспензии, содержащие одиночные клетки, отбирали и трижды отмывали в среде Игла. После разрушения эритроцитов 57о Ной уксусной кислотой подсчитывали клетки с ядрами. Жизнеспособность клеток определяли, смешивая равные объемы клеточной суспензии и 1%-ного раствора эозина в ЗФР (обычно она составляла 70—90%). [c.255]

Стабильность розеток была тщательно проанализирована следующим образом. Два образца (по 10 мкл каждый) нефрак-ционированной суспензии розеток вносили в пробирки, содержащие 1 мл раствора для нанесения (0,17%-ный раствор фиколла в минимальной среде Игла). Один образец сразу же фиксировали, а другой на время фракционирования оставляли при 4°С и затем фиксировали. В каждом из этих препаратов определяли количество Т- и В-розеток в момент начала и конца фракционирования. Количество В-розеток в эти два срока было одинаковым, т. е. они все сохранялись. Высокая стабильность Т-ро-зеток наблюдалась только в том случае, если после ресуспендирования осадка розеток прибавляли 0,05% азида натрия (разд. У1,В,3). Выход розеток при фракционировании (разд. V, Б) определяли, учитывая их стабильность в нефракцио-нированной суспензии, оставленной при 4°С на весь период разделения. [c.262]

Среда должна быть изотонизирована и забуферена. В описанной здесь методике (см. разд. III, А) в качестве среды использовался трис-буфер, но пригоден и физиологический раствор, забуференный фосфатами (ЗФР). ГЭПЭС в среде без сыворотки может быть токсичным для клеток (см. гл. 21), поэтому прн разделении эритроцитарных розеток его не применяют. Для образования и последующего разделения розеток нужно использовать одну и ту же среду. Для оптимального выхода функционально активных РОК в среде должны быть аминокислоты — такие, которые содержатся, например, в минимальной среде Игла (см. разд. III, А) или в среде 199 (Dif o, Детройт, США). [c.269]

Сухая минимальная среда Игла (№ 5675-24 Dif o) Стеклянные пробирки на 5—10 мл (так называемые вассер-мановские) [c.288]

После того как выяснены условия воспроизводимого примирования, можно приступать к получению фактора. Суспензию селезенки, содержащую обученные Т-клетки, готовят в минимальной среде Игла с глутамином без отмывания. Если же Т-клетки необходимо отмыть или разделить на найлоновой вате, то в среду добавляют сыворотку плода коровы (10%). Взвесь клеток (Т, G)-A-L доводят до концентрации Ю мл и добавляют антиген. Оптимальную концентрацию антигена необходимо подобрать экспериментальным путем для (Т, G)-A-L она составляет 1 мкг/мл, для БЭ — 0,1 мл 0,1%-ной суспензии на 1 мл культуры. Чашки Петри, содержащие 2—3 мл суспензии, инкубируют 8 ч в атмосфере из 5% СОг и 95% воздуха при 37°С. Оптимальную продолжительность культивирования также подбирают эмпирически. Жизнеспособность обученных Т-клеток рекомендуется оценивать в начале и в конце культивирования с помощью трипанового синего. За это время должно погибать не более 20— 30% клеток. Если жизнеспособность клеток удовлетворительная, то клетки удаляют центрифугированием и надосадочную жидкость используют в качестве источника фактора Т-клеток. [c.330]

Минимальная основная среда Игла (МСИ) с набором солей по Эрлу, которую используют для системы А, представляет со бой модификацию исходной среды (Eagle, 1959). Концентрация хлорида натрия уменьшена до 100 мМ, а концентрация двухвалентных катионов — до 0,5 мМ. Среду готовят из двух концентратов. Другие добавочные ингредиенты можно купить у фирмы Gib o или Flow. [c.338]

Смотреть страницы где упоминается термин Среда Игла минимальная: [c.318] [c.318] [c.58] [c.75] [c.228] [c.229] [c.242] [c.9] [c.45] [c.13] [c.13] [c.13] [c.10] [c.10] [c.10] [c.10] [c.45] [c.227] [c.273] [c.292] [c.294] [c.254] [c.254] [c.255] [c.328] [c.366] [c.383]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология