Электрофорез микрометод

Разработаны полумикро- и микрометоды определения функциональных групп и молекулярного веса антибиотиков и других биологически активных веществ. Используя принцип частичного замещения с последующим распределением с помощью хроматографии и электрофореза на бумаге, нами с высокой степенью точности даны способы определения ННа-, СООН-, ОН-, 8Н-групп. Метод прост, надежен, не требует больших количеств веществ и сложной аппаратуры. [c.409]

Дальнейших успехов в химии гликонротеинов следовало ожидать на основе развития методов и лабораторной техники идентификации и количественного определения малых количеств сахаров и аминокислот, структурного анализа олиго- и полисахаридов, эффективного разделения и очистки белков, оценки гомогенности макромолекул и определения их молекулярных весов. С введением улучшенных методов исчерпывающего метилирования и периодатного окисления углеводов, реагентов (борогндридов щелочных металлов), избирательно восстанавливающих карбонильную группу, аналитической ультрацентрифуги Сведберга, аппарата Тизелиуса для электрофореза с подвижной границей, ультрафиолетовой и инфракрасной спектроскопии, метода меченых атомов, метода фракционирования белков плазмы крови холодным спиртом по Кону, хроматографии на бумаге и на колонках, хроматографии на ионообменниках, полученных из целлюлозы, упрощенных микрометодов электрофореза (электрофорез на бумаге, крахмальном или агаровом гелях), иммуноэлектрофореза и, наконец, последнего по времени, но важного в этой области открытия конститутивных и индуцируемых бактериальных ферментов, действующих избирательно на гетеросахариды, настало время для третьего и наиболее сложного и плодотворного периода исследования гликонротеинов. [c.18]

Электрофорез на ацетате целлюлозы служит простым и вместе с тем чувствительным способом обнаружения аномальных видов гемоглобина. Наиболее подходящей буферной системой является смесь трис-борная кислота-ЭДТА (pH 8,4) [816, 1141, 1224]. Для качественных анализов можно использовать микрометоды. Электрофореграммы анализируют либо без применения красителей, либо после их окрашивания общими белковыми красителями или с помощью пероксидазы. Последний метод, очевидно, более специфичен, так как выявляет только те белки, которые содержат гем. Шнейдер [1141] рекомендует двукратное окрашивание сначала пунцовым S, а затем раствором бензидина, содержащим нитропруссид натрия (дает синюю окраску). Если при электрофорезе необходимо определить содержание минорного (т. е. имеющегося в незначительном количестве) компонента, например гемоглобина Аг, то наиболее надежный метод состоит в том, что на пленку наносят относительно большое (точно определенное) количество образца, элюируют соответствующие зоны электрофореграммы без ее предварительного окрашивания и проводят фотометрическое измерение [1141]. При денситометрическом сканировании окра- [c.321]

В медицинских исследовательских лабораториях весьма необходимы простые и надежные микрометоды определения изменений в обмене веществ. Анализы следует проводить быстро и серийно. С зтой точки зрения оказался подходящим метод хроматографии на бумаге, нашедший применение в медицинских лабораториях сразу после того, как были успешно разделены смеси аминокислот. Ценным вспомогательным диагностическим средством при разделении ионогенных смесей оказался затем и электрофорез (ионофорез) на различных слоях носителей . Этот метод нашел широкое применение благодаря высокой эффективности процесса разделения белков. Для количественного расчета состава разделенных смесей, нанесенных в виде полос, используют регистрирующие фотоэлектрические приборы. [c.337]

Препаративные методики. Описанный выше микрометод нельзя превратить в столь же эффективную препаративную методику путем одного лишь увеличения размеров колонки. Чтобы увеличить количество разделяемого материала, можно использовать большое число трубок малых размеров, но в этом случае разделение становится трудоемкой и длительной процедурой. При использовании для электрофореза больших колонок возникают проблемы, связанные с извлечением разделенных веществ из геля, с отводом выделяющегося тепла, с необходимостью удерживать слой геля в колонке и т. д. При конструировании приборов, выпускаемых промышленностью, делаются попытки так или иначе решить все эти проблемы. Кроме того, нужный компонент можно извлечь из геля, вырезав соответствующий участок геля и элюировав этот компонент путем диффузии или с помощью электрофореза. Еще один способ извлечения разделенных веществ заключается в том, что им дают выйти из геля, после чего они с непрерывным потоком буфера поступают в коллектор фракций. Приборы для препаративного электрофореза должны удовлетворять следующим требованиям. Необходимо, чтобы гель удерживался в колонке благодаря установлению гидростатического равновесия между верхним и нижним буферами следует возможно более точно регулировать температуру с помощью циркулирующей системы охлаждения важно, чтобы камера для элюирования имела небольшой объем. Описан целый ряд гелей и буферных систем, применяемых для препаративных целей [66]. [c.275]

Была предложена [160] техническая модификация микрометода перекрестного иммуноэлектрофореза, которая дает возможность получать прямую базовую линию для всех преципитатов. Перед электрофорезом в первом направлении гель разрезают на полоски, оставляя между ними промежутки в несколько миллиметров. Круглую лунку для образ ца вырезают с той стороны полоски, которая должна примыкать к гелю, содержащему антитела (рис. 90,5). По данным авторов, такая модификация улучшает разрешение, [c.259]

В макроварианте вырезают полоски мембраны шириной 4 см и увеличивают объем наносимой сыворотки до 0,05—0,06 мл. В этом случае электрофорез продолжается 4—5 ч при напряжении 200 В или 1,5—2 ч при напряжении 400 В. Ионную силу буферного раствора Михаэлиса при этом уменьшают, разбавляя его дистиллированной водой в соотношении 3 2. В остальном макрометод ничем не отличается от микрометода. [c.72]

За последние пять лет преимущество разделения белков при помощи микрометодов получило общее признание. В 1965 г. Гроссбах [1] описал модификацию диск-электрофореза на полиакриламидном геле для определения 10 г количеств белка с помощью стеклянных капилляров. В 1966 г. авторы этой главы предложили микрометод разделения белка в количествах 10 — 10 г при использовании полиакриламидного геля в стеклянных капиллярах, имеющих диаметр 200 мк [2]. В 1967 г. Фельген-хауер [3] описал подобный метод для разделения 10—30 мкг белка с разрешающей способностью 1—3 мкг для одного белка. Гофман [4] для микроэлектрофореза белков вместо стеклянных капилляров применил плексигласовую камеру. [c.277]

Теоретические выводы, полученные для электрофореза с подвижной границей, применимы также и для зонального электрофореза в свободной среде. Локализацию зон в электрофоретической трубке выявляют путем ее сканирования в ультрафИхО-летовом свете (рис. 7). Так как количество вносимого в трубку материала не превышает 0,4 мг, описанный вариант электрофореза является микрометодом, однако в пределах этого количества его можно использовать и для препаративных целей. Данный метод целесообразно применять в тех случаях, когда необходимо провести электрофоретический анализ в отсутствие носителей, а количество исследуемого материала недостаточно для метода подвижной границы, для которого обычно требуется около 10 мл по крайней мере 0,5%-ного раствора образца, т. е. 50 мг вещества. [c.22]

Нуклеиновые кислоты также разделяют в капиллярах объемом 1 — 10 мкл [915, 1223, 1444]. Таким путем можно анализировать 1—5 мг ткани, содержащей 0,1 мкг нуклеиновых кислот. Наилучшие результаты были получены при использовании очень крутых градиентов концентрации полиакриламидного геля, на нижнем конце которого достигалась концентрация 30— 50%. Добавление пиронина Y (конечная концентрация 0,02%) к слою буфера, покрывающего образец, позволяет визуально следить за разделением нуклеиновых кислот во время электрофореза. В микрометоде, так же как при электрофорезе в обычном масштабе, разделение улучшается, если в буфер добавляют ЭДТА. Следует, однако, отметить, что в присутствии ЭДТА пиронин не окрашивает нуклеиновые кислоты. После завершения электрофореза гели выдавливают непосредственно в красящий раствор через отрезок полиэтиленового шланга, при- [c.388]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология