Тизелиуса прибор для электрофореза

Рис. 95. Прибор Тизелиуса для электрофореза

Фиг. 3. Прибор Канкеля—Тизелиуса для электрофореза на бумаге [18].

Начиная с 1937 г., когда Тизелиус сконструировал для этой цели очень удобный прибор, электрофорез стал стандартным методом, применяющимся во многих лабораториях мира для анализа белков и белковых смесей. Долгое время электрофорез был но существу единственным количественным методом такого анализа. Он применяется для этой цели и в настоящее время, хотя и утратил свою уникальность в связи с развитием других физикохимических методов, особенно хроматографии. [c.41]

Электрофорезом называется движение заряженных частиц в жидкости под действием электрического поля. С 1937 г., т. е. с того времени, когда Тизелиус сконструировал прибор для электрофореза белков, этот метод [c.76]

Электрофорез на бумаге. Прибор Тизелиуса очень сложен. В последнее время широкое распространение для исследования белков получил другой метод, предложенный также Тизелиусом, но осуществляемый проще. Это метод электрофореза на бумаге. [c.210]

Хотя метод электрофореза известен уже со второй половины XIX в., точные измерения на чистых белках стали проводить лишь после создания Тизелиусом усовершенствованного аппарата для электро ретического анализа методом подвижной границы. В этом приборе электрофоретическая кювета помещалась в низкотемпературный термостат, благодаря чему для разделения белков можно было использовать высокие градиенты потенциала, избежав тепловой конвекции. Сама кювета имела прямоугольное сечение, оптические поверхности и смещающиеся относительно друг друга части. Это позволило получать четкие границы раздела между белковым и буферным растворами и наблюдать изменения показателя преломления в зоне подвижных границ с помощью теневой оптической системы, использующей принцип Фуко—Теплера. [c.164]

Теорелл [73] и Тизелиус [75] разработали конструкцию прибора, который значительно расширил возможности электрофоретического метода разделения органических веществ. Основное значение электрофореза по [c.533]

Разделение частиц с помощью прибора Тизелиуса. Одним из важнейших преимуществ прибора Тизелиуса для изучения электрофореза является то, что с его помощью можно производить разделение смеси разных частиц, если только эти частицы имеют достаточно отличные электрофоретические подвижности. Способ разделения частиц с помощью электрофореза был использован в последнее время для изучения протеинов, полученных из различных природных веществ. Был разработан ряд, методов для того, чтобы выяснить, является ли данная система протеинов гомогенной или она состоит из двух или [c.717]

Принципы, положенные в основу конструкции прибора Тизелиуса, описаны выше. Современный аппарат для фронтального электрофореза является сложным и дорогим устройством, вклю- [c.62]

Электрофорез ведется при высоком значении разности потенциалов (8— 10 в см) для более четкого разделения компонентов раствора по их электрофоретической подвижности. На рис. 181 показа- на схема электрофоретического прибора Тизелиуса. Как видим, этот прибор состоит из и-образной трубки с плоскопараллельными стенками, в нижней половине которой находится испытуемый раствор, а сверху раствора находится наслаиваемый буферный раствор, заполняющий всю остальную часть прибора. Оба раствора (и исследуемый, и буферный) выравниваются по pH, по электропроводности и ионном силе. [c.429]

Помимо прибора Тизелиуса, за последние годы широкое распространение получили методы электрофореза белков на бумаге и агаровом геле. Достаточно упомянуть, что путем электрофореза в агаровом геле в нормальной сыворотке крови удается обнаружить до 20 различных белков. [c.429]

С помощью принципа компенсации может быть достигнуто конечное состояние, представленное на рис. 40(6), если и.меются только два компонента. Однако это не единственное условие, которое должно выполняться. Для изолирования таких больших объемов чистых компонентов через прибор должны пройти очень значительные количества электричества. Поэтому требуется также, чтобы сам прибор был приспособлен для пропускания таких больших количеств электричества. Соотношение между раз.мерами электрофоретического прибора и количеством электричества, которое можно через него пропустить, было указано Тизелиусом [136]. Когда употребляются обратимые электроды, которые всегда применяются при электрофорезе с подвижной границей, легко понять, что это соотношение приложимо к электродам это следует непосредственно из законов Фарадея. Размеры электродных сосудов, однако, должны быть выбраны в соответствии с количеством электричества, которое должно быть пропущено через прибор. Предположим, что мы применяем электроды серебро — хлористое серебро в насыщенном растворе хлористого калия. Буфер, в котором проводится опыт, бывает различным, но обычно он содержит соли иные, чем хлористый калий, т. е. ионы калия и хлора должны рассматриваться как ионы, чуждые исследуемой системе. Эти ионы не должны [c.279]

В 1942 г. Свенссон [119] описал прибор для препаративного электрофореза с рядом новых усовершенствований, в котором соединил положительные стороны аналитического прибора Тизелиуса с требованиями работы с большими объемами и с большим удобством обращения. В последние годы прибор был еще более усовершенствован, и его устройство можно видеть на рнс. 44. [c.286]

Применение электрофореза в органической химии особенно расширилось после появления прибора Тизелиуса в 1937 г. Хотя как микроскопический метод электрофореза, так и прежние методы движущейся границы применяются и в настоящее время, данная глава посвящена главным образом описанию прибора Тизелиуса, его различным видоизменениям и краткой характеристике обла- Сти его применения. Автор ставит своей целью познакомить читателя со всей методикой применения прибора Тизелиуса и отметить многие недоразумения и ошибочные заключения, которые могут быть выведены из результатов наблюдений. [c.351]

А. Тизелиус разработал метод изучения электрофоретической подвижности белков. От прибора, предназначенного для изучения лиозолей (см. рис. 34, а), прибор Тизелиуса отличается некоторыми конструктивными особенностями. Наиболее существенное из них — применение разъемных кювет прямоугольного сечения. Этим достигается возможность наблюдения за движением неокрашенных в видимой области белков с помощью специальных оптических систем. Концентрация белков на различных участках прямоугольной ячейки регистрируется по изменению показателя преломления. Изучение градиента показателя преломления при электрофорезе дает возможность проводить качественный анализ смеси белков и их препаративное разделение по различию электрофоретической подвижности. Этот метод назван свободным электрофорезом. [c.216]

Имеется ряд аналогичных конструкций, позволяющих осуществить разделение больших количеств смесей. К ним относятся конструкция Свенсона [651, прибор Машбефа [46] и препаративный аппарат для электрофореза конструкции Тизелиуса [74]. [c.535]

Б. Камера Канкеля — Тизелиуса [18]. В этом приборе полоски бумаги для электрофореза помещаются между двумя силикониро-ванными пластмассовыми пластинами, которые устраняют нежелательное испарение буферного раствора, что препятствует изменению его концентрации. Кроме того, этот прибор пригоден и для двумерного электрофореза (фиг. 3). [c.49]

Макроскопические методы. Хотя микроскопический метод имеет некоторые преимущества в отношении простоты количества необходимого для измерени51 времени и в отношении получения сведений о форме, величине и ориентации частиц, за последние годы большое внимание привлекает макроскопический метод главным образом потому, что Тизелиус разработал очень удобный прибор для измерения. Макроскопический метод применялся в течение многих лет для приближенного изучения электрофореза простейшая форма прибора изображена на рис. 126. Нижняя часть U-образной трубки содержит исследуемую суспензию или коллоидный раствор, над которым в обоих коленах сосуда налит слой чистого растворителя и в него погружены два платиновых электрода. При наложении на эти электроды некоторого напряжения граница между растворителем и суспензией начинает передвигаться со скоростью, равной скорости электрофореза частиц. Если суспензия окрашена, можно непосредственно наблюдать за положением границы и измерять скорость ее движения. Зная градиент потенциала, можно вычислить среднюю электрофоретическую подвижность частиц. Если граница не поддается визуальному наблюдению, то иногда можно сделать ее видимой, заставив ее флуоресцировать в ультрафиолетовом свете в этом случае прибор должен быть изготовлен из кварца [20]. [c.713]

Основные недостатки макроскопического метода устранены в приборе, предложенном Тизелиусом. Его важнейшим преимуществом является применение во всем приборе одной и той же жидкo тIi, обычно буферного раствора, так что при движении границы частицы продолжают оставаться в том же растворе. Кроме того, употребляются трубки с прямоугольным сечением, а раствор поддерживается при температуре около 3°, соответствующей максимальной плотности буферного раствора. При прохождении электрического тока через жидкость, находящуюся в трубке, выделяется тепло, причем благодаря теплопроводности жидкость вблизи стенок трубки теряет больше тепла, чем в середине. В результате раствор в середине трубки приобретает более высокую температуру, чем у стенок, и различие плотностей приводит при комнатной температуре к появлению токов конвекции, которые нарушают отчетливость границы между растворами. Трубки с прямоугольным поперечным сечением имеют большую площадь стенок, чем цилиндрические, что облегчает отвод тепла в окружающую среду. Поддержание в растворе температуры несколько ниже 4°, при которой плотность жидкости очень мало меняется с изменением температуры, приводит к значительному уменьшению конвекции. С этими усовершенствованиями и с приспособлением для получения в начале опыта резкой границы макроскопический метод представляет собой ценное средство для изучения электрофореза и для его применения с целью разделения частиц, движущихся с различной скоростью. [c.714]

Прибор Тизелиуса может быть использован не только для определения наличия в системе различных компонентов иногда с его помощью можно даже разделить систему на эти компоненты. Если вести электрофорез столько времени, чтобы передняя граница ушла на зам етное расстояние вперед от следующей границы, то раствор между этими границами будет состоять почти полностью из наиболее быстро движущегося компонента. Поскольку электрофоретические подвижности, как правило, близки друг другу, обе границы успеют пройти секцию С или секцию В (рис. 127), прежде чем между ними появится заметное расстояние. Если сообщить всему раствору скорость, равную скорости более медленно перемещающейся границы, но обратную по направлению, то эта граница будет оставаться на одном месте ЬЬ на рис. 127), а более быстро движущаяся граница будет непрерывно передвигаться вперед, например от В внутрь секции С. Через некоторое время секцию С можно выдвинуть в сторону и вылить ее содержимое оно будет состоять только из одной составной части, обладающей наивысшей электрофоретической подвижностью. [c.719]

Тизелиус, сконструировав приборы, получил возможность путем электрофореза разделять природные смеси белков на фракции и проводить, таким образом, анализ этих смесей, имеющий большое значение при изучеими биологических объектов Анализ производится на основании различного заряда частиц. [c.210]

I — прибор с горизонтальной камерой, в котором бумага располагается между стеклянными пластинами (S) 2 — прибор обычного типа [33], пригодный для горизонтального электрофореза белков (разработано много модифицированных его вариантов) 3 — прибор с горизонтальной камерой для разделения белков у этого прибора небольшой объем влажной камеры и насыщение парами электролита происходит быстро 4 — аппарат Кре-мера и Тизелиуса [14], в котором отвод тепла осуществляется с помощью инертной жидкости 5 — аппарат с подвешенной в центре бумагой, часто используется (в виде различных модификаций) для рутинного анализа белков и низкомолекулярных соединений [62, 108] 6 — прибор, в котором избыточное тепло бысттро удаляется иаертной жидкостью, например ССЦ пригоден для разделения низкомолекулярных соединений при градиенте [c.290]

Наиболее распространено разделение белков электрофорезом, основанным на различиях зарядов макроионов. Скорость движения макроионов зависит от из заряда, градиента напряжения электрического поля и вязкости среды. А. Тизелиус разработал метод изучения электрофоретической подвижности белков с помощью прибора, схема которого изображена на рис. 95. От прибора, предназначенного для изучения лиозолей (см. рис. 47), он отличается некоторыми конструктивными особенностями. Наиболее существенное из них — применение разъемных кювет прямоугольного сечения. Этим достигается возможность наблюдения за движением неокрашенных в видимой области белков с помощью специальных оптических систем. Концентраиля [c.208]

В этом случае можно воспользоваться любым из двух основных принципов. Согласно первому из них, в основу кладется различие в изоэлектрических точках белков, содержащихся в разделяемой смеси. Если это различие достаточно велико, то осуществление электрофореза в отсутствие буферных солей может привести к разделению смеси в тех участках прибора, где в ходе электрофореза создались эначшия рН, соответствующие изоэлектрической точке каждого из белков. В одном из таких приборов, снабженном мембранами, проницаемыми для белков, но затрудняющими обратное смешивание разделенных растворов, Тизелиусу [299] удалось разделить искусственные смеси двух белков. [c.69]

Небольшие количества белков можно выделить в чистом состоянии, пользуясь обычным прибором (емкостью 11 мл), применяемым для аналитических целей, тогда как для разделения больших количеств белков лучше пользоваться прибором, сконструированным Тизелиусом [298] для препаративных целей. Оба эти прибора удобны тем, что они позволяют в ходе электрофореза и, если желательно, при отборе проб осуществлять непрерывный оптический контроль. При отборе проб удобно пользоваться описанной Тизелиусом [298] специальной бесконвекционной пипеткой можно также изолировать одну из секций прибора от другой с помощью скользящей стеклянной пластинки. [c.73]