Гибридизация клеток

В разделе изложены методы иммунизации животных и гибридизации клеток для получения поликлональных и моноклональных антител, методы получения препаративных количеств антител и их очистки, способы введения ферментных меток в антитела и антигены для использования в иммуноферментном анализе, способы введения радио-изотопных меток в антитела для радиоиммунного анализа, методы изучения антигенных свойств ферментов [c.307]

Следующий этап генетической инженерии—перенос генов в клетку — осуществляется тремя способами трансформацией (перенос генов посредством выделенной из клеток и освобожденной от примесей ДНК), трансдукцией (перенос генов посредством вирусов) и гибридизацией клеток, полученных из разных организмов (высших животных, микроорганизмов и др.) (рис. 13.7, 13.8). Заключительный этап этих экспериментов сводится к адаптации введенного гена в организме хозяина, но он почти не зависит от искусства экспериментатора. [c.496]

С целью преодоления преград для генетического обмена, существующих в обычных системах скрещивания, был разработан метод слияния протопластов (клеток с удаленными клеточными оболочками). Этот метод пригоден для получения межвидовых и даже межродовых гибридов. Его можно использовать при гибридизации клеток одного вида, которые принадлежат к несовместимым труппам спаривания или же когда природная система скрещивания малоэффективна в плане образования генетических рекомбинантов. [c.308]

Гибридизация клеток в культуре [c.294]

Гибридизация клеток Протоонкогены [c.332]

Именно так и развивалась генетика человека. В разд. 2.1 мы обрисуем структуру группы английских исследователей хромосом, работавших в конце 50-х гг., когда были обнаружены первые хромосомные аберрации у человека и положено начало клинической цитогенетике. Другие, современные примеры-группы, активно занимающиеся изучением главного комплекса гистосовместимости (разд. 3.5.5) и поисками соответствия между генными локусами и сегментами хромосом с помощью метода гибридизации клеток (разд. 3.4). [c.16]

Сначала мы опишем классический подход к локализации генов, который использовали Морган и его последователи. Это дает благоприятную возможность для введения некоторых общих понятий. Затем расскажем о статистических методах, предназначенных для установления и измерения сцепления у человека. Примеры вычислений приведены в приложении 9. Наконец, изложим принципы гибридизации клеток и их применение к изучению сцепления. [c.191]

Метод гибридизации клеток позволяет изучать и локализовать гены, продукты которых можно идентифицировать как в клетках человека, так и в клетках животных. Один из путей идентификации - использование селективной системы. [c.201]

Феномен формирования передовой группы исследователей. Тем временем в исследованиях по гистосовместимости стал проявляться тот же феномен, который имел место при изучении сцепления методом гибридизации клеток. Сформировалась группа ученых, которые поддерживали между собой тесные контакты, созывали специальные международные совещания, наладили прямой обмен информацией, основали собственный журнал. В этом процессе важную роль сыграло Третье рабочее совещание по гистосовместимости, организованное в 1967 г. Контакты между чле- [c.214]

Обсуждены разные приемы клеточно-инженерной технологии на растительных, животных н бактериальных клетках. Рассмотрены проблемы модификации протопластов и соматической гибридизации клеток растений, способы получе ния гибридов и методы идентификации и выделения ассоциаций клеток высших растений с микроорганизмами. [c.4]

Данное учебное пособие содержит главы, посвященные клеточной инженерии. Этот термин применяется либо в очень узком смысле, предполагая только генетическое конструирование новых форм жизни при помощи гибридизации клеток (животных, растений), либо в очень широком, включая сюда как использование самих культивируемых клеток, так и различные манипуляции с ними, с целью создания технологий, позволяющих решать важные для хозяйственной деятельности человека задачи. Авторы, участвующие в создании данного пособия, использовали термин клеточная инженерия в его широком значении. [c.5]

Гибридизация клеток животных и растений. [c.228]

Тем не менее, следует особо выделить методы клеточной и генной инженерии, когда в экспериментальных условиях удается создавать клетки с заведомо известными свойствами Так осуществлены соматическая гибридизация клеток картофеля и томата (гибрид назван "помато"), перенос генетической информации о синтезе человеческого или животного гормона инсулина в бактериальные клетки (кишечной палочки), способных затем продуцировать полипептидные цепи инсулина [c.41]

Селекция по типу HAT и другие способы позволяют получать стабильные клеточные линии, несущие индивидуальные человеческие хромосомы. Существуют более прямые методы, позволяющие получать гибридные клеточные линии, содержащие определенные компоненты генома человека. Это гибридизация клеток мыши с микроклетками человека, несущими неполный геном, и эндоцитоз мышиными клетками изолированных хромосом человека. [c.304]

Две клетки, сливаясь, образуют гетерокарион - одну комбинированную клетку с двумя ядрами. Обычно, чтобы осуществить слияние клеток, клеточную суспензию обрабатывают инактивированными вирусами, или полиэтиленгликолем. Оба этих агента повреждают плазматическую мембрану клетки, что и приводит к слиянию клеток. Образование гетерокарионов дает возможность смешивать компоненты двух отдельных клеток с целью изучения их взаимодействия. Например, если неактивное ядро куриного эритроцита попадает в результате слияния в цитоплазму клетки, растущей в культуре ткани, то такое ядро реактивируется начинается синтез РНК, а затем и репликация ДНК. Именно в опытах по гибридизации клеток мыши и клеток человека впервые были получены данные, свидетельствующие о том, что белки поверхности клеток человека и мыши, находившиеся вначале на своих половинках гетерокариона, быстро диффундируют и перемешиваются по всей его поверхности [c.206]

Вскоре и биохимические, и цитогенетические методы стали вместе использоваться в генетике соматических клеток. Появилась возможность выявлять специфические дефекты ферментов в отдельных клетках, растущих в культуре ткани. Разработка Генри Харрисом [254] и Эфрусси [247] методов гибридизации клеток человека с мышиными клетками позволила установить локализацию многих генов и построить хромосомные карты человека, которые уже соперничают в своей полноте с аналогичными картами для дрозофилы (разд. 3.4.3) и мыши (приложение 9). [c.32]

Анализ сцепления у человека гибридизация клеток и ДНК-техиология [c.199]

Харрис и Воткинс (1965) [254] повысили частоту слияния различных клеток путем воздействия вирусом Сендай, предварительно инактивированным ультрафиолетом. С помощью этого метода им удалось показать, что слиться могут клетки самых разных видов организмов и что слившиеся клетки жизнеспособны. С этой работы началось широкое использование метода гибридизации клеток в различных областях клеточной биологии. [c.200]

Думается, для многих читателей будет неожиданностью, если сказать, что до недавнего времени хромосомы человека — точнее, карта расположения в них тех или иных генов — были для биологов почти что терра инкогиита . А соматическая гибридизация клеток за короткое время позволила установить, в каких хромосомах находятся несколько десятков генов. [c.170]

Предпосылками для возникновения метода получения гибридом, синтезирующих моноклональные антитела, были разработки двух методических подходов 1) получение миелом, адаптация их к условиям культивирования вне организма и 2) метод соматической гибридизации клеток. [c.91]

В нормальных условиях слипание и слияние клеток происходит сравнительно редко (в зависимости от функционального состояния клеток). В связи с практическими проблемами соматической гибридизации клеток, реконструкции клеток (слияние кариопласта с цитопластом), получения гибридом из лимфоцитов и клеток миеломы для выработки моноклональных антител необходимо создание универсальных методов слияния клеток и органелл in vitro. Используемые индукторы слияния на фоне Са + (1—10 мМ) клеток животных — вирус Сендай (в оболочке которого присутствует нейраминидаза), клеток растительных протопластов — полиэтиленгликоль — приводят к низкому выходу гибридных клеток. В 1979 г. был разработан универсальный метод слияния любых клеток (в суспензии) —метод электрического пробоя. Этот метод основан на резко.м увеличении проводимости и проницаемости мембран в сильном электрическом поле (40 мкс, 4—6 кВ/см). При этом среди способов приведения клеток в контакт перед электростимуляцией используют диэлектрофорез — перемещение клеток в неоднородном переменном электрическом поле в растворе диэлектрика в сторону увеличения напряженности (в этом случае формируется большое число контактирующих друг с другом параллельных цепочек клеток). Увеличение образования гибридных клеток (химер) или гигантских клеток описанным способом достигается ферментативной обработкой клеток до слипания и слияния, главным образом направленной на удаление гликокаликса. [c.90]

У высших организмов большие перспективы для переноса чужеродной наследственной информации открываются в результате разработки метода гибридизации клеток. Недавно доказана возможность трансгеноза с помощью ДНК, выделенной из клеток и освобожденной от примесей (рис. 70). На искусственной среде выращивали клетки зародыша цыпленка. В определенный момент к ним добавляли бромдезоксиуридин, который включался во вновь синтезированные нити ДНК- По этой метке новые синтезированные за время наблюдения нити ДНК можно было отличить от старых. В эту среду одновременно добавляли ДНК, полученную от мыши и меченную тритием ( Н), что позволяло отличить ДНК мыши от ДНК цыпленка, которая или содержала, или не содержала в качестве метки бром. Через некоторое время после размножения клеток из них выделяли ДНК и выявляли в ней распределение меток по брому (ДНК цыпленка) и тритию (ДНК мыши). При этом обнаруживался обмен кусочками их ДНК ДНК мыши включалась в ДНК цыпленка н наоборот. [c.172]

Моноклональные антитела синтезируются отдельными клонами гибридных клеток (гиб-ридомами), которые впервые были получены в 1975 г. Келером и Мильштейном в результате соматической гибридизации клеток миеломных опухолей и В-лимфоцитов, продуцирующих антитела после иммунизации животных соответствующим антигеном. К настоящему времени отобраны такие варианты миелом (например, линии Х63-А8.6.5.3, р2/0-А и др), которые не способны синтезировать собственные иммуноглобулины, и вся гибридомная продуктивность выражается и синтезе огромного количества моноклональных антител с интересующёй исследователя специфичностью. [c.164]

Другой особенностью используемых для гибридизации клеток миелом является отсутствие у них фермента гипоксантинфосфори-бозилтрансферазы, участвующего в синтезе ДНК- Этот фермент обеспечивает запасный путь синтеза аденозинмонофосфата в тех случаях, когда нормальная цепь ферментативных реакций заблокирована (например, в присутствии ингибитора — аминоптерина). На питательной среде, содержащей гипо-ксантин, аминоптерин и тимидин (НАТ-сре-да), такие миеломные клетки размножаться не способны. Вторым партнером для слияния служат иммунные лимфоидные клетки селезенки или лимфоузлов, которые сами по себе нежизнеспособны в культуре. Сомати- [c.164]

Потенциальные возможности метода гибридизации клеток огромны. Его применяют не только для изучения проблем биологии развития. Представьте себе, папример, как много этот метод может дать для изучения генетики человека. Можно взять клетки у людей, страдающих генетически обусловленными заболеваниями. Используя метод гибридизации клеток и изучая образующиеся гибридные кдоны, можно определить число различных генов, ответственных за некоторые болезни (болезнь Дауна, гемофилия, галактоземия, диабет и др.), и их локализацию в хромосомах. Таким образом, можно проводить скрещивание у человека, не скрещивая людей. К моменту написания этой книги методом соматической ги ридизации уже идентифицировано 16 генов человека. Есть ли еще более привлекательная область исследования лля молодых ученых, чем эта [c.229]

Многие из проблем, которые возникают при соматической гибридизации клеток человека, успешно решаются, однако, другим путем. Дело в том, что с помощью вируса Эпштейна — Барр (ВЭБ) можно трансформировать и иммортализовать В-лимфоциты человека (но не мыши), не прибегая к слиянию с клетками миеломы [2, 3]. Применение ВЭБ-трансформации для создания линий-продуцентов представляет собой самое существенное отличие получения МКА человека по сравнению с МКА мыши. Данный метод будет подробно описан ниже. [c.155]

Предыдущий раздел может служить руководством для тех, кому необходимо получить МКА человека. Однако для решения той же задачи существуют и другие подходы, с которыми читателю целесообразно ознакомиться. В большинстве других методик используется не ВЭБ-трансформация, а гибридизация клеток. В некоторых работах свежевыделенные клетки периферической крови сразу же сливали с перевиваемыми клеточными линиями [13]. В других — перед слиянием клетки стимулировали митогенами [14]. В-лимфобласты, очевидно, гибридизуются [c.162]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология