Аминокислоты дансил

Другим высокочувствительным методом является так называемый дансиль-ный метод, связанный с присоединением к концевой аминокислоте дансил-хлорида (1-диметиламино-нафталин-5-сульфохлорида) по следующей схеме [c.42]

УФ-свет. Чрезвычайно малые количества дансил -аминокислот можно увидеть в УФ-свете в виде желтых пятен. Дансил-ОН дает сине-зеленое пятно. [c.394]

Локализацию дансил аминокислот определяют на влажной хроматограмме по их собственной флуоресценции в ультрафиолете при 360 нм. Этот способ позволяет выявлять до 10" мкмоля дансил-аминокислот [15]. После высушивания хроматографической пластинки интенсивность флуоресценции значительно снижается. [c.237]

Связь с динитрофенильпой группой устойчива к кислоте, и поэтом " после полного кислотного гидролиза меченого пептида высвобождалась-динитрофенилированная аминокислота (соединение, имеющее желтую-окраску), которая находилась ранее на Ы-конце цепи. Кроме того, Сэнгер использовал меченые е-аминогруппы остатков лизина. Частичный кислотный гидролиз меченых пептидов приводил в этом случае к образованию небольших фрагментов, для которых затем определяли аминокислотный состав. В конце концов Сэнгер сложил фрагменты полученной аминокислотной мозаики и установил последовательность двух цепей молекулы инсулина, содержащих 21 и 30 остатков и связанных между собой в цельной молекуле дисульфидными мостиками (рис. 4-13) В последние годы вместо фтординитробензола чаще применяют дансил- [c.175]

Предел детектирования по ряду флуоресцирующих веществ может достигать 10" г. Природной флуоресценцией обладают полиядерные ароматические соединения, токсины органического происхождения, стероидные гормоны и ряд других соединений. Флуориметрический детектор широко применяется при анализе дансил-производных аминокислот. [c.59]

В табл. 17.8 приведены некоторые.величины Rf ДАНС-аминокислот. [c.505]

Б. ОПРЕДЕЛЕНИЕ N-KOHЦEBЫX АМИНОКИСЛОТ ДАНСИЛ ЬНЫМ МЕТОДОМ [7,8] [c.274]

С помощью кварцевого капилляра с внутренним диаметром 50-100 мкм удалось достигнуть высокоэффективного разделения белков и дансил-аминокислот, при котором из-за сравнительно большого отношения поверхности к объему было сильно уменьшено влияние мешающей разделению термически индуцированной конвекции. Применение кварцевого капилляра позволило использовать модифицированный ВЭЖХ-детектор для определения разделяемых веществ непосредственно в капилляре. Простота аппаратуры и возросшая потребность в разделении биомолекул привели во второй половине 80-х годов к повышенному интересу к данному методу. [c.7]

Объем образца составляет 50—бООл кл. Раствор пептида или стандартной смеси аминокислот (из расчета 0,5—5 ммоль каждого компонента) в 0,1 М растворе бикарбоната натрия упаривают досуха в вакууме, удаляя при этом следы аммиака. Остаток растворяют в 10—15 мкл воды (свободной от аммиака) и смешивают с равным объемом насыщенного раствора ДНС-хло-рида в ацетоне. Смесь инкубируют при 37 °С в течение 1 ч, экстрагируют избыток дансил-хлорида тремя порциями по 500 мкл толуола или этилацетата. При выполнении этих операций еле- [c.376]

Порошки полиамидов используют в хроматографической практике с 1955— 1956 гг. Полиамиды применяют для жидкостной адсорбционной хроматографии липофильных и гидрофильных веществ — фенолов, фенолгликозидов, флаво-ноидов (флавонов, халконов, катехинов и др.), кетонов, хинонов, лактонов, полиспиртов, углеводов, органических кислот, сульфокислот и сульфонамидов, тиаминов, ароматических нитросОединений, ДНФ- и дансил-производных аминокислот, азотистых гетероциклических соединений (индолов, хинолинов, алкалоидов, нуклеиновых оснований, нуклеозидов и нуклеотидов, желчных пигментов), стероидов и желчных кислот, каротиноидов, витаминов, антибиотиков, пестицидов. [c.47]

Ванг и сотр. [715] количественно анализировали ДНФ-ами-яокислоты после элюции их 1 %-ным раствором бикарбоната натрия с полиамидного слоя. Определение концентрации производили снектрофотометрически при 360 нм. Патаки и Ванг [586] предложили определять количество аминокислот в виде их дансил-, ДНФ- или фенилтиогидантоиновых производных путем измерения флуоресценции пятна на хроматогралше. При этом чувствительность метода значительно выше в случае применения полиамидных слоев по сравнению с силикагелем. [c.127]

Для облегчения разделения и идентификации первичных и вторичных аминов на тонких слоях было предложено больщое число их производных, в том числе производные, образующиеся при реакции с 5-(диметиламино) нафталин-1-сульфонилхлори-дом (дансил или ВАМ5-С1). В виде дансилпроизводных удается обнаружить и определить очень небольшие количества (порядка наномолей) соединений существует, однако, ряд противопоказаний к применению этого реагента а) этот реактив нельзя считать специфичным, поскольку он реагирует с гидроксильными группами фенольных соединений и с некоторыми аминокислотами и спиртами б) в процессе реакции образуются побочные флуоресцирующие продукты в) при наличии основных аминокислот, как, например, в природных продуктах, в процессе дан-силирования возможна фрагментация. Тем не менее с помощью этого реактива удобно определять первичные и вторичные амины Зейлер [18, 19] составил подробную сводку преимуществ и недостатков использования этого реактива и описал методику его применения. Производные аминов готовят следующим образом. Смешивают раствор амина в воде с раствором реактива в смеси ацетон—вода (3 1). На один объем воды должно приходиться три объема смеси ацетон—вода. Реакционную смесь насыщают бикарбонатом натрия. Реакция практически завершается через несколько минут, если реактив предназначен [c.457]

Зайлер и Вейхман [133] исследовали разделение 1-диметилам ино-5-нафталинсульфаниламинокисл от (ДАНС-аминокислот) [134] на тонких слоях силикагеля. Используя метод двумерного хроматографирования смесями метилацетат—изопропанол—концентрированный аммиак (9 7 4) (в одном направлении) и хлороформ—метанол—уксусная кислота (15 5 1) или хлороформ— этилацетат—метанол—уксусная кислота (30 50 20 1) (в другом направлении), они добились почти полного разделения смеси 30 производных аминокислот. Перед вторым элюированием пластинки сушили 10 мин при 100°С. Поскольку вводимая в аминокислоту группа достаточно велика, метод отличается высокой чувствительностью. Таким способом при двумерном хроматографировании удается определить 10 ° моля кислоты желтые флуоресцирующие пятна становятся заметными в УФ-свете на еще влажной хроматограмме. [c.504]

Один из методов определения ДАНС-аминокислот—измере ние их флуоресценции в УФ-свете. При разделении на силика геле чувствительность метода составляет 10 молей [234—237] Измерения проводят в диапазоне 490—530 нм (длина волнь возбуждающего излучения 313 нм) с воспроизводимостью 3 [c.519]

Рис. 27. Удельная радиоактивность полисом, общего клеточного белка, белков ядер и щиоплазмы (Л) в сопоставлении с внутриклеточным содержанием лейцина (Б) в различные периоды клеточного цикла HeLa [64], На графике Л радиоактивность отражает включение Н-лейцина в полисомы и белки (за 3 мин). На графике Б представлена радиоактивность НС1-дансила, связанного с лейцином, как показатель концентрации последнего в пуле растворимых аминокислот.

В результате неполного расщепления некоторых связей при кислотном гидролизе дансилпептида (преимущественно с N-koh-цевыми остатками Пе и Val) образуются дансильные производные дипептидов, которые могут быть ошибочно идентифицированы как дансиламинокислоты, поскольку положения их пятен при хроматографии на полиамидных пластинках совпадают, например дансил-Ile-Glu и дансил-Glu. Наконец, источником ошибок может быть перекрестная идентификация аминокислот при определении структуры негомогенного пептида. При небольшом содержании примесного пептида удается определить последовательность главного компонента смеси, но возможное блокирование основного пептида (по остаткам Gin, Тгр или связи Asn-Gly) или его предпочтительная экстракция в растворитель при промывках могут привести к тому, что минорная последовательность с определенного положения цепи будет принята за основную. [c.359]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология