Метод Бредфорда

Определение белка цо методу Бредфорд [c.31]

Принцип метода тот же, что и в методе Бредфорд. Метод применим для определения суммарного количества белков и полипептидов с молекулярной массой более 3000 дальтон. [c.32]

Определение концентрации иммобилизованной ЛДГ. Концентрацию иммобилизованной ЛДГ определяют по модифицированному методу Бредфорд (с. 85). Приготовленный раствор Кумасси 0-250 хранят при комнатной температуре в защищенном от света месте. Через 2— [c.387]

При тщательном изучении метода Бредфорда [350] было найдено, что коэффициент экстинкции комплекса краситель — белок остается постоянным при концентрации белка 0,8—10 мкг/мл, поэтому рекомендуется выбирать объем раствора красителя (0,5—5,0 мл) таким образом, чтобы конечная концентрация белка оказывалась в указанных пределах. Это обеспечивает выполнение закона Бера (линейность зависимости) и позволяет осуществить точное определение белка при содержании 0,5—50 мкг. [c.298]

Сравнительное изучение содержания белка в образцах из культуры клеток и субклеточных фракций было проведено с использованием методов Лоури II Бредфорда [611. Метод Лоури дал завышенные результаты, но соотношение величин, полученных двумя методами, было постоянным (среднее значение 1,58 0,09). Рекомендован метод Бредфорда из-за его большей скорости. [c.292]

Метод Бредфорда может быть применен к белкам, растворенным в электрофоретическом буфере, содержащем ДСН, меркаптоэтанол, трис. В этих условиях БСЛ дает линейную зависимость (в диапазоне 10—90 мкг белка), аналогичную получаемой в методе Лоури в применении к анализу клеточных гомогенатов оба метода дали воспроизводимые, но различные по углу наклона графики [323]. [c.298]

К наиболее широко применяемым методам определения концентрации белка относятся следуюш ие биуретовая реакция, метод Лоури, метод Гринберга, метод Бредфорда, измерение поглош ения в ультрафиолетовой области спектра. [c.45]

Первый из этих методо заключается в блокировании одного из двух открытых орто-положений (относительно аминогруппы), по которым может идти замыкание цикла. Блокирующая группа удаляется после циклизации. Иллюстрацией этого метода могут служить тщательные исследования ориентации в реакции Скраупа, выполненные Бредфордом, Эллиотом и Роу [16]. Результаты этих исследований во многом способствовали выяснению некоторых непонятных моментов и устранению ошибок, имевших место в ранних работах по изучению строения и соотношения изомеров, образующихся в реакции Скраупа. [c.8]

Вначале метод газо-жидкостной хроматографии для изучения углеводородного состава нефтей и конденсатов применялся с использованием набивных аналитических колонок. В анализах нефтей, проведенных с помощью этого метода, состав анализируемых фракций упрощался, или дополнительно использовались более чувствительные приборы, как масс-спектрометры, или применялись оптические методы для более уверенной идентификации компонентов. Б. Бредфорд с сотрудниками [155] определил 16 ароматических и насыщенных углеводородов в образце бензина, [c.75]

Достоинства метода Бредфорда заключаются в быстроте анализа и вое-п[>оизводимости результатов, но не всегда графики зависимости поглощения прп 595 нм от количества белка линейны и угол наклона кривой для разных белков сильно варьирует [289, 377]. Поэтому график, полученный для белка-стандарта, может быть неприменим без соответствующих поправок к неизвестному белку. Наиболее достоверные результаты [303] дает измерение поглощения белка при 280 нм (при концентрации белка >50 мкг/мл) или 205 нм (при концентрации белка <50 мкг/мл). [c.298]

С ошибками, которые по опубликованным данным присущи трем обычно используемым методам определения белка биуре-товому методу, методу Лоури и методу Бредфорда. Для этих трех методов ошибки определений устанавливали, сравнивая опубликованные данные (Инструкция по определению белка фирмы Bio-Rad, с. 3—4) с количествами белков, определяемыми гравиметрически. В качестве стандартов для определения по Лоури и Бредфорду использовали бычий -у-глобулин, а для определения биуретовым методом — БСА. Несмотря на некоторые различия в определениях при двух длинах волн, диапазон ошибок (средний уровень отклонений) для определений по площади пиков при 205 нм укладывается в диапазон ошибок для трех стандартных колориметрических определений. Петерсон (Peterson, 1983) в своем обзоре указывает, что измерение по поглощению при 205 нм в два раза чувствительнее, чем модифицированный фенольный метод Фолина при определении белка по Лоури. [c.127]

Описано взаимодействие некоторых ароматических аминов с глицерином, удовлетворительно протекающее в разбавленной серной кислоте--При использовании 60—70%-ной серной кислоты реакция Скраупа проходит гладко и обычно достигаются прекрасные выходы. Бредфорд, Эллиот и Роуэ показали, что некоторые мета-замещенные анилины могут превращаться по методу Скраупа в 5- и 7-замещенные хинолины, причем выход 5- и 7-производных зависит от природы мета-заместителя. Сильные о- и и-ориентанты (электронодонорные заместители) приводят к получению только 7-замещенных хинолина слабые орто-пара-ориен-танты дают смесь 5- и 7-замещенных с преобладанием последних в случае л1-ориентантов образуется смесь, в которой преобладают 5-замещенные производные хинолина . [c.232]

Наиболее заманчивой реакций для определения карбонильной группы является реакция с использованием гидроксиламина. Использование фенилгидра-зина и других замещенных гидразинов всегда требует отделения твердого производного с последующим анализом либо избытка реагента, либо твердого производного. Последний вариант метода не пригоден для субмнкроколичеств, так как он и утомителен и неточен. Некоторые варианты реакции оксимирова-ния были использованы для анализа макроколичеств для настоящего исследования была применена видоизмененная методика, рекомендованная Фритцем, Ямамура и Бредфордом [1]. При добавлении точно измеренного количества органического основания (2-диметиламиноэтанола) к раствору гидрохлорида гидроксиламина выделяется известное количество свободного гидроксиламина после добавления карбонильного соединения и полного оксимирования избыток гидроксиламина титруют хлорной кислотой. Реакция проходит в неводной среде, гидрохлорид гидроксиламина и органическое основание растворяют в пропаноле-2, а титрование проводят раствором хлорной кислоты в метилцеллозольве. [c.157]

Применяя объемно-аналитический метод для определения воды в инициирующих смесях, содержащих хлорат калия и гремучую ртуть. Бредфорд, Штауфер и Саммерс [74] нашли, что способ непосредственного титрования суспензий этих смесей в экстрагирующем растворителе не может быть использован вследствие мешаюшего действия сильных окислителей и восстановителей. Цитируемые авторы применили способ эктрагирова -ния после экстрагирования частицам давали осесть, и порцию находящейся над осадком прозрачной жидкости отбирали для титрования. Некоторые из компонентов анализируемой смеси растворимы в метаноле, и поэтому метанол для экстрагирования непригоден. Были испытаны три других спирта и диоксан, причем экстрагирование проводили следующим образом. [c.221]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология