Электрофорез в агаровом геле

Рис. 20. Электрофорез в агаровом геле [461]. Гель (/), расположенный на стеклянной пластинке (2), опускается в электродный буфер (3) бумажные полоски (4) поддерживают агаровые мостики. Пробу вносят в щель (5) и обеспечивают циркуляцию буфера (б).

В сыворотке крови здорового человека при электрофорезе на бумаге можно обнаружить 5 фракций альбумины, О -, а,-, 3-, у-глобулины. Методом электрофореза в агаровом геле в сыворотке крови выделяют 7— 8 фракций, а при электрофорезе в крахмальном или полиакриламидном геле—до 16—17 фракций. Следует помнить, что терминология белковых фракций, получаемых при различных видах электрофореза, еще окончательно не установилась. При изменении условий электрофореза, а также при электрофорезе в различных средах (например, в крахмальном или полиакриламидном геле) скорость миграции и, следовательно, порядок белковых зон могут меняться. [c.569]

Так, при электрофорезе в агаровом геле интенсивность эндосмоса преобладает над электрофорезом и частицы многих крупных белков (Р2- и у-глобулинов), несмотря на то, что они имеют отрицательный заряд,, движутся к катоду. [c.191]

Изоферменты а-амилазы из сыворотки человека были разделены методом электрофореза в агаровом геле [1332]. По окон- [c.297]

ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В АГАРОВОМ ГЕЛЕ [c.92]

Помимо прибора Тизелиуса, за последние годы широкое распространение получили методы электрофореза белков на бумаге и агаровом геле. Достаточно упомянуть, что путем электрофореза в агаровом геле в нормальной сыворотке крови удается обнаружить до 20 различных белков. [c.429]

Фнг, 86. Прибор для электрофореза в агаровом геле [26]. [c.259]

Реакция встречного электрофореза в агаровом геле по чувствительности не отличается от реакции преципитации, но несколько уступает ей по специфичности, однако значительно превосходит ее по скорости получения результатов в течение [c.248]

Рис, 22. Л. Схематическое изображение прибора для электрофореза в агаровом геле на стеклянных пластинках. 1 — металлическая коробка с ножками на винтах и охлаждающее устройство 2 — стеклянная пластинка 3—агаровый гель 4 — агаровый гель или пенопласт 5 — электродные сосуды. Б. Шаблон для формирования щелей. [c.62]

Прекрасные результаты, полученные при электрофорезе в агаровом геле, поставили на очередь вопрос о применении его препаративных целях. Райтер [1080] использовал колонку с агаровым гелем для разделения сывороточных белков в количествах до 1 г. По окончании электрофореза колонку разбирали и после визуализации зон вырезали сегменты геля, содержащие белковые фракции. Зоны, однако, оказались искривленными из-за недостаточного рассеяния тепла. [c.65]

Колонки для препаративного электрофореза в полиакриламидном геле используют также и для электрофореза в агаровом геле [1390, 1439]. [c.66]

Для характеристики и выделения РНП-частиц (главным образом рибосом и субчастиц рибосом) применяют также электрофорез в агаровом геле [292, 1273]. [c.393]

Очень тонкую дифференцировку сложных белковых смесей позволяет осуществить качественный иммунохимич. метод, основанный на выявлении преципитации в геле, где происходит взаимодействие антигенов и антител, диффундирующих навстречу друг другу. Еще большие возможности дает сочетание этого метола с электрофорезом в агаровом геле (тшуноэлектро-форетич. метод П. Грабаря). Последний метод позволяет выявить в сыворотке человека более 25 белковых фракций, различающихся по антигенным свойствам. [c.112]

Грабар п Вильямс 127] разработали метод, сочетающий электрофорез в агаровом геле с серологической преципитацией. Этот метод представляет еще один блестящий пример повышения аналитической чувствительности, достигаемый несложным видоизменением [c.259]

Мы остановимся на одном технически совершенном методе разделения белковых смесей, использующем преципитиновую реакцию. Речь идет о методе Грабара, сочетающем электрофорез в агаровом геле с преципитпново реакцией. [c.135]

В нашей лаборатории также начаты исследования некоторых сильнокислых белков ткани нервной системы (Смерчинська и др., 1972). Выявлены три фракции сильпокислых белков, мигрирующих при электрофорезе в агаровом геле далеко впереди двух преальбуминовых фракций. По нарастанию электрофоретической подвижности эти фракции обозначены как 1а, 16, 1в. Последняя из них получена в очищенном виде. Показана микрогетерогенность выделенных фракций и изучена их метаболическая активность. [c.26]

Гипериммунизацию кур проводили с помощью фракций преальбу-минов головного мозга быка, полученных из белковой фракции 0.6—1 методом препаративного электрофореза в агаровом геле. [c.26]

Рис. 18-30. Эксперимент, который прямо показал, что в ходе развития В-клеток ДНК подвергается перестройке. Была экстрагирована ДНК из мышиной опухоли плазматических клеток (миеломы). синтезируюшей специфическую легкую цепь Ig, и из 13-диевиого мышиного эмбриона, у которого антитела еще не вырабатываются. Ту и другую ДНК расщепляли рестрикционной зндонуклеазой и полученные фрагменты подвергали электрофорезу в агаровом геле.

Второй наиболее важный электрофоретический метод — это электрофорез в агаровом геле при pH 6,0—6,5 [ПОЗ]. В исходном методе рекомендуется наливать 1%-ный раствор агара в цитратном буфере на стеклянные пластинки размером 22Х Х13 см. Образцы наносят на маленькие кусочки фильтровальной бумаги, которые помещают в щели, вырезанные в агаровом геле, или просто накладывают на поверхность геля, и после того, как белки проникнут в гель, начинают электрофорез. Шнейдер [1141] описал метод электрофореза на предметных стеклах в агаровом геле, забуференном цитратом. Образцы наносят на гель в виде круглого пятна. Кроме того, на каждую пластинку следует наносить стандартный гемолизат (содержащий, как правило, НЬАЗ), поскольку положение компонентов варьирует в зависимости от величины электроэндосмоса. При перемещении к катоду гемоглобины располагаются в следующем порядке НЬР> НЬА>НЬ8>НЬС. Та же закономерность наблюдается и в отношении растворимости гемоглобинов при pH 6,0. Основное преимущество этого метода электрофореза состоит в том, что он позволяет отделять НЬС от НЬЕ и НЬ5 от НЬВ, а также определять малые количества НЬА в присутствии НЬР. Многие мутантные виды гемоглобина (О, В, Е, О, I [c.322]

Наиболее часто для определения фенотипа трансферрина используют электрофорез в крахмальном геле. Разделение проводят в боратном буфере Смитиса [1199] или в неоднородной трис-цитратной системе Паулика [1028]. Для установления фенотипа трансферринов животных применяют и другие буферные системы, в частности систему Аштона и Брейдена [65]. Спунер и Бакстер [1221] использовали буфер трис-какодиловая кислота (pH 7,45). Кроме того, с этой целью проводят электрофорез в полиакриламидном геле в трис-глициновом буфере при pH 8,8 [960] или при pH 9,3 [1275]. Наличие в сыворотке человека того или иного вариантного трансферрина обнаруживают также с помощью электрофореза в агаровом геле [630], а для подтверждения полученных результатов осуществляют во втором направлении иммуноэлектрофорез [424]. Однако в этом случае картина оказывается менее четкой, чем при электрофорезе в крахмальном или полиакриламидном геле. В последнее время стали применять другой подход вначале сыворотку подвергают изоэлектрофокусированию в геле из специальной марки агарозы (лишенной электроэндосмоса), а затем проводят электрофорез в геле, содержащем антитела [492, 631]. [c.346]

При механической желтухе в плазме больных обнаруживается особый липопротеид (Lp-X), который по своей плотности принадлежит к ЛНП и обладает характерным липидным и белковым составом. Выявление Lp-X на электрофореграмме основано на его миграции к катоду при обычных условиях электрофореза в агаровом геле. Для увеличения катодной подвижности Lp-X пластины агарового геля необходимо выдерживать перед электрофорезом не менее 6 ч [990, 1166]. Надежная локализация этого белка стала возможной благодаря применению специфических антисывороток [1164]. Петек и др. [990] сравнили три различных способа проведения иммунопреципитации. При первом способе антисыворотку помещают в канавки, подобно тому как это делается при иммуноэлектрофорезе по методу Шайдеггера. Во втором способе после электрофореза в геле вырезают круглые лунки для антител на расстоянии 4 мм от лунок для антигена. В обоих случаях время, необходимое для диффузии, составляет 12—16 ч. Второй способ является более экономным с точки зрения расходования антисыворотки. При использовании третьего способа (иммунофиксация) антисыворотку прямо наносят на поверхность геля на расстоянии [c.355]

При нейтральных и щелочных значениях pH в полинуклеотидах отношение заряда молекулы к ее массе является постоянной величиной [1085, 1087]. Поэтому полинуклеотиды нельзя фракционировать на основе различий в их зарядах [940]. Введение в практику электрофореза поддерживающих сред, обладающих свойствами молекулярного сита, позволяет проводить фракционирование полинуклеотидов в зависимости от размеров их молекул. В ряде работ [778, 857, 1085] было показано, что электрофоретическая подвижность нуклеиновых кислот в полиакриламидном геле обратно пропорциональна их коэффициентам седиментации. Аналогичные данные были получены и при электрофорезе в агаровом геле [498]. Левицки и Сински [762] установили, что электрофоретическая подвижность полинуклеотидов линейно зависит от логарифма коэффициента седиментации (в единицах Сведберга). Поскольку коэффициент седиментации пропорционален квадратному корню из средней молекулярной массы нуклеиновых кислот, должна существовать обратная зависимость между относительной подвижностью и логарифмом молекулярной массы. Этот вывод был подтвержден экспериментальным путем [123, 778, 984, 1099]. [c.390]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология