Аналитические электрофорез и хроматография на бумаге

Для разделения пуриновых и пиримидиновых оснований, нуклеозидов и нуклеотидов в лабораторной практике используют все виды хроматографии хроматографию на бумаге (включая электрофорез на бумаге и фингерпринт ), тонкослойную хроматографию [16], все типы колоночной хроматографии (адсорбционную, распределительную, ионообменную и гель-проникающую). Считают, что при разделении методом тонкослойной хроматографии оптимальное количество нуклеотидов составляет 0,2—30 мкг методом хроматографии на бумаге 10—200 мгк методом электрофореза на бумаге 100—500 мкг. На колонке можно делить нуклеотиды в количестве от 50 мкг до нескольких сотен миллиграммов. Конечно, в отдельных случаях аналитического или препаративного разделения эти рамки можно существенно раздвинуть. [c.37]

Среди методов, используемых для аналитического и препаративного разделения пуринов, следует отметить бумажную, колоночную (иногда на субстратах, пропитанных солями меди и серебра), газожидкостную, ионообменную, тонкослойную и высокоэффективную жидкостную хроматографию, а также электрофорез на бумаге и гель-фильтрацию на сефадексе G-10. [c.595]

Многие методы, применяемые в настоящее время при экспериментальном изучении проблемы происхождения жизни, ничем не отличаются от методов, используемых в других областях, скажем в аналитической химии или биохимии белка. Так, например, наблюдая со стороны аналитическую часть исследований, в которых моделируется состав примитивной атмосферы, совершенно невозможно определить, что эти работы имеют отношение к проблеме происхождения жизни. Здесь точно так же используются хроматография на бумаге, электрофорез и другие методы, применяемые при решении самых разных химических задач. И при этом характер получаемых результатов, равно как и характер ограничений и ошибок, также будет одинаковым независимо от того, имеет данная работа отношение к проблеме биогенеза или нет. Но существуют и такие приемы, которые специфически присущи экспериментам, связанным с проблемой происхождения жизни, например заполнение и опорожнение аппаратов, предназначенных для проведения экспериментов с пропусканием искровых разрядов. Но даже и в этом случае многие индивидуальные операции, такие, как использование вакуумной техники и высоковольтного оборудования, идентичны тем, которые применяются при исследовании ряда химических и физических проблем. [c.50]

Обессоливание в случае необходимости. Приготовление аналитической пептидной карты, окрашивание специфическими реагентами Гидролиз протеазой низкой специфичности Фракционирование пептидов электрофорезом или хроматографией на бумаге [c.345]

Дальнейших успехов в химии гликонротеинов следовало ожидать на основе развития методов и лабораторной техники идентификации и количественного определения малых количеств сахаров и аминокислот, структурного анализа олиго- и полисахаридов, эффективного разделения и очистки белков, оценки гомогенности макромолекул и определения их молекулярных весов. С введением улучшенных методов исчерпывающего метилирования и периодатного окисления углеводов, реагентов (борогндридов щелочных металлов), избирательно восстанавливающих карбонильную группу, аналитической ультрацентрифуги Сведберга, аппарата Тизелиуса для электрофореза с подвижной границей, ультрафиолетовой и инфракрасной спектроскопии, метода меченых атомов, метода фракционирования белков плазмы крови холодным спиртом по Кону, хроматографии на бумаге и на колонках, хроматографии на ионообменниках, полученных из целлюлозы, упрощенных микрометодов электрофореза (электрофорез на бумаге, крахмальном или агаровом гелях), иммуноэлектрофореза и, наконец, последнего по времени, но важного в этой области открытия конститутивных и индуцируемых бактериальных ферментов, действующих избирательно на гетеросахариды, настало время для третьего и наиболее сложного и плодотворного периода исследования гликонротеинов. [c.18]

Для анализа фракций элюата можно использовать любые достаточно чувствительные аналитические методы, пригодные для серийной работы. В основном с этой целью в настоящее время используют колориметрию в видимой и ультрафиолетовой областях, измерение радиоактивности, хроматографию на бумаге или электрофорез, тонкослойную хроматографию и биологические испытания. Одним из наиболее быстрых способов анализа фракций является отбор аликвотов (5—20 мкл), которые наносят на бумагу и затем обнаруживают соответствующим реактивом (см., например, [85]). [c.563]

По своим электрохимическим свойствам образовавшиеся ком-плексонаты (в виде отрицательно заряженных анионов) существенно отличаются от свойств исходных катионов , что имеет значение и для аналитических методов электрофореза и хроматографии на бумаге и для разделения элементов с помощью ионообменных смол. [c.106]

Метод пептидных карт на одном листе бумаги сейчас следует рассматривать скорее как аналитический, чем как препаративный. При препаративном разделении пептидов в тех же условиях обычно смесь пептидов последовательно разделяется методами электрофореза и хроматографии в несколько приемов, каждый раз нанося пробу во всю ширину бумаги. После проведения электрофореза вырезают полосы бумаги таким образом, чтобы в середине и по трем краям оставались узкие полоски бумаги. После проявления этих полосок нингидрином вырезанные полосы вставляются обратно, и на них карандашом отмечаются пептидные зоны. Пептиды соответствующих зон с нескольких листов бумаги после смывания объединяются и хроматографируются опять же на полном листе (каждая объединенная зона отдельно). Подобные трудоемкие операции связаны с необходимостью иметь достаточное количество вещества для дальнейшего анализа. Повышение чувствительности методов анализа концевых групп даст возможность определять всю аминокислотную последовательность пептида после получения пептидной карты на одном листе бумаги. Для анализа К-концевых аминокислот уже разработан [8] флуоресцентный метод с 1-диметиламинонафталин-5-сульфонилхлЬри-дом, который в сто раз чувствительнее (достаточно 10 — 10" мкмоль пептида) обычно используемого метода с динитро-фторбензолом [9]. [c.237]

Период с 1944 по 1954 г. был ознаменован развитием аналитических методов, современной техники разделения веществ, а также выяснением строения белков. Базой для дальнейшего развития и усовершенствования методики синтеза пептидов явилось введение в практику исследовательской работы хроматографии на бумаге, препаративной колоночной хроматографии, значительно более широкое применение электрофореза и противоточ-ного распределения и, наконец, выяснение структуры оксито-цина В. дю Винье и Г. Таппи и установление строения инсулина Ф. Сэнджером. После того как был успешно завершен синтез окситоцина, основные усилия исследователей были направлены на получение других биологически активных полипептидов. Это характерно для химии пептидов и на сегодняшний день. В течение всего лишь нескольких лет некоторые биологически активные полипептиды были синтезированы в таких количествах, что стало возможным проводить их фармакологическое и медицинское изучение. Эти соединения в настоящее время начинают находить терапевтическое при.менение. Синтез аналогов этих пептидов сыграл важную роль в понимании связи между строением и действием биологически активных полипептидов. [c.8]