Ферменты, определение манометрическое

Манометрический метод, разработанный О. Варбургом в 20-х годах для определения дыхания переживающих тканей, может быть использован и для исследования других обменных процессов, например гликолиза, дезаминирования, изучения ферментов и субстратов промежуточного обмена веществ. Метод позволяет определять изменение давления в замкнутой системе за счет выделения или поглощения в процессе реакции газообразного продукта. Этим замкнутым пространством служат сосудики разнообразной формы, присоединенные посредством шлифа к манометру, заполненному специальной, не смачивающей стенки манометра жидкостью. Зная объем замкнутого пространства V и измерив наступившее в результате реакции изменение давления к, можно рассчитать объем образовавшегося или поглощенного газообразного продукта. Измерения производят в аппарате Варбурга. [c.10]

Для определения активности холинэстеразы разработано много способов. Надежные результаты дают методы, основанные на определении количества образующегося продукта, в которых соблюдается линейная зависимость между активностью фермента и количеством образующегося продукта. Несмотря на то, что манометрический метод довольно сложен в выполнении, он в этом отношении (соблюдение линейной зависимости) еще не превзойден. Более простыми являются потенциометрические методы, которые дают весьма точные результаты, особенно при использовании автотитратора, автот матически поддерживающего постоянный pH, вследствие чего исключается влияние pH на активность фермента. Ниже приведен (см. также табл. 10) обзор различных способов определения активности фермента. Подробно описаны манометрический и потенциометрический способы как наиболее пригодные. [c.166]

Манометрический метод — определение количества газа, выделяющегося в результате ферментативной реакции. Этот метод (метод Варбурга) используется, например, для определения активности оксидаз (по поглощению кислорода) или декарбоксилаз (по выделению углекислого газа), а также ряда других ферментов. [c.198]

Некоторые исследователи, например из группы Гилмана и Джерарда, нашли, что при воздействии ДФФ на нерв можно подобрать такие концентрации яда (например, lO- Ai), при которых холинэстераза оказывается почти полностью угнетенной, а проведение не нарушается [4, 15, 25]. В результате возник спор по поводу экспериментальной техники. Группа Нахманзона считает, что манометрический метод недостаточно точен для определения низких уровней холинэстеразы (хотя Боярский и др. [4] в дальнейшем не нашли остаточной холинэстеразы и при использовании высокочувствительной методики, основанной на исчезновении ацетилхолина). Далее, они полагают, что в обработанном ДФФ нерве часто имеется избыток яда, который не находится в контакте с холинэстеразой. При гомогенизаций такой контакт происходит и-наблюдается высокая степень угнетения фермента, которая, по существу, является артефактом. При исключении этих факторов группа Нахманзона нашла, что проведение осуществляется только в том случае, есл-и в наличии имеется холинэстераза [7,9, 35]. Однако Крисцичелли и др. [15], Боярский и др. [4] и Гилман [26] тоже приводят экспериментальные доказательства в пользу того, что избытка ДФФ обычно не бывает. [c.186]

Важным доказательством того, что процесс угнетения соответствует кинетике первого порядка, служит независимость степени торможения от концентрации фермента. Это важно с практической, точки зрения, так как концентрацию фермента трудно определить, и ее величины значительно различаются в зависимости от метода определения (так, при манометрическом определении получаются низкие значения, а при электрометрическом — высокие). Несмотря на эти различия, все методики должны давать одинаковые величины константы скорости. [c.100]

Для определения активности ферментов применяют следующие основные методы спектрофотометрические, манометрические, прочие физические и физико-химические методы (поляри-метрия, вискозиметрия, потенциометрия, хроматография и электрофорез на бумаге). [c.125]

Манометрические методы используются главным образом при определении активности фермента в тех случаях, когда исследуемые реакции сопровождаются поглощением или выделением кислорода и углекислого газа. Это обычно ферментативные реакции, связанные с декарбоксилированием или процессами окисления субстрата кислородом. Манометрический метод применяется при определении дыхательного коэффициента. Наблюдение за ходом реакции во времени проводят чаще всего в манометрических аппаратах Варбурга различных конструкций. [c.126]

Приходится осваивать этот метод непосредственно в ходе проведения эксперимента. Поскольку манометрические методы позволяют осуществлять прямую и непрерывную регистрацию выделения или поглощения различных газов, таких, как кислород, водород, СОг, метан, а также ионы водорода, они находят широкое применение при исследовании гомогенатов тканей, клеточных и бактериальных суспензий и препаратов ферментов. Этот список можно дополнить косвенными методами, к которым относится, например, определение киназ на основе образования ионов водорода. [c.279]

Метод рН-стата был использован для определения холинэстеразы Гликом [39] в 1938 г. обзор возможности его применения дан в работе Якобсена и др. [48]. Достоинства этого метода — его точность и чувствительность. Особое преимущество данного метода состоит в том, что он позволяет вести реакцию при различном pH, включая и те области pH, которые лежат за пределами возможности бикарбонатного буфера (с помощью манометрического метода измерение можно производить только в области этого буфера). При этом методе исключается также нежелательное изменение pH, характерное для дельта-рН-метода. рН-Статный метод более пригоден, чем манометрический для измерения активности фермента при низких концентрациях субстрата, так как в этих условиях вследствие быстрого расщепления субстрата реакция заканчивается за 5 мин, а только с помощью рН-статного метода можно регистрировать процесс немедленно после добавления субстрата. Другое преимущество этого метода перед манометрическим или методом дельта-рН состоит в том, что здесь нет помех со стороны буферных веществ. Его недостатком является сравнительно медленное выполнение измерения, а также то, что он таит в себе все технические и аналитические трудности, связанные с техникой титрометрии. [c.435]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология