Метод иммунизации

В разделе изложены методы иммунизации животных и гибридизации клеток для получения поликлональных и моноклональных антител, методы получения препаративных количеств антител и их очистки, способы введения ферментных меток в антитела и антигены для использования в иммуноферментном анализе, способы введения радио-изотопных меток в антитела для радиоиммунного анализа, методы изучения антигенных свойств ферментов [c.307]

Несмотря на все осложнения, возникающие с антителами, знание их свойств, давшее практической медицине метод иммунизации, открыло человечеству широкую дорогу к решению проблем продления жизни и ликвидации опасных заболеваний. [c.187]

Выполняемая на кафедре работа по гибридомной технологии связана с совершенствованием методов иммунизации вне орга- [c.121]

В отличие от бактерий сибирской язвы и куриной холеры возбудителя бешенства Л. Пастер увидеть не мог, но со своими сотрудниками научился размножать его в мозге кроликов. Мозг умерших кроликов сушили, выдерживали определенное время, в результате чего добивались ослабления возбудителя. Как выражение признания заслуги Э. Дженнера в разработке метода иммунизации против оспы свой метод защиты от бешенства Л. Пастер также назвал вакцинацией. С тех пор все способы профилактического прививания против инфекционных заболеваний называют вакцинацией, а препараты, которые при этом используют, — вакцинами. [c.432]

Схема иммунизации. Для получения антисывороток к мышиным IgG животным внутримышечно (в бедро) и подкожно (в области живота) в нескольких точках вводят 2 мл эмульсии из растворенного в физиологическом растворе IgG (1 мг/мл) и 1 мл адъюванта Фрейнда. Через месяц иммунизацию повторяют, вводя 500 мкг lgG в виде эмульсии с равным объемом адъюванта Фрейнда. Затем каждую вторую неделю в течение 6—8 нед вводят по 200 мкг IgG с адъювантом. Через 2 нед после последней иммунизации из краевой вены уха берут пробы крови и определяют титры антител методом иммуноферментно- [c.307]

На новую высшую ступень люминесцентная цитохимия была поднята Кунсом с сотрудниками [4], разработавшими метод люминесцентно-меченых антител. В основном он заключается в следующем. В результате иммунизации животного соответствующим антигеном получают специфическую сыворотку белковые их фракции, в которых преимущественно сосредоточены специфические антитела, обрабатывают флуорохромом и получают комплекс флуорохром — антитело, используемый для обнаружения соответствующего антигена. Наличие и локализация последнего в микроскопическом препарате выявляется в результате реакции антиген — антитело. Продукт этой реакции ярко люминесцирует и с помощью люминесцентного микроскопа может быть открыт даже в отдельных участках клеток [18, 14]. [c.317]

Иммунизация не единственный эффективный метод сражения с болезнями. Наш век, несомненно, войдет в историю медицины и как век антибиотиков. [c.187]

Чужеродные антагонисты вирусов пока еще не найдены. Только устойчивые или иммунные хозяева могут успешно противостоять вирусной инфекции. Поэтому для биологической борьбы с вирусными инфекциями проводят искусственную иммунизацию, т. е. предохранительную прививку, потенциального хозяина. Этот метод обусловливает усиление защитной реакции организма на специфический патоген с помощью ослабленного или убитого возбудителя и основан, в первую очередь у позвоночных, на образовании антител (см. раздел 12.1). [c.215]

Таким образом, инфекционные болезни стали редкостью в Великобритании и других развитых странах благодаря улучшению медицинского обслуживания, жилищно-бытовых условий и питания населения. Не следует, впрочем, недооценивать роли и собственно здравоохранения, т.е. совершенствования методов профилактики (распространение иммунизации) и лечения (например появление антибиотиков, подробнее рассмотренных ниже). Речь идет о сложном взаимодействии общесоциальных, экономических и медицинских фак- [c.191]

Использование антисыворотки может обогатить минорную фракцию в популяции, состоящей из двух видов микроорганизмов. При исследовании смешанной культуры, в которой присутствуют два вида морской спириллы —крупные и мелкие, Линн и Криг [45] обнаружили, что мелких спирилл значительно больше. Это делало невозможным получение отдельных колоний крупных спирилл методом посева в чашки. Более того, для этих целей не подходил ни один из многочисленных методов селекции. Для получения накопительных культур крупной спириллы авторы выделили мелкую спириллу и использовали ее для иммунизации кролика. Когда полученную антисыворотку добавили к смешанной культуре, мелкие спириллы агглютинировали и осели на дно пробирки. Для получения отдельных колоний методом посева в чашки использовали надосадочную жидкость, содержащую теперь много крупных спирилл. [c.295]

В. Для получения кроличьей антисыворотки к белкам сыворотки человека рекомендуется описанный ниже метод иммунизации, позволяющий приготовить, по-видимому, наилучшую иммунную сыворотку для выявления многих белковых компонентов, в том числе иммуноглобулинов. В этом методе совмещены две схемы иммунизации по Мильгрому и по Проому. [c.117]

Современные методы иммунизации in vitro основаны на двух системах культивирования лимфоцитов, разработанных в конце 1960-х годов. Метод суспензионного культивирования (R. Mi-shell, R. Dutton, 1966, 1967) был первым методом, в котором иммунизация полностью проходила вне организма. Критическими факторами в данном методе были низкая концентрация кислорода в атмосфере (7%), высокая плотность клеток, легкое покачивание культуры, ежедневное добавление свежей среды и выбор подходящей партии СПК и антигена (использовали эритроциты барана). Эта система была усовершенствована Р. Кликом (1972), который предложил добавлять в среду 2-меркаптоэтанол, предшественники нуклеиновых кислот, инсулин, глутамин, а также дополнительные аминокислоты. При таких условиях иммунный ответ наблюдали в отсутствие покачивания и в атмосфере с 5% СОг. [c.103]

Как следует из вышеприведенной схемы получения абзимов, иммунизация экспериментальных животных является основным этапом, определяющим их специфичность. В настоящее время разработаны методы иммунизации, которые позволяют получать каталитические антитела, реализующие механизмы кислотного, основного или ковалентного катализа. Так, использование для иммунизации гаптенов, содержащих положительно заряженные группы, например четвертичные амины, как правило, сопровождается включением в активный центр абзима отрицательно заряженных аминокислотных остатков (Glu, Asp), а для гаптенов с отрицательно заряженными группами наблюдается обратная картина [285]. Иммунизация гаптенами, которые ковалентно взаимодействуют с аминокислотными остатками центра связывания антител, приводит к образованию каталитических антител, содержащих в активном центре нуклеофильные аминокислотные остатки (Lys, Ser), которые участвуют в реакциях ковалентного катализа [286]. Такая схема иммунизации позволяет получать абзимы, осуществляющие специфический гидролиз ароматических эфиров [287]. [c.430]

При введении животному чистого белка вырабатываемые антитела специфичны только для этого белка. В таком случае получают моносиецифичную антисыворотку (см. рис. 4.2). Следует отметить, что иммунизация очищенным белком не всегда дает такой результат. Примеси, присутствующие в очищенной фракции, если они достаточно иммуногенны, могут вызвать образование антител. Чрезвычайно важно удостовериться, что антисыворотка моноспецифична до использования ее при определенных методах (в сущности, ири всех описанных здесь методах, за исключением методов иммунопреципитации в геле) это исключит возможность участия в реакции неспецифических антител. Неспецифические антитела чаще появляются при длительных процессах иммунизации. [c.96]

Последний из рассматриваемых примеров белок-белковых взаимодействий касается антител или иммуноглобулинов (IgG). Эти белки производятся В-лимфоцитами в тех случаях, когда чужая макромолекула типа белка или углевода попадает в организм. Чужая макромолекула, называемая антигеном, может проникать туда в составе поражающих бактерий или вирусов через кожу (случайно, в результате ранения или намеренно при иммунизации) или через кишечник при пищевой аллергии. Если ковалентно присоединить к белку малую молекулу (гаптен) и затем ввести его в организм, обычно вырабатываются антитела к гаптену. Такое быстрое продуцирование антител подопытными животными является основой различных иммунологических методов, в частности ра-диоиммунодиагностических. [c.564]

Линия гибридомных клеток не истинно нейрональная модельная система, однако она должна быть упомянута здесь, поскольку представляет собой полезный инструмент исследования в нейрохимии. Каждый В-лимфоцит обычно секретирует только один тип антител. Смесь большого числа моноспецифических антител образует нормальную гетерогенную антисыворотку. Для получения высокопродуктивных моноспецифических лимфоцитов, секретирующих антитела, Кёлер и Милштейн проводили слияние В-клеток иммунной мыши с опухолевыми клетками. В отличие от нормальных лимфоцитов, полученные гибридные клетки растут и размножаются практически бесконечно и продуцируют смесь антител против антигена, используемого для иммунизации. Даже если антиген является индивидуальным белком, продуцируемые антитела представляют собой смесь многих антител, каждое из которых направлено против одного специфичного антигенного участка исходной молекулы. Для получения моноспецифической сыворотки, т. е. раствора антител против одной антигенной области и происходящих из одного вида гибридомных клеток, эти клетки необходимо отобрать и клонировать . Теперь клон продуцирует моноклональные антитела , гомогенную популяцию антител против только одной детерминанты антигена. Эти моноклональные антитела можно пспользовать для разнообразных исследований, например для идентификации функциональных участков молекулы. Но что еще более важно, такой метод может использоваться для полу- [c.371]

Таким образом, при традиционных методах получения антител после иммунизации ж ивотных имунные глобулины оказываются, как правило, поликлональными, тогда как с помощью гибридом получают МкАТ. [c.571]

В настоящее время разработаны иммунологические методы определения КБА. В этих методах для иммзшологической регистрации КБА, образующихся при появлении в нем канцерогенных веществ, используются антитела, полученные с помощью азопротеинов, содержащих канцерогенное вещество, присоединенное ковалентной связью к носителю белковой природы. При помощи иммунологических методов КБА обнаруживаются в биологических жидкостях в период инициации экспериментального канцерогенеза у животных, у больных с опухолями и у рабочих с профессиональным онкологическим риском. Образование КБА коррелирует с канцерогенезом, и поэтому они могут служить эффективными маркерами рака и онкологического риска. Однако следует отметить, что при иммунизации животных конъюгатами канцерогенов с белковыми носителями неизбежно индуцируются побочные антитела против общевидовых антигенов, что затрудняет интерпретацию результатов определения канцерогенов в биологических материалах. Побочные антитела ограничивают специфичность антисывороток к гаптенам (веществам, к которым вырабатываются антитела в организме), особенно при необходимости их регистрации в крови человека. [c.184]

НА в структуру КПА-1 и БД в структуру КПА-П вводили посредством реакции азосочетания. Для исследования иммуногенно-сти КПА-1 и КПА П проводилась иммунизация кроликов водными растворами КПА-1 или КПА-П. Методом встречной иммунодиффузии в агаре было установлено [102], что полученные иммуносыворотки (соответственно, А и Б) не взаимодействуют с исходным полимером-носителем - терполимером ВП-КК-п-КАФ, но реагируют с соответствующим КПА, использованным в низкой концентрации (2.010 мол/л). [c.185]

Иммунизацией кроликов КПА П1 была получена иммуносыворотка В, которую использовали в качестве тест-системы для определения наличия КБА, содержащих 3-ГАКв крови опьггных животных и пациентов. Объектом исследования служили сыворотки крови рабочих резиновой промышленности, имеющих повышенный риск заболеваний опухолями легких и желудка [107]. Определение наличия 3-ГАК-КБА в сыворотке крови проводилось методом встречной иммунодиффузии в агаре. В опытах использовалась сыворотка 56 рабочих. Контролем служила сыворотка крови 30 [c.186]

Пептиды из нитрованного лизоцима, содержащие остатки нитротирозина, выделяли на сефарозе (Sepharose) с иммобилизованными антителами [45] (рис. 34.16). Антитела получали иммунизацией кроликов и коз комплексом нитротирозин—белок. Антитела выделяли из сыворотки методом аффинной хроматографии на сефарозе с фиксированным нитро-у-глобулином [46]. После десорбции 0,1 М уксусной кислотой антитела конденсировали с сефарозой, получая, таким образом, иммуносорбент. Последний использовали для выделения в одну стадию пептидов с остатком нитротирозина. [c.415]

Метод, разработанный Коном и Эдсоллом, включает фракционное осаждение спиртом при низкой температуре и подходящей вариации значений pH и имеет то преимущество, что в этих условиях на растворимость белков заметно влияет ничтожно малое изменение концентрации солей. Этим методом были получены пять основных фракций, которые не были гомогенными, но оказались пригодными для клинических целей и дальнейшего фракционирования на индивидуальные компоненты. Одна фракция состоит в основном из альбумина и особенно эффективна как противошоковое средство. Другая фракция содержит у-глобулин, который захватывает большое количество антител. Эти белки образуются в живом организме ш ответ на проникновение чужеродных тел (антигенов), например белков различных патогенных организмов. Эта фракция находит клиническое применение для предохранительной временной пассивной иммунизации к различным болезням. Примерно десять глобулинов, принадлежащих к этим трем типам, были получены в индивидуальном, состоянии. Два, из них являются липопротеннами или, может быть, различными формами одного и того же липопротеина. Липопротеины крови состоят из белка, фосфолипи- [c.656]

В силу того что растворимость антигена ТТГ и антител к нему достаточно близки, для получения специфических антител из иммунной сыворотки был применен иммуносорбент — аминоцеллюлоза, и выделение антител к ТТГ проводили по. методу, разработанному Гурвичем в Институте микробиологии и эпидемиологии им. Н. Ф. Гамалея [107, 108]. Иммунизация проводилась стандартизованным импортным тиреотропным гормоном с биологической активностью 5 USP/ is . [c.517]

Хотя эксперименты, в которых в качестве индикаторов использовались меченные изотопами вещества, дали много ценных сведений относительно синтеза белка, тем не менее в этой области до сих пор еще остались нерешенными основные проблемы. На основании этих опытов невозможно решить, происходит ли непрерывное самообновление белков путем синтеза и последующего распада отдельных молекул белка или же оно обусловлено тем, что каждая из этих молекул, не распадаясь нацело, постоянно обменивает свои отдельные составные части. Подобный обмен может достигаться, например, путем временного размыкания пептидных связей и включения аминокислоты между концами раскрытых цепей. Для разрешения этой проблемы были использованы иммунологические методы. Как уже указывалось в гл. XIV, антитела находятся во фракции у глобулинов сыворотки. Если вызвать образование антител у кролика, иммунизируя его каким-либо антигеном, то вновь образованные иммунные т-глобулины можно отдифференцировать от f-глобулинов, присутствовавших до иммунизации, по их способности преципитировать соответствуюший антиген. Так, например, инъекция полисахарида пневмококков SIII приводит к образованию SIII-анти-тел во фракции глобулинов иммунной сыворотки. Если подопытным кроликам помимо антигена вводится N -глицин, то через небольшой промежуток времени меченая аминокислота обнару- [c.390]

В течение хронического опыта велось наблюдение за общим состоянием и весом всех животных. У кроликов следили еще за скоростью свертывания крови, длительностью гипноза и продукцией специфических антител после иммунизации, у морских свинок — за работоспособностью. У белых мышей изучали потребление кислорода, морфологический состав периферической крови, способность к суммации подпороговых кожноэлектрических импульсов и условнорефлекторную деятельность. В конце эксперимента у мышей исследовали работоспособность методом плавания. [c.146]

Иммунизацию кроликов проводили после 47 суток хронического отравления. Животным однократно подкожно вводили гретую брюшнотифозную вакцину, изготовленную из штамма в дозе 1 млрд. микробных тел (по оптическому стандарту). Через 7 14 21 28 и 35 суток после иммунизации у кроликов из ушной вены брали кровь и с сывороткой ее ставили реакции агглютинации по макроскопическому объемному методу (М. Н. Лебедева, 1955). При этом использовали брюшнотифозные монодиагностикумы О (IX) и Н ( ) производства Ленинградского института вакцин и сывороток. Последнее разведение сыворотки, дававшее отчетливую реакцию агглютинации (50%, или ++), принимали за титр соответствующих агглютининов у данного животного. [c.147]

Через 4 7 13 суток после иммунизации у крыс из хвоста брали кровь и с сыворотками крови ставили реакции агглютинации. При постановке реакции использовали монодиагпостикум брюшнотифозный О (IX), производства Ленинградского научио-псследователь-ского института вакцин и сывороток (серия № 71, контрольный № 824). Реакция макроагглютннации ставилась по общепринятому методу (В. Е. Предтеченский и др., 1950). [c.295]

ОНО не требует такого сложного оборудования, как процесс холодного этанола . Метод успешно применялся для иммунизации человеческой сыворотки с целью фракционирования комплексной группы КЬ-солевых аглютининов, КЬ-блокирующих антител и криптаглютиноидов эти антитела были соответственно найдены в гамма-глобулине, в эйглобулинах + альфа- и бета-гло-булмы и протеиновых фракциях бета-глобулина [281. [c.618]

Однако вскоре возникла еще одна неожиданность ослабление гибели кроликов, не имевшее отношения к иммунитету. Подтвердившееся предположение, что жесткий отбор под влиянием вируса постепенно привел к развитию устойчивости кроликов к миксоматозу, объясняло снижение эффективности метода лишь частично. Не меньшее значение имело поэтому выявление-слабовирулентных вирусов миксоматоза. Очевидно, наиболее вирулентные штаммы погибли вместе с хозяином вскоре после начала эксперимента, в то время как выживаемость ослабленных штаммов возросла. Наименее вирулентные штаммы действуют подобно живым вакцинам, и огромное число животных подвергается естественной активной иммунизации на всю жизнь. Именно поэтому численность кроликов в Австралии можно в течение длительного времени удерживать на низком уровне только при условии дальнейшего искусственного их инфицирования штаммами вируса миксоматоза, отбираемыми на высокую вирулентность. [c.207]

Много внимания уделял А. Н. Бах той связи, которая существует между активностью ферментов и иммунитетом, этой еще столь загадочной реактивной способности животного организма. Обнаружив, что продукты глубокого расщепления белка способны функционировать в качестве соучастников восстановительных процессов, катализируемых пергидридазой, А. Н. Бах совместно с сотрудниками построил на этом новый метод обнаружения и количественного учета продуктов распада белка. Одной из областей приложения этого метода явилось изучение изменений физиологического состояния организма, которое происходит в теле животного в процессе иммунизации бактериальными токсинами. [c.666]

Антибактериальные сыворотки одержат антитела к целлюляр-ным антигенам бактерий. Антитоксические сыворотки содержат антитела к экзотоксинам белков. Их получают путем иммунизации лошадей анатоксинами. В организм человека эти сыворотки вводят дробно по методу Безредка во избежание анафилактического шока. [c.69]

Каляев (1936), перечисляя методы приготовления вакцины из фитопатогенных микроорганизмов, описывает применение культуральных жидкостей и препаратов из микроорганизмов, убитых наркозом или нагреванием. Кроме того, для иммунизации может быть использован приготовленный обычным способом бактериофаг, а также сыворотка от животных, иммунизированных микроорганизмом, патогенным для растения. [c.301]

Поляков И. М. Предварительная оценка химической иммунизации как метода борьбы с бурой и желтой ржавчиной пшеницы в полевых условиях. Тр. ВИЗР, вып. 2, 171—181, 1949. [c.346]

Химическая иммунизация как метод защиты растений от вредных организмов была разработана во Всесоюзном институте защиты растений и получила очень лестные отзывы ученых и практиков многих стран. Еще бы Химическая иммунизация, например, риса роданом снижает заболеваемость этой культуры нприкуляриозом в 10 раз и повреждаемость растений вредителем минером в 3 раза, за счет чего с каждого гектара посевов дополнительно получают но 3 центнера зерна в течение уже нескольких лет. Еще эффективнее химическая иммунизация картофеля, которая снижает заболеваемость фитофторозом в 30 раз и в 2 раза повышает урожай. Примерно такие же результаты получены в борьбе с пыльной головней на пшенице, с корончатой ржавчиной на овсе и с фузариозом на хлопке. Более того, во многих случаях повышается биологическая ценность растений, сохраняющаяся в по-колениях. И самое главное — химическая иммунизация па 2—3 года исключает контакт людей с пестицидами. [c.38]

Этот метод можно модифицировать следующим образом. В полужидкую среду помещают открытую с обоих концов и предварительно простерилизоваиную стеклянную трубочку (рис. 9.3), в которую вносят инокулят. Подвижные микроорганизмы мигрируют вниз, выходят из нижнего конца трубочки и затем начинают двигаться вверх к поверхности среды, где усиленно растут. Этот метод пригоден также для селекции высокоподвижных организмов, используемых для приготовления Н-антиге-нов при иммунизации. [c.370]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология