Белки стандарты в ДОВ

Для построения калибровочной кривой при определении молекулярных масс используют белки-стандарты тропонин С (18 000 Да), тропонин I (24 000 Да), тропонин Т (38 000 Да), яичный альбумин (42 000 Да) и бычий сывороточный альбумин (68 000 Да), а также стандартный набор для определения молекулярной массы белков. При электрофорезе в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия препарат миозина дает расположенную почти у старта интенсивную полосу тяжелых цепей с м. м. ок. 20 ООО Да и три слабые, но отчетливые полоски легких цепей с м. м. ок. 20 ООО Да для самой тяжелой из них и около 16 000 Да — для самой легкой. Подвижность этих полос в описанных выше условиях высока, поэтому при достаточно большой продолжительности электрофореза эти полоски могут обнаружиться почти у фронта красителя (бромфенолового синего). [c.397]

Методика. Образцы исследуемого белка и белка-стандарта разбавляют водой до 10 мл в пробирке диаметром 13 мм. Добавляют 0,9 мл реагента Л, перемешивают и помещают на 10 мин в водяную баню при 50 °С. Охлаждают до комнатной температуры и добавляют 0,1 мл реагента Б, оставляют на 10 мин, затем максимально быстро добавляют 3 мл реагента В н перемешивают в течение 1 с. Нагревают 10 мин при 50°С. Охлаждают и измеряют поглощение npi[ 650 нм (во избежание помутнения раствора кюветы по окончании работы промывают НС1). [c.294]

Замечание. Добавление 10%-ного ДСН обязательно, поскольку ДСН предотвращает образование осадка при приливании реагента Фолина к образцам, содержащим тритон Х-100. В диапазоне 40—120 мкг зависимость поглощения от количества белка линейна. Допустимое содержание тритона Х-100 в образце составляет <1%, при большей концентрации детергента необходимо добавить соответствующее количество белка-стандарта, чтобы компенсировать образование окраски. Предложено перед определением по методу Лоури удалять тритон Х-100 путем однократной экстракции изоамило-вым спиртом [245]. [c.295]

ГПХ часто используют для определения молекулярно-массового распределения полимеров и нахождения радиуса частиц. Для этой цели с помощью стандартов полистирола строят градуировочные графики зависимости логарифма молекулярной массы от объема элюирования. При помощи полученной кривой можно определить концентрации частиц определенного размера в анализируемой смеси. Очень широко ГПХ используют в биологии для выделения и очистки полипептидов, белков и других макромолекул. [c.610]

Градуировочный график, К 0,5 мл серии растворов, содержащих 50— 800 мкг белка-стандарта, добавляют 1 мл реагента Б. Смешивают и через 15 мин добавляют 1 мл смолы и 5 мл реагента В. Центрифугируют и измеряют поглощение, как описано выше. [c.314]

Белки выявляют, поместив гели в 0,05 %-й раствор кумасси синего в смеси этанол — уксусная кислота — вода (10 1 30). Этой же смесью производят отмывку избытка краски. Затем измеряют длину пробега каждого белка от линии старта с точностью до 0,1 мм. Эти данные сравнивают с калибровочной кривой (рис. 94), которая строится по данным, полученным на белках-стандартах (табл. 8). [c.261]

Как видно из рис. 94, существует линейная зависимость подвижности белков в 5 %-м ПААГ от величины их молекулярных масс. Это дает возможность сравнивать мембранные белки с белками-стандартами. [c.261]

Глицин (а-аминоуксусная кислота, гликокол) — СНа — СООН — однй из самых распространенных в природе аминокислот, входит в состав белков бесцветные кристаллы, т. пл. 232— 236° С, растворимы в воде. Г. выделяют из желатина, фиброина, шелка, а также синтезируют. Г. применяется для органического синтеза, для приготовления буферных растворов, в аналитической химии в качестве стандарта для определения аминокислот, для количественного определения Си, Ag. [c.78]

И) неизвестного белка / А1 неизвестного белка 2о,ш белка-стандарта М белка-стандарта ) [c.131]

Сухой образец после кислотного гидролиза белка растворяют и наносят на пластинку в 0,01 н. растворе H I Щелочной гидролизат и стандарт триптофана (при анализе триптофана в этом гидролизате) наносят на пластинку в растворе, состоящем из [c.134]

В полипептидах и белках индивидуальные сигналы сдвигаются и перекрываются из-за взаимодействия отдельных аминокислотных остатков. Это затрудняет количественное отнесение сигналов к определенным группам. Например, при применении в качестве внутреннего стандарта ДСС сигналы протонов у метильных групп алифатических остатков лежат между 0,9 и [c.37]

Определение молекулярных характеристик по данным эксклюзионной хроматографии проводят с помощью калибровочной кривой, отражающей связь удерживаемых объемов с молекулярной массой. Существует несколько методов калибровки хроматографической системы. Наиболее надежным из них является калибровка по узкодисперсным образцам исследуемого полимера (М лг/Мп=<1,1). В этом случае хроматографируют ряд стандартов, перекрывающих требуемый диапазон молекулярных масс, измеряют удерживаемые объемы в максимумах пиков и строят зависимость логарифма молекулярной массы от удерживаемого объема, получая калибровочную кривую типа показанной на рис.2.16. Если по каким-либо причинам не удается получить линейную калибровочную зависимость, то нелинейную 8-образную кривую аппроксимируют полиномом (обычно достаточно полинома третьей степени). Этот метод часто используют при исследовании индивидуальных макромолекул, в частности, белков. Так, на рис.2.18 приведена Калибровочная зависимость для геля TSK3000SW, построенная по 25 белкам. Однако для многих типов синтетических полимеров такие стандарты обычно отсутствуют, а их приготовление чрезвычайно трудоемко. Наиболее доступны стандарты полистирола. Они, как правило, имеют нормальное логарифмическое ММР, для которого справедливо соотношение Мр= /Муу Мп (Мр — молекулярная масса, соответствующая максимуму пика полимера), и широко применяются в практике эксклюзионной хроматографии. При использовании калибровочной кривой, построенной по полистирольным стандартам, для определения молекулярных характеристик других полимеров результаты получают в относительных величинах (в так называемой полистирольной шкале ). [c.53]

Большинство авторов определило молекулярные массы а-глиадинов (табл. 6Б.4) в пределах от 27 000 до 38 000 Да [72, 73]. Этот диапазон может отражать определенную изменчивость молекулярной массы поскольку при использовании этого же метода в отношении нескольких а-глиадинов установлены [116, 114] разные молекулярные массы для каждого из них. Завышенные величины молекулярных масс для аг и аг-глиадинов, полученные гель-фильтрацией [147], объясняются тем, что исследования проводились в 0,1 М уксусной кислоте без предварительного восстановления дисульфидных связей и в отсутствие денатурирующего агента (мочевины или гуанидинхлорида), а также тем, что в этих условиях а-глиадины находятся не в форме статистического клубка. Ввиду этого результаты оказываются искаженными за счет конформации, которую принимают в этой среде а-глиадины и стандарты белков. Все а-глиадины образованы одной полипептидной цепью. [c.188]

С законодательной точки зрения (в настоящее время ведется разработка нормативов и стандартов), видимо, происходит ориентация на такие названия, в которых просматриваются выражение белковые растительные продукты, растительный источник, физическая форма продукта и содержание белков. При таком подходе образуются такие наименования-характеристики, как, например, белковые растительные продукты из подсолнечной муки с 55 % белков или белковые растительные продукты из конских бобов, филированные, с 92 % белков . [c.362]

Метод энантиомерной метки учитывает потери L-аминокислот в процессе обработки и дериватизации, но не учитывает их потери вследствие возможной рацемизации [4]. Степень рацемизации можно определить в отдельном эксперименте со смесью чистых стандартов. Отличительная особенность метода состоит в том, что он позволяет полностью компенсировать потерю некоторых лабильных аминокислот, таких как триптофан, цистеин, треонин и серии, в процессе кислотного гидролиза белков. [c.177]

Общее содержание аминокислот определяется в пробе, а содержание свободных аминокислот — в пепсиновом гидролизате. Точно такие же анализы выполняются и при использовании белка куриного яйца, который служит стандартом. [c.576]

В 1975 г. совместно с министерством сельского хозяйства Японии и ААС (Американской ассоциацией по сое) японские производители этой культуры создали Японскую ассоциацию по пищевому растительному белку со следующими задачами содействовать продовольственному потреблению растительных белков и обеспечивать должное качество, этих продуктов путем разработки норм и стандартов для защиты интересов и стимулирования потенциальных потребителей. [c.657]

Рынок соевых белков стран Западной Европы видится разнородным по структуре, и трудно обозначить его границы. В самом деле, сильные различия в традициях и привычках питания и особенно отсутствие общих, унифицированных стандартов и регламентаций делают каждую страну специфичной, единственной в своем роде. Очень подвижный характер этого рынка обусловливает отсутствие точных данных как о потреблении, так и производстве соевых белков. [c.660]

При такой очистке зерна зольность крахмала значительно снизилась и качество его стало соответствовать стандарту на кукурузный крахмал первого сорта. Однако содержание белка в крахмале в ряде случаев повышалось до 1—1,5% и выше. Необходимо в дальнейшем совершенствовать схему и режим работы отдельных узлов с целью снижения содержания белка в готовом продукте. [c.55]

Можно поступить и по-другому к исходному препарату белка добавить известное количество аминокислоты, заведомо не встречающейся в белках и устойчивой в условиях кислотного гидролиза. Для этой цели часто пспользуют норлейцин (выходит между Leu и Туг), реже — норвалин и 3-нитротирозин. Применяют и другие стандарты [Riordan, Giese, 1977]. [c.527]

Использование этих стандартных спектров КД для подсчета соотношений а-спирали, -формы и неупорядоченных конформаций глобулярных белков с попыткой воссоздания экспериментально измеренного спектра КД белка по алгебраической сумме различных долей спектра из трех чистых конформаций стало главным применением этого спектроскопического метода в данной области. Достигаемая при этом точность зависит от того, насколько конформационно чистым является стандарт, и для этой цели были рекомендованы и несколько поли ( -аминокислот). Неопределенностью, однако, является то, в каких условиях эти поли (аминокислоты) становятся полностью конформационно неупорядоченными. В качестве стандарта с неупорядоченной конформацией предложен поли ( -серин) при высоких солевых концентрациях [23]. КД-спектры, вычисленные для миоглобина, лизоцима и рибонуклеазы на основе их третичных структур, которые ранее были установлены для этих глобулярных белков по данным рентгеноструктурного анализа, согласуются по всем характеристическим точкам с экспериментальными спектрами КД при использовании в качестве одного из стандартов поли ( -серина) [35]. Подобные данные по анализу соответствия кривых по нативным белкам и полипептидам многочисленны, и они дают информацию о степени конформационной упорядоченности этих веществ в растворах [36]. Эти данные не дают, конечно, ответа на вопрос, какая именно часть первичной структуры а-спирализована, какая отвечает -форме и какая— неупорядоченной, однако основываясь на последовательности аминокислотных остатков белка или полипептида, можно строить рискованные предположения о том, где эти конформации локализованы. Как отмечалось в разд. 23.7.2.4, аминокислоты белков разделяются на те, которые при включении в полипептиды способствуют принятию упорядоченной конформации, и те, которые тому не способствуют. Такая информация получена при рассмотрении [c.437]

Агентство по охране окружающей среды приняло решение рассматривать две заявки, которые касались бактерий, дефектных по гену белка, ответственного за образование кристаллов льда, как стандарт для разработки правил, регламентирующих полевые испытания всех ГМО, Каждое предложение подвергалось критическому анализу, который включал оценку испытаний с точки зрения безопасности для окружающей среды, экологических последствий и возможного влияния на здоровье человека, а также подробное изучение самого ГМО. В [c.524]

Этот метод составил сильную конкуренцию другим общеизвестным методам, что объясняется прекрасной разрешающей способностью геля в широком диапазоне молекулярных весов, а также тем, что величина молекулярного веса может быть установлена простым способом в течение одного дня и с малым количеством белка, требуемым для анализа. Метод ультрацентрифугирования, например, теоретически разработанный очень полно, требует использования специального дорогостоящего оборудования. Недостатком этого метода является большая или меньшая точность определения удельного парциального объема. Неопределенность в 0,02 мл/г в этом параметре (т. е. 2—3%) вводит погрешность до 10% в величину рассчитываемого молекулярного веса, даже если все центрифужные измерения, необходимые для расчета, были проделаны точно. В диапазоне молекулярных весов от 15000 до 100 000 точность определения молекулярного веса при электрофорезе в полиакриламидном геле с натрийдодецилсульфатом лучше 10%. Этот диапазон легко перекрывается большим числом белков-стандартов, имеющихся в продаже. Трудность с более высокими молекулярными весами происходит, видимо, оттого, что в диапазоне от 90000 до 200000 имеется слишком мало стандартных белков. Молекулярные веса полипептидных цепей обычно не превышают 100 ООО. [c.421]

Колориметрические методы. М1югие из этих методов достаточно просты, но не все могут быть применены к данному конкретному белку. Ошибки в результатах чаще всего обусловлены тем, что исследуемый белок резко отличается по своей природе от белка-стандарта (обычно в качестве белка-стандарта применяется БСА), [c.291]

Наиболее широкое применение нашел метод Лоури [225]. Возникающая окраска в основном определяется реакцией фенольного реагента (Фолина — Чикольте) с остатками Туг, но определенный вклад дают некоторые другие аминокислоты — Тгр, His и ys, а также пептидные связи. Зависимость интенсивности окраски от количества белка-стандарта не линейна. Определению мешают детергенты, используемые для солюбилизации белков. Предлолсепо много различных модификаций метода. [c.291]

Достоинства метода Бредфорда заключаются в быстроте анализа и вое-п[>оизводимости результатов, но не всегда графики зависимости поглощения прп 595 нм от количества белка линейны и угол наклона кривой для разных белков сильно варьирует [289, 377]. Поэтому график, полученный для белка-стандарта, может быть неприменим без соответствующих поправок к неизвестному белку. Наиболее достоверные результаты [303] дает измерение поглощения белка при 280 нм (при концентрации белка >50 мкг/мл) или 205 нм (при концентрации белка <50 мкг/мл). [c.298]

Рис. 6-4. Обратнофазовая хроматография шести белков-стандартов. Смесь шести белков (/ — апротинин, 2 — инсулин, 3 — бычий сывороточный альбумин, 4 — апомиоглобин, 5— карбоангидраза Б, 6 — овальбумин) в 12 мМ НС1 хроматографировали в системе растворителей 1 (А), 2 ( ) н 3 (В), как описано в разд. У,Б.

Приготовление образца. Белковый препарат смешивают с 2 М сахарозой так, чтобы конечная концентрация белка была 1 мг/мл. Отвешивают на весах по 0,5 мг белков-стандартов и растворяют каждую порцию в 0,5 мл диссоциирующего раствора, представляющего 1 % SDS в трис-глициновом (электродном) буфере (рН=8,0). [c.260]

В тех случаях, когда нужно оценить содержание лишь нескольких, рано выходящих из колонки аминокислот, имеет смысл в качестве внутреннего стандарта использовать /)-глюкозаминовую кислоту < DGA ). Ее пик выходит раньше, чем Asp, имеет удобную для интегрирования форму и хорошо окрашивается нингидрином. Однако следует иметь в виду, что DGA не выдерживает условий кислотного гидролиза белка. Ее можно использовать при других видах гидролиза пли для оценки содержания аминокислот в физиологических жидкостях [Sta ey-S hmidt et al., 1982]. [c.527]

Колбочки помещают в термостат аппарата Варбурга при 28° С и выравнивают температуру в течение 15 мин. В каждую колбочку добавляют по 0,1 мл густой суспензии митохондрий (6—7 мг белка) и пробы инкубируют в течение 10 мин при перемешивании. По окончании инкубации их помещают в лед и после быстрого охлаждения их содержимое осторожно наслаивают на поверхность холодного 0,88 М раствора сахарозы. Предварительно охлажденную до 0°С сахарозу разливают по 5—7 мл в четыре центрифужных стаканчика от супернасадки центрифуги ЦЛР, стоящие во льду. Пробы центрифугируют при максимальной скорости вращения 10 мин. Верхний слой отсасывают пипеткой и отбрасывают, раствор сахарозы сливают и поверхность осадков осторожно споласкивают 0,3 М сахарозой, охлажденной до 0°С. В стаканчик добавляют по 1,5 мл 1 н. хлорной кислоты, осадки хорошо размешивают стеклянной палочкой и центрифугируют при 5000 в течение 15 мин. Супернатанты собирают в пробирки и экстракцию повторяют вновь в тех же условиях. Объединенные супернатанты нейтрализуют крепким раствором МН40Н. К нейтрализованным растворам добавляют по 2 мл метилового спирта, 2,5 мл 1 М аммиачного буфера, 0,2 мл раствора цианистого калия и 0,4 мл раствора эриохро-ма черного Т в метиловом спирте. Объем доводят до 10 мл аммиачным буфером. Определяют количество Mg + в пробах, измеряя оптическую плотность при 520 нм против раствора, не содержащего Mg +. Калибровочную кривую строят одновременно с обработкой опытных проб, используя в качестве стандарта титрованный раствор Mg l2. Область концентраций, в которой сохраняется линейная зависимость между количеством Mg + и оптической плотностью, — О—0,3 мкмоль Mg2+ на пробу. [c.457]

Исходя из степени гидролиза и состава незаменимых аминокислот этих двух белков, подсчитывают содержание гидролизованных незаменимых аминокислот, которое выражают в процентах к стандарту, предложенному ФАО/ВОЗ [20]. Разные процентные показатели зависят от заранее установленных коэффициентов, которые возрастают по мере того, насколько рассматриваемая аминокислота отстоит дальше от стандарта. Процедура расчета показателя -PER (от англ. omputed PER), предложенного авторами, довольно трудоемка, однако она может легко программироваться на ЭВМ. [c.577]

Н. применяют в произ-ве азокрасителей и красителей для меха. 2-Амино-4-нигрофенол-антиоксидант, светостабили-затор резин, катализатор в произ-ве 1,4-гексадиена при попадании на кожу вызывает дерматит. 2-Амино-4,6-ди-нитрофенол-цветной стандарт при определении сахаров, реагент для обнаружения белков и аминокислот при мех. воздействии и нагревании взрывается т. всп. 205-210 °С. [c.264]

MALDI и ионизация электрораспылением сильно различаются по виду предоставляемой информации. Спектр MALDI относительно прост, в нем присутствует интенсивный пик изучаемого белка с m/z, соответствующим однозарядному иону (см. рис. 9.4-6,б). Кроме того, в спектре могут находиться менее интенсивные пики, соответствующие многозарядным ионам, например [М + 2Н] + и димерам, связанным водородной связью, т. е. [2М + Н]+. С использованием подходящих (внутренних) стандартов можно достичь точ- [c.307]

ПО изменению кругового дихроизма раствора белка. Исходная (нативная) форма лизоцима Т4 содержит два свободных остатка цистеина, не участвующих в образовании дисульфидных связей, У фермента так называемого псевдодикого типа они заменены на остатки Thr и Ala, при этом активность и термостабильность фермента остались прежними. Последовательность псевдодикого типа служила стандартом при сравнении вариантов с потенциально термостабилизирующими дисульфидными связями и также предотвращала образование случайных дисульфидных связей между вновь введенными остатками цистеина и остатками, присутствующими в нативном белке. [c.169]

Аминокислотный состав изолята характеризуется довольно существенными различиями по сравнению с составом растворимого азота в картофеле и приближается к стандарту Продовольственной и сельскохозяйственной организации (ФАО) по белку [58] (см. главу Питательная ценность растительных белков ). Содержание соланина в этих продуктах может быть относительно высоким ввиду использования в крахмальном производстве неочищенных клубней, а нередко и позеленевшего картофеля (выращенного без окучивания) независимо от сорта (табл. 9.35). [c.482]

Как отмечалось ранее, питательная ценность белка зависит также от сбалансированности незаменимых аминокислот. Группа экспертов Продовольственной и сельскохозяйственной организации [20] предложила другой способ расчета химического показателя, учитывая участие каждой незаменимой аминокислоты в общей их совокупности. Стандартным белком, по отношению к которому производится расчет того же типа, могут служить целое куриное яйцо, женское молоко или введенный ФАО стандарт [20], основанный на потребности здорового человека. В этом случае показатель для лимитирующей аминокислоты (выраженной в процентах от суммы всех незаменимых аминокислот) определяется как отношение найденного в изучаемом белке значения к соответствующему значению для стандартного белка. Этот способ расчета несколько лучше, чем показатель Митчела и Блока, он согласуется с биологической ценностью белка, измеренной при кормлении животных. [c.574]

К началу работы Фишера была известна примерно дюжина аминокислот, как продуктов расщепления белков, другие были открыты немного позже. Фишер начал работать по нескольким направлениям синтез аминокислот и расщепление их рацемических форм исследования производных аминокислот для того, чтобы ускорить разделение смесей аминокислот и, что особенно важно, рекомбинация двух или более аминокислот в вещества, которые он назвал полипептидами . Величие фишеровского подхода к проблеме полипептидного синтеза произвело прямое воздействие и было склонно затмить другие пионерские работы в этой области, такие как работы КурЦиуса. В 1901 г. он объявил о синтезе гли-цил-глицина — простейшего дипептида, а в 1907 г. — о 18-ти член-ном полипептиде лейцил-триглицил-лейцил-триглицил-лейцил-окта-глицил-глицина. Даже по современным стандартам это было значительным достижением в синтезе. Синтез глицил-глицил-глицина иллюстрирует общий подход, примененный Фишером схема (1) его стратегия и принципы — замечательный предшественник [c.217]

Введение пробы в фоновый электролит (10 мл Н,0 i мл 12 о-ного р-ра NajWOi + 1 мл 2,4 М Н3РО4), центрифугирование белка через 15 мин. в течение 5 мин. при 3000 обЫин и полярографирование центрифугата п двух стандартов с разным содержанием NaBr при — 0,230 в относительно ртутно-сульфатного электрода [c.207]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология