Аурамин

Выход аурамина—9 г (80,5% от теоретического). [c.776]

Акридиновый желтый экстра Акридиновый оранжевый экстра Аурамин 00 [c.642]

Аурамин (краситель) Аурамин (основание) [c.450]

Изучают влияние НАД, пирувата и АДФ на флуоресценцию аурамина О, связанного с ЛДГ. Для этого вначале снимают спектр флуоресценции раствора, содержащего 0,04 мМ апо-ЛДГ и 0,15 мМ аурамина О в 0,1 М К-фосфатном буфере (pH 7,0), содержащем 5 мМ ЭДТА, а затем добавляют к пробе лиганды в следующих конечных концентрациях 6 мМ НАД, 6 мМ пируват, 9 мМ АДФ. Регистрируют увеличение флуоресценции комплекса аурамина О с ЛДГ под действием использованных соединений. Ставят контроль, в котором учитывают влияние добавок на флуоресценцию зонда в отсутствие белка. Рост интенсивности эмиссии связанного с белком аурамина О может быть обусловлен либо увеличением его количества, либо изменением флуоресцентных характеристик зонда. В любом случае увеличение флуоресценции зонда при связывании лигандов в активном центре свидетельствует о конформационной перестройке участков моле- [c.343]

Аурамин, несмотря на плохую светопрочность и высокую чувствительность к гидролизующим агентам (кетимин ), в настоящее время является довольно важным красителем благодаря своему ярко-зеленому цвету. [c.1029]

Как исключение нз указанных выше правил сохраняется общепринятые международные названия аурамин, индиго,сафранин, конго красный, хризоидин, метиленовый голубой и др. [c.281]

Цель первой части работы — обнаружение на молекуле ЛДГ участков, способных к взаимодействию с аурамином О демонстрация чувствительности флуоресцентных характеристик связанного аурамина О к взаимодействию ЛДГ с коферментом, субстратом и ингибитором реакции определение значения константы диссоциации (/Сд) комплекса НАД—ЛДГ по флуоресценции аурамина О. [c.340]

Наблюдаемое увеличение флуоресценции зонда в присутствии белка отражает связывание аурамина О с ЛДГ, т. е. [c.342]

Для количественного анализа взаимодействия проводят другой эксперимент, в котором определяют максимальный прирост интенсивности флуоресценции зонда при его полном связывании с белком. При этом постоянную низкую концентрацию аурамина О (которую выбирают таким образом, чтобы можно было зарегистрировать флуоресценцию зонда в буфере) титруют нарастающими количествами фермента. Строят график двойных обратных величин и проводят экстраполяцию к бесконечной концентрации белка. Таким образом устанавливают значение интенсивности флуоресценции данной концентрации зонда при его полном связывании с ЛДГ. Соотношение полученной величины с флуоресценцией данной концентрации зонда в буфере показывает, во сколько раз увеличивается флуоресценция аурамина О при связывании. Используют несколько концентраций аурамина О для титрования белком, что повышает точность определения величины прироста флуоресценции (Фтах). В этих экспериментах [c.342]

К этому классу относятся главным образом основные красители и ряд кислотных красителей, а также кислотно-протравные красители и пигменты. Арилметановые красители отличаются исключительной яркостью, но окраски их непрочны к свету и щелочным обработкам. Из диаминодиарилметановых красителей техническое значение в настоящее время имеет лишь аурамин (ТУ МХП 3709—53), дающий желтые окраски исключительной яркости и чистоты [c.311]

Полученные данные используют для определения типа связыва- ия, количества участков связывания аурамина О на молекуле белка и величины Кд комплекса белка с зондом. [c.343]

Нативный препарат ЛДГ дает обычно около 4 независимых участков связывания аурамина О и значение к, близкое к 1-10 М. [c.343]

Влияние состояния активного центра ЛДГ на флуоресценцию связанного аурамина О [c.343]

Определение прочности связывания кофермента (НАД) по флуоресценции комплекса ЛДГ с аурамином О [c.344]

Взаимодействие НАД с ЛДГ достаточно трудно изучать обычными спектральными методами. Увеличение флуоресценции связанного с ЛДГ зонда под действием НАД позволяет определить значение к дл5 кофермента в комплексе ЛДГ — НАД — аурамин О по изменениям эмиссии последнего. Для этого регистрируют флуоресценцию пробы, содержащей 0,03 мМ апо-ЛДГ и 0,15 мМ аурамин О, после чего титруют данный комплекс раствором НАД до его конечной концентрации [c.344]

В предыдущем подразделе было описано взаимодействие лиганда с тетрамерным белком в равновесной системе (с. 344), при котором существует определенное распределение комплексов ЕА. Добавление к системе лиганда В приводит к усложнению ситуации и требует описания взаимодействия его с комплексами ЕАь ЕА2, ЕАз и ЕА4. Анализ связывания второго лиганда в таких условиях основывается на следующих предпосылках, которые выполняются в случае взаимодействия ЛДГ с аурамином О и с НАД 1) все участки связывания аурамина О идентичны и независимы друг от друга 2) все активные центры ЛДГ идентично и независимо связывают НАД 3) взаимодействие ЛДГ с аурамином О не влияет на связывание НАД и наоборот. [c.347]

Для ответа на поставленный вопрос проводится титрование комплекса ЛДГ с аурамином О нарастающими концентрациями НАД. Проба содержит апо-ЛДГ и аурамин О в конечных концентрациях 45 мкМ и 0,15 мМ соответственно. Регистрируют интенсивность флуоресценции пробы, после чего добавляют нарастающие концентрации НАД до конечной концентрации 6 мМ. Эксперименты проводят в [c.349]

В связи с этим необходимо упомянуть также аурамин, который является связующим звеном между полиметиновыми и истинно трифе-нилметановыми красителями. Первоначально этот краситель был получен нагреванием кетона Михлера с МН4С1 и гпСЬ при 150° [c.1028]

Молекула зонда равновесно присоединяется к белку в участках, неперекрывающихся с активными центрами. Флуоресцентные характеристики связанного аурамина О чувствительны к состоянию последнего. К изменению флуоресценции аурамина О ведет перестройка белкового окружения молекулы связанного зонда, возникающая под действием связавшихся в активном центре НАД, пирувата или адениловых нуклеотидов. Другими словами, между активным центром ЛДГ и аураминсвязывающим участком белка существует конформационная взаимосвязь. [c.340]

В пробирке диаметром 30 мм или фарфоровом тигле сплавляют смесь равных количеств порощкообразного хлористого цинка (примечание 1), хлористого аммония и кетона Михлера и перемешивая, нагревают на масляной бане при 200°. После того как желтеющий плав начнет загустевать, отбирают (время от времени) "небольшие пробы и проверяют их растворимость в воде. Полная растворимость указывает а. конец реакции, которая обычно продолжается от 1 до 1,5 часа. К эя-Йму времени плав становится очень густым, а после охлаждения затвердевает полностью. Затвердевший плав измельчают в ступке заливают его в небольшом стакане 60 мл холодной воды, добавляют каплю соляной кислоты и перемешивают до тех пор, пока не растворятся хлористь й Цинк и хлористый аммоний, а краситель останется в виде очень мелкрй и однородной (без твердых комочков) взвеси. Капля жидкости на бумаге должна давать вытек, очень слабо окрашенный в желтый цвет. Осадок отфильтровывают на воронке Бюхнера и промывают холодной водой. Затем осадок дважды обрабатывают 150 мл воды, нагретой до 60°, и отфильтровывают. На фильтре остается небольшое количество бесцветного кетона Михлера (примечание 2). К объединенным фильтратам, нагретым до 50°, добавляют, при перемешивании, поваренную соль (из расчета 20 г на каждые 100 мл жидкости). После того как соль полностью растворится, жидкости дают остыть аурамин выпадает в виде желтых пластинок, которые отфильтровывают и Сушат на бумаге. [c.776]

АУРАМИН, диарилметаиовый краситель. Желтые крист. Г)асти. в воде, си., эф. Получ. нагреванием (160--170 °С) кетона Михлера с ЫН С в ггрнсут. безводного 2г)С1 . Из-за легкости гидролиза А, крашение им возможно лишь прн. 50—(1()°С. Окраски [c.60]

При изучении изозима М4 лактатдегидрогеназы (ЛДГ) из мышц свиньи связывание НАД, пирувата и других соединений в активном центре фермента можно наблюдать с помощью флуоресцентного катионного зонда аурамина О, структура которого приведена на рисунке [c.340]

Раствор аурамина О готовят на том же буфере, используя коэффициент молярной экстинкции, равный 4,41-10 М см при 430 нм. Титрование ЛДГ аурамином О проводят непосредственно во флуори-метрической кювете, добавляя к раствору белка конечной концентрации 4,4-10 5 М раствор аурамина О так, чтобы его конечные концентрации менялись от М до 2,5-10 М. В качестве контроля снимают флуоресценцию тех же концентраций аурамина О в отсутствие белка Значения интенсивности флуоресценции исправляют на флуоресценцию свободного зонда и на разведение белка при добавлении аурамина О (следует использовать минимальные объемы раствора красителя). Учитывают влияние эффекта внутреннего фильтра по формуле [c.341]

Чтобы сделать выбор между двумя возможными объяснениями эффекта, определяют концентрацию НАД, необходимую для получения холоформы ЛДГ, добавляя к комплексу апо-ЛДГ с зондом (с. 340) НАД до тех пор, пока флуоресценция аурамина О не перестанет увеличиваться. Затем в отдельной пробе титруют холо-ЛДГ аурамином О (так же, как апо-ЛДГ) определяют число участков и величину к для комплекса аурамина О с холо-ЛДГ. В случае совпадения полученных значений с величинами, определенными для апофермента, увеличение интенсивности флуоресценции зонда при связывании НАД с апо-ЛДГ объясняют изменениями структуры аураминсвязывающих областей молекулы белка в результате изменения состояния активного центра. [c.344]

Значения а находят из отношения ДФ/ДФтах, где АФтах — изменение флуоресценции связанного зонда при насыщающей концентрации НАД, АФ — изменение флуоресценции при данной концентрации НАД. При графическом представлении данных по оси абсцисс откладывают Lo/a, по оси ординат — 1/(1—а). Величину к находят как котангенс угла наклона полученной прямой. Определенное значение к сравнивают со значениями этой величины, известными из литературы и равными 0,5 мМ. Аналогичным образом может быть определено значение к для комплексов пирувата и АДФ с ЛДГ по их влиянию на флуоресценцию связанного с ЛДГ аурамина О. [c.344]

Препаративная органическая химия (1959) -- [ c.776 ]

Химический энциклопедический словарь (1983) -- [ c.60 ]

Приготовление синтетических химико-фармацевтических препаратов Изд.2 (1923) -- [ c.203 ]

Препаративная органическая химия (1959) -- [ c.776 ]

Основные процессы синтеза красителей (1952) -- [ c.267 ]

Большой энциклопедический словарь Химия изд.2 (1998) -- [ c.60 ]

Фотометрический анализ издание 2 (1975) -- [ c.317 ]

Органическая химия (1963) -- [ c.525 , c.526 ]

Органические люминофоры (1976) -- [ c.292 ]

Органическая химия 1965г (1965) -- [ c.457 ]

Органическая химия 1969г (1969) -- [ c.517 ]

Химические товары справочник часть 1 часть 2 издание 2 (1961) -- [ c.358 ]

Химические товары Справочник Часть 1,2 (1959) -- [ c.358 ]

Краткая химическая энциклопедия Том 1 (1961) -- [ c.0 ]

Капельный анализ (1951) -- [ c.454 ]

Химия и технология пигментов Издание 2 (1949) -- [ c.525 ]

Химико-технические методы исследования Том 3 (0) -- [ c.367 ]

Справочник показателей качества химических реактивов Книга 1,2 (1968) -- [ c.102 ]

Производство органических красителей (1962) -- [ c.266 ]

Лекционные опыты и демонстрационные материалы по органической химии (1956) -- [ c.408 ]

Электронные представления в органической химии (1950) -- [ c.212 ]

Основные начала органической химии Том 2 1957 (1957) -- [ c.423 ]

Основные начала органической химии Том 2 1958 (1958) -- [ c.423 ]

Химия красителей (1979) -- [ c.146 ]

Лабораторное руководство по химии промежуточных продуктов и красителей (1948) -- [ c.141 ]

Люминесцентный анализ неорганических веществ (1966) -- [ c.52 ]

Химически вредные вещества в промышленности Часть 1 (0) -- [ c.484 ]

Лабораторный практикум по промежуточным продуктам и красителям (1961) -- [ c.246 ]

Химия красителей (1981) -- [ c.58 , c.72 ]

Химия синтаксических красителей Том 4 (1975) -- [ c.110 , c.115 , c.116 , c.117 , c.177 ]

Химия синтетических красителей (1956) -- [ c.1827 , c.1857 ]

Химия синтетических красителей (1956) -- [ c.1827 , c.1857 ]

Введение в химию и технологию органических красителей Издание 3 (1984) -- [ c.73 , c.76 , c.101 , c.105 , c.166 ]

Органические красящие вещества Издание 4 (1954) -- [ c.27 , c.47 , c.357 , c.358 , c.374 , c.375 , c.403 ]

Титриметрические методы анализа органических соединений (1968) -- [ c.0 ]

Новейшие методы исследования полимеров (1966) -- [ c.172 , c.178 , c.181 , c.185 ]

Краткая химическая энциклопедия Том 1 (1961) -- [ c.0 ]

Химия красителей Издание 3 (1956) -- [ c.308 , c.311 ]

Полярографический анализ (1959) -- [ c.502 , c.729 ]

Введение в химию и технологию органических красителей (1971) -- [ c.43 , c.44 , c.71 , c.73 , c.110 , c.142 , c.144 ]

Основные процессы синтеза красителей (1957) -- [ c.266 , c.267 ]

Курс органической химии (1955) -- [ c.527 ]

Химия и технология органических красителей (1956) -- [ c.233 ]

Введение в химию и технологию органических красителей Изд 2 (1977) -- [ c.63 , c.64 , c.136 , c.137 , c.169 ]

Органическая химия красителей (1987) -- [ c.102 , c.266 ]

Химические товары Справочник Часть 2 (1954) -- [ c.330 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология