Репликация аденовируса

Рнс. 138. Схема репликации генома аденовируса. [c.268]

Принято разделять гены аденовирусов на ранние и поздние, хотя такое разделение, как и во многих других вирусных систе.мах, несколько условно. К ранним относят гены, которые наиболее эффективно транскрибируются до начала репликации вирусной ДНК. [c.303]

Эту проблему решали разными путями. Например, сконструировали пакующую клеточную линию, содержащую Е1-область и ряд аденовирусных генов, которые не входят в состав трансдуцирующей ДНК и не попадают в клетки-мишени. Затем удалось добиться того, чтобы ни один из аденовирусных генов не включался в трансдуцирующую ДНК. Для этого линеаризовали плазмиду Е. соН (28 т. п. н.), которая обеспечивает экспрессию одного или большего числа терапевтических генов и не содержит аденовирусных генов, и пришили к ее концам фрагменты ДНК (по 4 т. п. п.), содержащие точку начала репликации аденовирусной ДНК, последовательность, ответственную за ее упаковку, и сигнал терминации. Длина продукта лигирования (36 т. п. н.) соответствует длине полноразмерного генома аденовируса. Затем полученным продуктом и аденовирусным гено- [c.494]

Рис. 21.7. Аденовирусный вектор. В клетку-хозяина, несущую интегрированный в геномную ДНК функциональный ген Е1 аденовируса, вводят встроенную в сегмент аденовирусного генома (0-17 единицы карты) плазмиду с терапевтическим геном (ТГ) и участок геномной ДНК аденовируса (9-100 единицы карты). Длина генома аденовируса равна 100 единицам. В результате рекомбинации (штриховая линия) между перекрывающимися участками плазмиды и ДНК аденовируса образуется молекула ДНК, эквивалентная полноразмерному вирусному геному. Рекомбинантная ДНК, содержащая терапевтический ген, упаковывается и высвобождается из клетки после лизиса. Образующиеся вирусные частицы дефектны по репликации. Плазмидная ДНК, входящая в состав конечной генетической конструкции, не влияет на упаковку рекомбинантной ДНК (не показано).

Рис. 56. Схема репликации ДНК аденовируса

Некоторые линейные нуклеиновые кислоты вирусов содержат белки, ковалентно связанные с 5 -концевым основанием. Наиболее хорошо изучены ДНК аденовирусов, фага ф29 и РНК полиовируса. ДНК аденовирусов представляет собой большую линейную двухцепочечную молекулу оба ее 5 -конца ковалентно связаны с белком, имеющим мол. массу 55000 дальтон. Соединение осуществляется с помощью фосфодиэфирной связи с серином (рис. 33.11). Тот же тип организации установлен в ДНК вируса ф29, где к каждому из 5 -концов прикреплен белок с мол. массой 27 ООО дальтон. У полиовируса, содержащего одноцепочечную РНК, белок VPg из 22 аминокислот сцеплен через гидроксильную группу тирозина с 5 -концевым основанием. В каждом случае прикрепляемый белок кодируется вирусом и участвует в репликации. [c.429]

Белок, присутствующий на реплицирующихся цепях ДНК аденовируса, имеет мол. массу 80000 дальтон, т.е. он крупнее белка, найденного на зрелой вирусной ДНК. Крупный белок является родственным более мелкому. Предполагается, что белок с мол. массой 80000 дальтон участвует в инициации репликации, но на определенной [c.429]

Некоторые вирусы, в частности паповавирусы, аденовирусы и герпесвирусы, используют для репликации ДНК-полимеразы. У других, например у вируса гепатита В и вируса мозаики цветной капусты, сначала с помощью клеточной РНК-полимера-зы II синтезируется РНК, а затем на ней как на матрице путем обратной транскрипции образуется новая геномная ДНК при этом обратная транскриптаза кодируется вирусным геномом. Ретровирусы также образуют обратную транскриптазу, которая копирует одноцепочечную геномную РНК с образованием дуплексной ДНК, которая затем встраивается в клеточный геном и находится там в виде провируса новые вирусные геномы образуются с помощью клеточной РНК-полимеразы (разд. 2.2.а и 5.7.г). Другие РНК-содержащие вирусы, например полиовирусы и вирус ящура, реплицируются при непосредственном копировании РНК с помощью РНК-полимераз, кодируемых вирусом (разд. 2.5.). [c.344]

Рис. 14.16. Схема ДНК-белкового и белок-белкового взаимодействия в области инициации репликации ДНК аденовируса.

Рис. 14.17. Модель инициации (а) и механизма репликации ДНК аденовируса (б).

У про- и эукариот можно встретить различные вариации на эту тему. Так, каждая из цепей родительской спирали митохондриальной ДНК животных (15 т.п.н.) и ДНК плазмиды ol El (6т.п.н.) имеет свою точку начала репликации (рис. 2.5). Синтез комплементарной цепи некоторых небольщих одноцепочечных фаговых геномов начинается вблизи одной специфической последовательности, а репликация полученного дуплекса может инициироваться совсем в другой точке (рис. 2.6). Репликация линейных дуплексных ДНК также инициируется в особых сайтах. Например, ДНК бактериофага Т7 (40 т.п.н.) реплицируется в двух противоположных направлениях к разным концам молекулы, начиная от одной точки (рис. 2.7), а каждая из двух цепей ДНК аденовируса человека (30-38 т.п.н.) реплицируется последовательно всегда от З -конца (рис. 2.8). [c.68]

Репликация линейного дуплексного генома аденовируса человека. Цепи синтезируются последовательно. Копирование матричной цепи начинается каждый раз с З -конца. [c.72]

Поочередная репликация цепей ДНК аденовируса. А Двухцепочечная ДНК аденовируса, у которой с каждым 5 -концевым остатком цитозина связан белок мол. массой 55 кДа. Б. Синтез цепей ДНК последовательно инициируется с конца каждой исходной цепи с помощью [c.91]

Так, например, изучение репликации аденовируса - первого вируса, для которого была создана модельная система репликации in vitro - показало, что такие транскрипционные факторы, как NFI и NF III (O t-1), независимо друг от друга стимулируют вирусную репликацию (в 60 и 6 раз, соответственно). Их одновременное присутствие в тест-системе in vitro приводит к 200-кратно-му росту скорости репликации ( oenjaerts et al., 1994 Mul et al.,1992). [c.240]

При другом способе терминальной инициации роль затравкн выполняет белок, точнее — ковалентное соединение белка с нуклеотидом. Такое соединение возникает в результате образования фосфодиэфирной связи между 5 -гидроксилом дезоксирибонуклео-тида (например, ёСМР) и гидроксилом оксиамииокислоты (например, серина) специального, так называемого терминального белка. В изученных вирусных системах терминальный белок — это всегда вирус-специфический (т. е. закодированный в вирусном геноме) полипептид, и фермент, осуществляющий присоединение нуклеотида, также всегда имеет вирус-специфическую природу. Нуклео-тид-белковый комплекс взаимодействует с З -концом одноцепочечной вирусной ДНК-матрицы при этом нуклеотид, входящий в комплекс с терминальным белком, комплементарен З -концевому нуклеотиду матрицы и служит затравкой, к которой присоединяются последующие нуклеотиды (рис. 136). Ясно, что к 5 -концу синтезированной таким образом цепи ДНК будет ковалентно присоединен белок. Рассмотренный способ инициации цепи ДНК реализуется, например, у аденовирусов и у фага ф29, у которых однонитевые ДНК-матрицы образуются в процессе репликации двунитевого гено-.ма (с.м. с. 267). [c.264]

Парвовирусы — мелкие ДНК-содержащие вирусы животных — имеют в качестве генома однонитевую молекулу ДНК, оба кониа которой способны формировать шпилечные структуры благодаря наличию самокомпле.ментарных последовательностей, В качестве примера рассмотрим схему репликации ДНК аденоассоциирован-ного вируса (репродукция этого вируса требует, чтобы в той же клетке размножался вирус-помощник, каковым может быть, в частности, аденовирус) (рис. 139). [c.268]

MOM без El-области и последовательности, ответственной за упаковку, провели котрансфекцию клетки-хозяина, экспрессирующей Е1-гены. Молекула ДНК аденовируса, дефектная по репликации и упаковке, поставляет гены для синтеза компонентов вируса, а продукт лигирования реплицируется и упаковывается в вирусные частицы. При этом около 99% высвобождаемых вирусных частиц содержат молекулу ДНК с терапевтическим геном (генами). С помощью центрифугирования их можно отделить от дефектных по репликации вирусов, которые все же образуются в незначительном количестве. ДНК-клонирующая емкость такой системы достигает 28 т. п. и. [c.496]

Отсутствие патогенности делает ААВ весьма перспективным вектором для доставки в организм человека терапевтических генов. Рекомбинантный ААВ получают с помощью котрансфекции клетки-хозяина, инфицированной каким-нибудь аденовирусом (вирусом-помощником), двумя плазмидами (рис. 21.8). Одна из них несет терапевтический ген, фланкированный инвертированными концевыми повторами (длиной от 125 п. н.) ААВ, а вторая - два его гена, гер и ap, ответственные за репликацию генома и синтез капсида соответственно. После [c.496]

Рис. 21.8. Вектор на основе аденоассопиированного вируса (ААВ). Проведена котрансфекция клетки-хозяина, инфицированной аденовирусом-помощником, двумя плазмидами, одна из которых содержит терапевтический ген (ТГ), фланкированный инвертированными концевыми повторами (ITR) ААВ, а другая — гены ААВ, ответственные за репликацию гер) и формирование капсида ap), которые находятся под контролем промотора р), и последовательность полиаденилирования (ра). Высвободившиеся после лизиса частицы рекомбинантного ААВ и аденовируса разделяют центрифугированием, а оставшиеся аденовирусные частицы инактивируют нагреванием.

ДНК может происходить только в присутствии репродуцирующихся аденовирусов [207, 208, 463]. В этом случае также не существует никаких серологических связей между паразитом и его помощником. В обоих случаях паразит подавляет репликацию вируса-помощника. [c.169]

Онкогенные участки генома ДНК-содержащих вирусов всегда расположены в районах, которые работают на ранних стадиях жизненного цикла вируса. Эти гены лучше всего изучены у вирусов полиомы и SV40. Анализ функций этих генов осложняется, однако, тем, что эти онкогены входят в группу перекрывающихся генов, один из которых (кодирующий большой Т-антиген, см. разд. 8.1.6) необходим для репликации вирусной ДНК. Еще не вполне ясно, сколько продуктов, кодируемых перекрывающимися генами, участвует в опухолевой трансформации. Известно лишь, что для трансформации нужен средний Т-антиген вируса полиомы в частности, молекулы этого белка обнаружены на внутренней поверхности плазматической мембраны, где они, возможно, связаны с протеинкиназами, фосфорилирующими тирозин (см. ниже). У более крупных ДНК-содержащих вирусов, например аденовирусов, геном гораздо более сложен по-видимому, он кодирует несколько различных онкогенных белков, и для полной трансформации необходимо определенное их сочетание. [c.154]

Регшикация линейной двухцепочечной молекулы ДНК аденовирусов происходит в ядре клетки и ршициируется с обоих концов. Области начала репликации расположены в коротких инвертированных повторах, и для инициации [c.373]

Аденовирусы реализуют уникальный процесс инициации репликации ДНК, известный как белковое праймирование. Вирусный белок рТР ковалентно соединяется с дезоксицитозин-монофосфатом, чья 3 -гидроксильная группа выступает в качестве праймера для последующего наращивания цепи, комплементарной считываемой цепи реплицрфуемой ДНК. Синтез [c.374]

Инициация репликации ДНК аденовируса. Ключевым моментом является связывание инициаторного белка мол. массой 80 кДа с с1СТР и зафепление этого комплекса на З -конце матричной цепи. [c.88]

Поочередная репликация цепей. Репликация ДНК аденовируса происходит без синтеза отстающей цепи и поэтому без образования множественных сайтов инициации и фрагаентов Оказаки (рис. 2.34). Вместо этого цепи линейного дуплею ного генома реплицируются попеременно. Сначала через образование белкового праймера происходит инициация одной цепи, которая непрерывно удлиняется вплоть до заверщения репликации. Вытесненная новосинтезированной цепью, вторая цепь дуплекса служит матрицей при синтезе таким же способом следующего дуплею а. С какого конца родительского дуп- [c.91]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология