Варбурга аппарат

Рис. I. Манометр к аппарату Варбурга. у4—общий вид 5 —схема

Рис. 2. Сосудики к манометру аппарата Варбурга.

Фиг. 128. Аппарат Варбурга для манометрического измерения фотосинтеза.

Манометрический метод, разработанный О. Варбургом в 20-х годах для определения дыхания переживающих тканей, может быть использован и для исследования других обменных процессов, например гликолиза, дезаминирования, изучения ферментов и субстратов промежуточного обмена веществ. Метод позволяет определять изменение давления в замкнутой системе за счет выделения или поглощения в процессе реакции газообразного продукта. Этим замкнутым пространством служат сосудики разнообразной формы, присоединенные посредством шлифа к манометру, заполненному специальной, не смачивающей стенки манометра жидкостью. Зная объем замкнутого пространства V и измерив наступившее в результате реакции изменение давления к, можно рассчитать объем образовавшегося или поглощенного газообразного продукта. Измерения производят в аппарате Варбурга. [c.10]

Точность полученных на аппарате Варбурга результатов зависит от того, насколько тщательно определена величина константы. Имея это в виду, следует несколько раз повторить определение константы каждого сосудика и лишь при хорошем совпадении результатов взять среднюю величину. Как уже было сказано, величина константы определяется объемом газового пространства, в котором протекает реакция. Этот объем зависит от объема сосудика с прилегающими частями манометра до уровня манометрической жидкости (назовем его V) и от объема используемой в опыте реакционной смеси (У)). Объем газового пространства во время опыта будет равен Так как объем опытной жидкости и используемых реактивов, помещаемых в сосудик, экспериментатору известен, то для выяснения величины 1 —прежде всего необходимо определить объем сосудика с прилегающей к нему частью манометра вплоть до уровня манометрической жидкости, т. е. V. Каждое колено и-образной манометрической трубки имеет 300 делений. В правом колене, сообщающемся с помощью изогнутой под прямым углом отводной трубки ( коленчатого отростка ) с сосудиком, удобно при всех отсчетах устанавливать жидкость на делении 150. В таком случае под объемом сосудика, с прилегающей частью манометра, т. е. под объемом V, понимается сумма объемов сосудика а, вставки б, коленчатой капиллярной трубочки в, соединяющей сосудик с манометром, и манометрической трубки г, идущей от крана д до манометрической жидкости, заполняющей капиллярную трубку манометра и установленной на делении 150. [c.12]

Пробы 3, 6, 9 служат контролем и их не инкубируют в аппарате Варбурга. Доводят температуру в термостате до 26° С. Готовят раствор гексокиназы на 0,5 М глюкозе, исходя из расчета 0,5—1 мг гексокиназы на пробу (необходимое количество гексокиназы находят в предварительных опытах). Выделяют митохондрии из исследуемой ткани (с. 403). Во все сосудики разливают по 0,2 мл раствора гексокиназы в глюкозе и по 0,4 мл суспензии митохондрий, быстро притирают сосудики к манометрам и помещают их в термостат аппарата Варбурга. Включают качающий механизм и через 10 мин, в течение которых происходит выравнивание температуры, подводят жидкость в обоих коленах манометра до одного уровня (150—250), закрывают краны и приступают к определению поглощения кислорода. [c.468]

Для количественного определения пировиноградной кислоты реакцию ведут в кислой среде. Выделяющийся углекислый газ определяют манометрически в аппарате Варбурга по увеличению парциального давления (с. 10). В качестве источника пируватдекарбоксилазы используют экстракт пивных дрожжей. [c.29]

Манометрическое измерение БПК. При изучении процесса потребления кислорода применяют манометрические аппараты, например респирометр Варбурга. Недавно в продаже появились упрощенные лабораторные манометрические устройства (рис. 3.16), но они не заменяют стандартного метода разбавления при определении БПК. Пробы сточной воды определенного объема помещают в склянки из коричневого стекла, причем объем пробы зависит от ожидаемого значения БПК. При проведении обычных анализов буферные растворы и питательные вещества не добавляют к пробам, так как предполагается, что неразбавленная сточная вода содержит достаточное количество питательных веществ для биологического роста, а ее буферная способность вполне достаточна для предотвращения изменения pH. Каждую склянку снабжают небольшой магнитной мешалкой, а в крышку каждой склянки помещают чашку, содержащую поглотитель углекислоты — гидроокись калия. Подготовленные склянки соединяют со ртутными манометрами. Пробы непрерывно перемешивают с помощью магнитных мешалок. Установка для перемешивания снабжена электромотором, обеспечивающим вращение каждого магнита. После первичного перемешивания, необходимого для установления равновесного состояния, крышки склянок закрывают плотнее, а на манометры надевают завинчивающиеся крышки, чтобы не допустить влияния барометрических колебаний давления на результаты измерений. Когда микроорганизмы поглощают растворенный в воде кислород, газообразный кислород абсорбируется из воздуха, находящегося в замкнутом пространстве склянки. Молекулы углекислого газа, вырабатываемого микроорганизмами, поглощаются раствором гидроокиси калия, находящимся в чашке под крышкой склянки, и превращаются в ион карбоната. Вследствие этого объем углекислого газа в замкнутом пространстве склянки равен нулю. Уменьшение объема воздуха в склянке, соответствующее потребности в кислороде, указывается на шкале манометра, проградуированной непосредственно в единицах измерения БПК, мг/л. Для поддержания температуры 20° С, требуемой для проведения стандартного анализа на БПК, всю установку помещают в термостат. [c.82]

Описание аппарата Варбурга [c.10]

Манометры и сосудики. Манометры с пришлифованными к ним сосудиками — основная часть аппарата Варбурга. Манометры делаются из толстостенных стеклянных трубок, внутренний диаметр которых обычно равен 1 мм. Некоторые колебания размеров диаметра допустимы, однако нежелательно, чтобы они выходили за пределы от 0,8 до [c.10]

В почве без корней растений источником образования СОг, являются микроорганизмы, выделяющие его при дыхании. Этот углекислый газ определяют, улавливая баритом или в аппарате Варбурга. [c.169]

При наличии аппаратуры и достаточно квалифицированных сотрудников применение этих методов может быть весьма полезным для токсикологических лабораторий, так как они менее трудоемки, чем исследование на аппарате Варбурга, и позволяют проводить в день большое количество анализов. [c.230]

Для изучения обмена веществ в различных тканях и мелких организмах, микробах и пр. пользуются аппаратом, предложенным Варбургом. Принцип работы заключается в том, что срезы тканей или другие объекты помещают в особые сосудики, соединенные с манометрами, при помощи которых можно измерить поглощение или выделение газа по изменению давления в системе с постоянной температурой и постоянным объемом. [c.212]

Основной эскиз прибора, известного под названием аппарата Варбурга, показан на рис. 284. Маленькая колба (емкостью около 15 мл) с кольцеобразной вставкой в центре дна и с [c.364]

Определение пировиноградной кислоты. К исследуемому раствору пировиноградной кислоты приливают 0,1 объема ацетатного буфера (pH 5,0), к которому заранее добавляют 0,1 объема 0,5 М раствора КН2РО4. Перемешивают и 2 мл этого раствора помещают в основное пространство сосудика Варбурга (ставят не менее двух параллельных проб). В другие сосудики вносят по 2 мл бидистиллированной воды, подкисленной так же, как и исследуемый раствор (контрольные пробы). В боковые реторточки всех сосудиков помещают по 0,5 мл дрожжевого экстракта. Сосудики пришлифовывают к манометрам и погружают в термостатированную баню аппарата Варбурга, предварительно отрегулированную на 26° С. Краны манометров при этом должны быть открытыми, а сосудики полностью погружены в воду. Пускают качающий механизм. Через 5 мин (время, необходимое для выравнивания температуры) его останавливают, устанавливают жидкость в обоих коленах манометра на одном уровне (например, на уровне 100). Краны манометров закрывают и продолжают встряхивание, отмечая каждые 3 мин показания манометров до тех пор, пока выделение углекислого газа, не полностью удаленного из дрожжевого экстракта, станет небольшим и одинаковым в опытных и контрольных сосудиках. [c.30]

Колбочки помещают в термостат аппарата Варбурга при 28° С и выравнивают температуру в течение 15 мин. В каждую колбочку добавляют по 0,1 мл густой суспензии митохондрий (6—7 мг белка) и пробы инкубируют в течение 10 мин при перемешивании. По окончании инкубации их помещают в лед и после быстрого охлаждения их содержимое осторожно наслаивают на поверхность холодного 0,88 М раствора сахарозы. Предварительно охлажденную до 0°С сахарозу разливают по 5—7 мл в четыре центрифужных стаканчика от супернасадки центрифуги ЦЛР, стоящие во льду. Пробы центрифугируют при максимальной скорости вращения 10 мин. Верхний слой отсасывают пипеткой и отбрасывают, раствор сахарозы сливают и поверхность осадков осторожно споласкивают 0,3 М сахарозой, охлажденной до 0°С. В стаканчик добавляют по 1,5 мл 1 н. хлорной кислоты, осадки хорошо размешивают стеклянной палочкой и центрифугируют при 5000 в течение 15 мин. Супернатанты собирают в пробирки и экстракцию повторяют вновь в тех же условиях. Объединенные супернатанты нейтрализуют крепким раствором МН40Н. К нейтрализованным растворам добавляют по 2 мл метилового спирта, 2,5 мл 1 М аммиачного буфера, 0,2 мл раствора цианистого калия и 0,4 мл раствора эриохро-ма черного Т в метиловом спирте. Объем доводят до 10 мл аммиачным буфером. Определяют количество Mg + в пробах, измеряя оптическую плотность при 520 нм против раствора, не содержащего Mg +. Калибровочную кривую строят одновременно с обработкой опытных проб, используя в качестве стандарта титрованный раствор Mg l2. Область концентраций, в которой сохраняется линейная зависимость между количеством Mg + и оптической плотностью, — О—0,3 мкмоль Mg2+ на пробу. [c.457]

Определив потребление митохондриями неорганического фосфата и кислорода в аппарате Варбурга (с. 10), рассчитывают коэффициент фосфорилирования. Так как для достоверного определения кислорода и неорганического фосфата необходима довольно продолжительная инкубация митохондрий, в реакционную смесь обычно вносят АДФ-реге-нерирующую систему (чаще всего для этой дели используют гексокиназу с глюкозой). Это удобно также потому, что гексокиназа успешно конкурирует с митохондриальными АТФ-азными реакциями, которые могут сильно искажать результаты опытов, гидролизуя образующийся в ходе фосфорилирования АТФ. [c.467]

Предварительно определяют константы сосудов (с. 12). В день опыта, прежде чем приступить к выделению митохондрий, подготавливают аппарат Варбурга к работе. Для этого заполняют дополнительный резервуар сосудиков нарезанной фильтровальной бумагой и смачивают ее в 0,3 мл 10%-ного раствора КОН для поглощения СО2. Заполняют основное пространство сосудиковой средой инкубации по схеме [c.468]

В пробу № 11 добавляют 1 мл 1 М НСЮ4, затем во все колбы вносят по 0,2 мл суспензии митохондрий, помещают пробу № 11 в лед, остальные закрепляют в щтативе и инкубируют в термостате аппарата Варбурга 15 мин при температуре 26° С. После окончания инкубации во все пробы добавляют по 1 мл 1 М НСЮ4, колбы помещают в лед и [c.473]

Хорошо известным и широко распространенным способом измерения дыхания является манометрический метод Варбурга. Однако этот метод имеет ряд недостатков. К числу наиболее существенных относятся длительное время предварительной инкубации, необходимое для выравнивания тмпературы (10—15 мин), трудность автоматической регистрации. В связи с этим область применения манометрического метода ограничена, и для изучения быстрой динамики дыхания аппарата Варбурга оказывается непригодным. [c.480]

Ферментативные методы аминокислотного анализа основаны на определении продуктов реакции, которые образуются при биохимическом расщеплении аминокислот. Из-за их сравнительно низкой чувствительности (10 — 10 моль/л) зти методы применяют только при серийных анализах определенных аминокислот. К анализируемой смеси аминокислот добавляют специфическую декарбоксилазу (или же производяшле эту декарбоксилазу микроорганизмы), и получающуюся при декарбоксилировании углекислоту определяют манометрически в аппарате Варбурга. [c.67]

Дион [17] окислял различные препараты лигнина жидкостью Polyporus versi olor, культивированного в аппарате Варбурга. Он нашел, что жидкость давала реакцию на лакказу, но, вероятно, содержала также и другие энзимы. [c.682]

Мэсон и Кронин 155] также изучали роль полифенолоксидазы в биосинтезе лигнина из кониферилового спирта. Они обрабатывали в аппарате Варбурга раствор 4 микромолей кониферилового спирта в 2,8 мл 0,1 н. буферного фосфатного раствора при pH 6,8 и 4 (160 катехолазных единиц) грибной полифенолоксидазы Фрейденберга. [c.819]

Внимание Прн работе с NB возможен взрыв [141. Баракат и сотр. [151 нашли, что при обработке NE в водном растворе сс-амииокислоты (аланин) и двухосновные кислоты (щавелевая) декарбоксилируются с выделением брома. Лак [161 показал, что а-алнн1окислоты, пептиды н белки под действием NE (2 экв) в водном растворе количественно декарбоксилируются. Эта реакция заканчивается через 30 мин на аппарате Варбурга определяется количественное выделение СО.,. Единственный устойчивый продукт [c.136]

Состояние окислительных процессов можно изучать на тканевых срезах, гомогеиатах органов или митохондриях. Для изучения окислительных процессов в различных тканях пользуются аппаратом Варбурга (Н. П. Мешкова, С. Е. Северин, 1950 В. В. Умбрейт, 1951). [c.229]

В качестве дополнительных показателей отмечают цвет во дорослей и состояние клеток, фотосинтез и дыхание водорослей в аппарате Варбурга, количесшо хлорофилла А и Б. [c.46]

Для испытания токсичности сточных вод и растворимых в воде веществ, токсичных для водорослей, можно использовать манометрический метод с применением аппарата Варбурга. Манометрический метод является классическим в определении газообмена микроорганизмов и щироко применяется для изучения выделения и поглощения кислорода в процессах фотосинтеза и дыхания (Умбрейт и др., 1951 Вознесенский и др., 1965 Семихатова, Чулановская, 1965). Этот метод очень чувствительный позволяет обнаружить даже небольшие изменения количества выделенного или поглощенного кислорода при относительно высоком содержании его в атмосфере, что может служить весьма показательной характеристикой угнетающего или стимулирующего действия токсических веществ. Применение манометрического метода в токсикологических экспериментах обусловлено также и тем, что он очень удобен для изучения фотосинтеза и дыхания водорослей и других микроорганизмов от разных экспериментальных воздействий и внешних факторов. [c.229]

В течение нескольких последних десятилетий ряд исследователей, особенно Постернак с сотрудниками, вели обширные исследования процессов окисления циклических полиолов (цикли-тов) под действием A etoba ter suboxydans, причем была твердо установлена селективность микроорганизмов по отношению к аксиально расположенной гидроксильной группе. Предшествующие этому попытки [78, 79] связать такую селективность процесса окисления с наличием соседних заместителей работами не подтвердились [80]. Большая часть реакций проводилась в аппарате Варбурга ряд реакций, давших реальные продукты (выделенные, как правило, в виде производных), приведены в качестве примера ниже (в формулах черточками изображены атомы водорода) [c.178]

Суспензии хлоропластов, способные восстанавливать на свету хиноны и окисное железо (реакции Хилла и Варбурга), не восстанавливают фотохимически нитраты. 2. Зеленые листья, богатые углеводами, слабо восстанавливают нитраты в темноте, несколько сильнее на свету в атмосфере ез СО2 и сильно на свету в атмосфере с СО. Таким образом можно считать, что восстановление нитратов осуществляется активными продуктами первичного восстановления СО2 (коассимиляция СО2 и N63). 3. Такая же зависимость установлена для синтеза белков. 4. Качество света (красный и синий) не влияет на скорость восстановления нитратов, но синий свет благоприятствует относительно более интенсивному синтезу белков. Это заставляет предполагать наличие не только основной первичной, но и вторичных фотохимических реакций, определяющих ход поздних стадий образования прямых продуктов фотосинтеза, к которым надо отнести и часть белков, а также и некоторые другие соединения. Таким образом результаты работы фотосинтетического аппарата растений многообразны и зависят от условий питания, освещения и физиологического состояния растений. (Прим. ред.) [c.548]

В качестве заместителей в бензольном кольце были взяты группы Л1-Н02, Л-С1,. м-р, п- . ж-СНз, -СНз, -ОСН3. Для характеристики их влияния использовалось соотношение Гаммета. Гидролиз бензоилхолинов изучался в аппарате Варбурга в стандартных условиях (37°С). При этом выявилась известная зависимость между величиной а заместителя и константой скорости гидролиза, что видно на рис. 48. [c.361]

Кислород в качестве акцептора[ 2>. Измерение поглощения кислорода проводят в аппарате Баркрофта — Варбурга. В дыхательный сосуд помещают раствор от 10 до 10" моля производного изатина или о-хинона в , А мл пиридина и добавляют 0,6 мл 2%-ного раствор аланина в 10%-ной уксусной кислоте. Так как при реакции выделяется углекислый газ, дыхательный сосуд следует применять в соединении со склянкой, в которую наливают 0,2 мл 4%-ного раствора едкого кали. Целесообразно поддерживать температуру 37°. Бунзеновский коэффициент абсорбции а раствора, состоящего из 70 об.% пиридина, 3% ледяной уксусной кислоты и 27% воды по отношению к кислороду при 37°, равен 0,046. [c.167]

Два манометра аппарата Баркрофта — Варбурга заполняют ртутью. Из двух дыхательных сосудов один остается пустым (в качестве термобарометра), в другом (объемом приблизительно 15 мл) проводят одно за другим все измерения. В боковой отвод дыхательного сосуда помещают 5-10 моля катализатора, растворенного в 1 мл хинолина. В главную склянку дыхательного сосуда помещают 2 мл 1,3-бис-(диэтиламино)-бу-тена или 1,3-бис-(диметиламино)-бутена. Затем манометр заполняют свободным от кислорода азотом и после установления температуры (40°) раствор катализатора соединяют с субстратом путем опрокидывания манометра. Тотчас начинается возрастание давления. [c.169]

Другим способом, позволяющим достигнуть высокой степени соприкосновения жидкости и газа, является распыление жидкости, которое можно производить самим потоком газа [10—13] или при помощи центробежной мешалки Виттшера [14]. Качающиеся утки [15, 16] или сосуды для встряхивания [17] ИТ. п. применяют тогда, когда абсорбцию газа нужно исследовать количественно в зависимости от изменения давления или объема. В этом случае сосуд с веществом при помощи тонкостенной стеклянной или металлической спирали подсоединяют к газовой бюретке. При каталитическом гидрировании органических веществ катализатор, помещенный в боковой патрубок, вначале насыщается водородом, а затем при опрокидывании соприкасается с веществом, подлежащим гидрированию [18—23]. Иногда при неорганических реакциях может оказаться полезным аппарат Варбурга, используемый в биохимии [24, 25]. Манегольдом и Петерсом [26] описан прибор для гидрирования, в котором благодаря электролитическому выделению водорода сохраняются постоянными давление и объем. [c.393]

К аппарату Варбурга фирма В. Braun, Melsungen выпускает разработанные проф. Т. Гастом из Дармштадта многоканальное регистрирующее устройство. В нем вместо обычного жидкостного манометра применен миниатюрный манометр с емкостным датчиком в нужной области изменение емкости пропорционально изменению давления. [c.378]

Аппаратура-. 1) батарея из экстракторов Кучера—Штейделя (рис. 1) с баней для нагревания эфира 2) микрореспирометр (аппарат Варбурга) с открытыми манометрами сосудики конические, объемом 14—20 мл, с центральной вставко и одним боковым отростком. [c.383]

С целью изучения механизма окисления орто- ди- и три-окси-фенолов в животном организме выделяли полифенолоксидазу из почек различных животных по методу Гроллмана и др. [16] или по методу Пейджа и др. [17] с некоторыми модификациями. Активность фермента изучали манометрически (в аппарате Варбурга), спектрофотометрически и но окислению аскорбцновой кислоты. [c.373]

Как известно, одним из методов определения БПК является использование манометров или аппарата Варбурга и Зонгеиа. Первое устройство было испытано в исследованиях [37] и [86], при этом были отмечены определенные ограничения к его использованию. Впоследствии аппарат Зонгена был использован для оценки потребления кислорода в процессе окисления сырой нефти в морской воде в полевых условиях в течение 28 дней. Весь выделенный СОг оставался в забуференной среде с морской водой. Отмечено, что потребление кислорода зависит как от ростовых особенностей заражающей культуры, так и от степени разрушения нефти [44]. Был также использован кислородный электрод для определения окисления ряда углеводородов клеточной взвесью чистой культуры oryneba terium [87]. Углеводороды добавлялись в виде эмульсии. Отмечено, что высокие и низкие уровни концентраций лимитировали скорость окисления. Скорость окисления увеличивалась от а-пентана до гомологов ряда п-октана и затем снижалась до п-гептадекана. я-Алкены до Сю окислялись с меньшей скоростью, чем связанные алканы, нри Сю и выше реверсия была истинной. Галогенсодержащие алканы, изоалканы, циклоалканы и ароматические соединения окислялись гораздо медленнее. [c.145]

А. Потребление кислорода. Для измерения потребления кислорода в пробах воды могут быть использованы любые респирометры, включая аппарат Варбурга иГиль-сона. Предложен метод концентрации микропланктона до проведения респирометрии [12, 13]. [c.242]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология