Биуретовый метод определения белка

Из различных спектрофотометрических методов, которые могут быть использованы для определения количества белка, входящего в состав веществ биологического происхождения, наиболее подходящим является биуретовый метод [25]. Этот метод не очень чувствителен и, как показывает опыт, его применение связано с рядом ограничений. Белок обладает способностью осаждаться совместно с гидратом окиси меди. На этом основан классический метод определения белка [26], согласно которому раствор белка [c.315]

Объясните принципы биуретового метода определения содержания белка в сыворотке крови. [c.47]

Определение азота трудоемко и требует особого оборудования, поэтому для количественного определения белка был разработан ряд колориметрических методов. В тех случаях, когда необходимо определить общее содержание белка во многих образцах, обычно применяют методы, в основу которых положены биуретовая и нингидриновая реакции. [c.323]

Наиболее распространенным колориметрическим способом определения белков является метод Лоури и др. [90] с использованием реактива Фолина. В реакции с этим реактивом получают синее окрашивание в результате взаимодействия белка с ионом меди в щелочном растворе (биуретовая реакция) и восстановления фос- [c.356]

При выделении препарата мембран оценивают количественный выход белка. Метод Лоури (1951) - наиболее распространенный и высокочувствительный метод определения концентрации белка, основанный на измерении интенсивности окраски раствора, зависящей от концентрации белка. Принцип метода заключается в том, что при взаимодействии белка с реактивами, используемыми в определении, осуществляются по меньшей мере две цветные реакции на белок. Одна из них — биуретовая реакция между пептидными группами и ионами меди. Возникающая сине-фиолетовая окраска обусловлена об- [c.232]

К наиболее широко применяемым методам определения концентрации белка относятся следуюш ие биуретовая реакция, метод Лоури, метод Гринберга, метод Бредфорда, измерение поглош ения в ультрафиолетовой области спектра. [c.45]

Необходимые для постановки этой реакции количества антигена и антисыворотки зависят от чувствительности выбранного метода определения белка. Так, например, при использовании микрометода Кьельдаля в модификации Маркхема вполне достаточно, чтобы иммунная сыворотка содержала 75—125 мкг азота антител. При использовании биуретовой реакции требуется вдвое [c.126]

В основе чувствительного колориметрического метода определения белков в элюатах лежит биуретовая реакция, а также реакция с фенольным реактивом Фолина—Чокальто [77] в модификации Лоури [78]. Таким путем определяют белок в кон- [c.454]

Е. В. Дододанова и Н. Н. Иванов, Быстрый метод определения белка по биуретовой реакции, Биохимия, 3, 723 (1938). [c.353]

С ошибками, которые по опубликованным данным присущи трем обычно используемым методам определения белка биуре-товому методу, методу Лоури и методу Бредфорда. Для этих трех методов ошибки определений устанавливали, сравнивая опубликованные данные (Инструкция по определению белка фирмы Bio-Rad, с. 3—4) с количествами белков, определяемыми гравиметрически. В качестве стандартов для определения по Лоури и Бредфорду использовали бычий -у-глобулин, а для определения биуретовым методом — БСА. Несмотря на некоторые различия в определениях при двух длинах волн, диапазон ошибок (средний уровень отклонений) для определений по площади пиков при 205 нм укладывается в диапазон ошибок для трех стандартных колориметрических определений. Петерсон (Peterson, 1983) в своем обзоре указывает, что измерение по поглощению при 205 нм в два раза чувствительнее, чем модифицированный фенольный метод Фолина при определении белка по Лоури. [c.127]

Теперь мы опишем несколько доступных методов определения белка. Некоторые из них, требующие специальной аппаратуры (определение азота по Кьельдалю, рефрактометрия), исключены из рассмотрения. К наиболее широко применяемым методам относятся 1) биуретовая реакция с использованием щелочного pj TBopa соли меди 2) метод Лоури с применением реактива Лоури—Фолина—Чиокалто 3) измерение оптической плотности в УФ-области спектра при 280 нм (полоса поглощения ароматических групп) или при 205—220 нм (полоса поглощения пептидных групп) 4) связывание красителей. [c.310]

Наиболее часто цитируемая работа в биохимической литературе —это работа Лоури, Розеброу, Фарра и Рэндалла [171], в которой был описан новый метод определения белков. Было обнаружено, что при сочетании биуретовой реакции и реакции с применением реактива Фолина—Чиокалто [172] белки, содержащие тирозин, дают интенсивную темио-синюю окраску. В оригинальной работе приведены концентрации реактивов для получения идеальных результатов. С тех пор появилось множество модификаций этого метода, в которых в основном сделаны попытки устранить влияние некоторых специфических веществ. [c.311]

Для солюбилизации мембранных белков часто используют неионные детергенты, такие как тритон Х-100, твин-80 и др. Эти детергенты влияют на развитие окраски при определении белка с биуретовым реактивом и методом Лоури. Практически полного удаления детергентов из пробы можно добиться экстракцией их изоамнловым спиртом. [c.82]

Определение белка. Для определения белка используют микро-биуретовый метод (см. с. 81). В случае сиектрофотометрического определения концентрацию белка рассчитывают с учетом коэффициента поглощения Л " 1см=13,2 при 280 нм. [c.234]

Принцип метода тот же, что и при определении белка с биуретовым реактивом. [c.30]

Колориметрический метод определения количества белка по биуретовой реакции. Этим методом непосредственно определяют количество белка в растительных продуктах, используя цветную реакцию белка, обработанного концентрированным раствором щелочи с USO4. Белок исследуемого образца (муки, зерна и т. п.) переводят в раствор, с которым проводят биуретовую реакцию. Эта реакция характерна для пептидной связи, она получила свое название от производного мочевины — биурета, образующего с щелочным раствором USO4 комплексное соединение фиолетового цвета. [c.54]

На каких реакциях основано количественное определение белка биуретовым методом, методом Лоури [c.23]

Для определения содержания белка в растворах широко используются фотометрические методы анализа [1, 2]. В ряде случаев возможно определение белка по собственному поглощению при длинах волн 220 и 280 нм [1]. Более селективным является фотометриро вание окрашенных комплексов белка, полученных по различным реакциям ксантопротеиновой, биуретовой и реакции Лоури [2, 3]. Среди них наиболее специфичной и чувствительной является реакция Лоури, в которой белок вступает во взаимодействие с реактивом Фолина [4] в сочетании с биуретовой реакцией. Именно сочетание этих двух фотометрических реа1кций (реакция на пептидные связи и на обязательные ароматические аминокислоты белка) делает метод высокочувствительным и избирательным, т. е. позволяет его использовать для определения белка в сложных смесях. По данным [5], метод Лоури чувствительнее метода, основанного на биуретовой реакции, в 100 раз, а в сравнении с методом определения по собственному поглощению — в 10—20 раз. [c.37]

Р а бота № 113 Определение белков сыворотки крови биуретовым методом [c.227]

Прямые методы. 1. Сырую биомассу определяют после осаждения клеток центрифугированием. После центрифугирования отмытых клеток можно определить сухую массу. Оба метода не свободны от довольно больших систематических ошибок. 2. Гораздо большую точность обеспечивает определение общего азота (метод микро-Кьельдаля и микродиффузионный метод определения аммиака), а также определение общего содержания углерода (по ван Слай-ку-Фолчу). 3. В повседневной практике часто определяют содержание бактериального белка. Хорошие результаты дают модификации биуретового метода и другж колориметрические методы. Микрометоды основаны на измерении количества характерных компонентов белка тирозина, триптофана (по Лоури или Фолину). [c.192]

Количественное определение белков. Для колич. онределения Б. устанавливают общее содержание азота по методу Кьельдаля (см. Ааота определение). Кроме того, используют колориметрич. методы, основанные на различных цветных реакциях Б., напр, биуретовой, а также реакции Лаури, представляющей сочетание биуретовой реакции и реакции Фолина на ароматич. аминокислоты. Концентрации Б. в р-рах можно установить по поглощению в УФ-области спектра, измерением плотности и показателей преломления р-ров. Количественно аминокислотный состав Б. определяют гидролизом Б. и после- [c.193]

При выделении фермента наибольшая часть времени затрачивается на определения активности (и белка). Поэтому при выборе соответствующих тестов ищут таких, которые могут обеспечить максимальную скорость анализов. В этих случаях быстрота определений более важна, чем их высокая точность (основные методы определения ферментативной активности рассматривались в гл. 3). Количество белка можно установить различными путями на основании химических, физико-химических и даже чисто физических способов, но чаще всего его определяют а) сжиганием вещества и определением азота но Кьельдалю б) биуретовой реакцией в) по методу Лоури, совместным использованием биу-ретового и фенольного реактивов. [c.139]

Скорость ультрафильтрации w мл час) определяли по количеству добавленного раствора из бюретки в ли рный цилиндр за определенный промежуток времени. Концентрацию обн его белка с (вес,%) определяли биуретовым методом [19], Разд( ление белков по фракциям осуп ествляли методом электрофореза на бумаге [19], Относительную вязкость плазмы измеряли с помощью вискозиметра ВК-4 [20], Структурные [c.174]

Работа 5. Определение концентрации общего белка в сыворотке (плазме) крови биуретовым методом (набор НТК Анализ-Х ) (УИРС) [c.41]

Содержание общего белка в сыворотке крови практически здоровых людей составляет у взрослых — 65-85 г/л, у детей до 6 лет — 56-85 г/л, у новорожденных— 53-89 г/л. Из колориметрических методов количественного определения белка особого внимания заслуживает биуретовый метод, основанный на биуретовой реакции. В щелочной среде ионы меди образуют с белками комплексы фиолетового цвета. Интенсивность окрашивания в определенных пределах пропорциональна концентрации белка. Содержание белка устанавливается по интенсивности светопоглощения при 540-560 нм фотометрически. Для расчета количества белка в исследуемом растворе необходимо пользоваться калибровочным графиком, построенным по стандартным растворам белка. [c.42]

Количественное определение белков. Различают две группы методов 1) определение количества белков в растворе на основе физикохимических свойств биуретовый, рефрактометрический и нефело-метрический методы, поглощение ультрафиолетового излучения (при 280 нм поглощают ультрафиолет остатки ароматических аминокислот, при 180—210 НМ — пептидная связь и ряд конформационных факторов) 2) количественное определение индивидуальных белков на основе их биологических свойств (радиоиммунный, иммунофер-ментные методы). [c.49]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКА ПО БИУРЕТОВОЙ РЕАКЦИИ В ПРЕПАРАТАХ ГАММА-ГЛОБУЛИНОВ И СЫВОРОТКАХ, ОЧИЩЕННЫХ ПО МЕТОДУ ДИАФЕРМ-3 [c.989]

Наиболее широко применяется определение белков по биуретовой реакции по методу Кингслея [112], хотя по этому вопросу имеются и более ранние сообщения [113—116]. Кингслей приложил метод только к белкам крови. Другие авторы [117—120] изучали приложение метода для диализа спинномозговой жидкости и аллергических вытяжек. [c.26]

Выполните лабораторную работу Количественное определение белка биуретовым методом . [c.336]

Биуретовая реакция. а-Аминокнслоты в пептидах дают биуретовую реакцию, которая используется для качественного и количественного определения белка в растворе с помощью спектрофотометрнческих методов. Бнурет образуется при нагревании мочевины до 180°С. [c.119]

Наиболее распространенным методом является определение оптической плотности при 280 нм. Этот метод обладает достаточной чувствительностью, позволяет вести анализ в потоке и не сопровождается потерей вещества. Однако сами амфолиты-носители обладают сильным поглощением при 280 нм, и колебания в оптических свойствах отдельных соединений могут быть ошибочно приняты за зоны белка. Вследствие этого необходимо провести определение нулевой линии, свойственной данной партии амфолитов подобный пример приведен на рис. 4. Отклонение от нулевой линии невелико как при биуретовой реакции,так и при записи поглощения при 280 нм. Фон при 254 нм достаточно велик. Поэтому обычные проточные денситометры, где анализ ведется при 254 нм (линия ртути), непригодны в случае электрофокусирования. [c.314]

В отличие от других цветных реакций на белки биуретовую реакцию дают все без исключения белковые вещества, так как биуретовая реакция не является реакцией на те или иные отдельные аминокислоты. Ни одна аминокислота (за исключением гистидина, серина и треонина, которые в достаточно концентрированных растворах обусловливают появление сходного окрашивания) не дает положительной биуретовой реакции. Именно поэтому после достаточно продолжительного гид ролиза разбавленный гидролизат белка, состоящий из смеси аминокислот, не дает уже положительной биуретовой пробы. Биу]эетовой пробой можно, таким образом, пользоваться для установления конца гидролиза. В связи с этим биуретовая реаки,ия лежит в основе метода приближенного количественного определения малых количеств белка в разбавленных растворах, [c.37]

Широкое распространение получил также метод Лоури, в котором сочетаются две реакции — на ароматические аминокислоты (с реагентом Фолина) и биуретовая. Его чувствительность значительно выше — до 0,01—0,05 мг1мл. Однако его эффективность для белков, существенно различающихся по содержанию ароматических аминокислот, неодинакова. Кроме того, на правильность результатов определения по Лоури оказывают заметное влияние многие примеси, например, нуклеиновые кислоты. [c.34]

Метод электрохимического восстановления на ртутном катоде дал возможность судить о количестве дикетопиперазинов и пептидов в природном белке. Было доказано, что дикетопиперазиновые структуры входят в состав белковых молекул. Метод ионофореза позволял следить за поведением циклических структур при различных деструкциях белка [288]. Биуретовая реакция [269] оказалась надежным сродством для суждения о длине полипептидной цепочки в микромолекуле белка. Сущность биуретовой реакции сводится к образованию медных комплексов рядом азотсодержащих веществ (белки, пептоны, амиды, амины, аммиак). Определение медных чисел белка, спектрофотометрические кривые медных комплексов позволили установить, что пептидные цепочки в белке чаще всего построены из трех и во всяком случае не более чем из пяти остатков аминокислот. С другой стороны, относительное уменьшение аминного азота при гидролизе после восстановления белка дает ключ к выявлению относительного количества дикетопиперазинов. Результаты всех этих определений привели к таким выводам в молекуле желатины на каждое дикетопиперазиновое кольцо приходится четыре аминокислоты, у альбумина крови — пять. [c.268]

Методы, основанные на анализе составных частей молекул белка, включают определение элементов азота и углерода, некоторых аминокислот, например тирозина, биуретовой и фор1-мольной группировок. Отдельные белки могут быть иногда определены по специальным группам, например по железу в гемоглобине [2, 3] или иоду в тиро-глобулине. Все эти методы требуют, чтобы определяемая составная часть находилась в испытуемом образце исключительно в белковой части. Поэтому белок должен быть отделен от всех других органических веществ и карбонатов, если он определяется по углеродному составу, и от всех других азотсодержащих составных частей, если основой анализа является метод Кьельдаля. Обычная практика анализа кормов и овощей на белки на основании определения общего азота в этом отношении всегда внушает сомнения. Наличие алкалоидов, аминокислот или других азотсодержащих веществ в таких веществах достаточно вероятно, хотя, как правило, их количества малы по сравнению с содержанием белка. Вследствие изменчивости свойств различных белков нет общих методов их выделения из сложных смесей. В хорошо изученных системах могут применяться специальные методы выделения. [c.15]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология