Гемоглобин триптические пептиды

Пример использования хроматографии на бумаге в сочетании с электрофорезом пептидов взят из работы Ингрэма [18], посвященной изучению строения гемоглобинов. Триптические гидролизаты гемоглобина А и гемоглобина 5 сравнивали путем электрофореза на бумаге ватман № 3 ММ в системе пиридин — уксусная кислота — вода, pH 6,5, 19 в/см, в течение 150 мин, с последующей хроматографией в системе н-бутанол — уксусная кислота — вода (3 1 1) в течение 24 час. Полученные картины (фиг. 25) почти идентичны, [c.54]

Определение полной аминокислотной последовательности в.сех триптических пептидов привело к установлению структурных формул а- и р-цепей гемоглобина человека (см. стр. 130). [c.129]

Смену буфера производят на 330-й минуте, когда практически закончится постепенное изменение концентрации и pH буфера и в колонку будет подаваться только конечный буфер для элюирования более прочно адсорбированных на смоле пептидов. Анализ выполняется за 430 мин. На рис. 10 представлена хроматограмма деления пептидов, получаемых при триптическом гидролизе гемоглобина. [c.80]

Фиг. 168. Распределение 1Р-лейцина между пептидами, полученными при триптическом гидролизе растворимого гемоглобина кролика, после того как гемоглобин инкубировался с моткой (при 15°) в течение разных промежутков времени.

При сопоставлении пептидных карт триптического гидролизата видно у гемоглобина 5 обособление пептида 4 от пептидов 1, 2, [c.82]

Рис. 10. Карты распределения пептидов триптического гидролизата гемоглобинов А и 8 (из Бэйли, 1965).

Поскольку в аР-половине гемоглобина содержится в общей сложности 27 остатков лизина и аргина, при триптическом гидролизе образовалось 28 разных пептидов. Следующий этап состоял в разделении полученных пептидов. Для этого был применен метод двумерного разделения (рис. 5.6). Смесь пептидов наносили в виде небольшого пятна в угол большого листа фильтровальной бумаги. Далее проводили электрофорез в одном направлении, разделяя таким образом пептиды в соответствии с их общим зарядом. Однако полного разделения [c.92]

Триптические пептиды а-и р-цепей гемоглобина хроматографировали в градиенте пиридин-ацетатных буферов [39]. При этом хроматографическое поведение пептидов в целом напоминало их поведение при разделении на смоле дауэкс-50, хотя в профилях элюирования наблюдались несомненные различия. Поэтому те пептиды, которые элюируются на смоле дауэкс-50 в одной зоне, можно разделить на фосфоцеллюлозе, и наоборот. На основании этой работы можно сделать определенные выводы относительно связи между хроматографическим поведением и структурой пептидов. За редким исключением, более длинные, отрицательно заряженные пептиды элюируются в меньшем объеме по сравнению с короткими, положительно заряженными пептидами. Пептиды, содержащие более шести аминокислотных остатков и несущие слабый отрицательный заряд (—2), элюируются при рН<4,7 короткие пептиды, включающие менее семи остатков и в целом заряженные положительно, элюируются при рн > 4,7. В работах [38, 39] отмечено также удерживание фосфоцеллюлозой гистидинсодержащих пептидов. [c.412]

Приготовление пробы. Пептиды триптического гидролиза гемоглобина могут быть получены по методу Джонса [100]. Лио-филизованную смесь пептидов растворяют в 0,3 М пиридине и доводят pH раствора до 2,2 с помощью концентрированной соляной кислоты. Другие методы ферментативного гидролиза описаны Смитом [36] и Блакбурном [34]. [c.78]

Нин е мы остановимся на одной из последних работ Шредера [42] по ионообменной хроматографии пептидов, представляющей большой интерес как с хроматографической точки зрения, так и по методике детектирования элюатов. В указанной работе производилось разделение триптических гидролизатов а, р и у цепей человеческого гемоглобина путем последовательной хроматографии па катионите Дауэкс 50X2 и анионите Дауэкс 1X2. [c.170]

Результаты разделения на катионите Дауэкс 50X2 пептидов, полученных при триптическом гидролизе утробного человеческого гемоглобина состоящего из цепей а и "с, приведены на рис. 16 и в табл. 6. Там же указаны идентификация пептидов и их заряд при нейтральном pH, который определялся по Ин- [c.172]

Таблица 6 Идентификация пептидов триптического гидролизата человеческого гемоглобина Гл, разделенных на колонке со смолой Дауэкс 50X2

Если один из сравниваемых белков обладает какими-то отличиями в аминокислотной последовательности определенного участка первичной цепи, то пептидные фрагменты этого участка будут передвигаться по электрохроматографическому полю с иными скоростями (а часто и в ином направлении) по сравнению с фрагментами такого же участка другого белка. В результате первые пептиды займут особое положение на пептидных картах, тогда как фрагменты цз идентичных участков полипептидных цепей займут аналогичные места. Отличия в последовательности, таким образом, будут обнаружены в пятнах, имеющихся на одной электрохроматограмме и не появляющихся на другой. Элюция и количественный аминокислотный анализ лишних пептидных пятен позволяет далее установить наличие специфических для данного белка аминокислот, характеризующих эти фрагменты. В частности, методом пептидных карт для триптического гидролизата удалось выявить особенности структуры различных гемоглобинов. Гемоглобин 5 отличается от нормального гемоглобина А по электрофоретической подвижности и частично замещает последний у больных серповидно-клеточной анемией. Исследования методом пептидных карт позволили локализовать различие в первичной структуре между гемоглобинами А и 5 в одной точке полипептидной цепи [c.82]

Для уравновешивания колонки и элюции пептидов используются самые разнообразные растворы вода, растворы хлористого натрия, аммиака, уксусной кислоты и различные буферные растворы. Этим способом были фракционированы пептиды триптического гидролизата гемоглобина человека, а-казеина, тропомио-зина скелетной мышцы и автолизата трипсина. [c.83]

В качестве практически осуществленного примера применения ОФ-ВЭЖХ для картирования пептидов можно привести сравнительный анализ молекул нормального и мутантных гемоглобинов [1, 62]. При исследовании р-цепей нескольких гемо-глобинов человека их триптические гидролизаты были разделены на колонке С18, уравновешенной аммонийацетатным буфе- [c.238]

До настоящего времени предложено несколько методов пептидного картирования. С-концевой пептид у-цепи фетального гемоглобина идентифицировали, сравнивая электрофореграммы триптических гидролизатов после повторного разделения (pH 6,5) в направлении, перпендикулярном первому, до и после удаления С-копцевых остатков Arg или Lys при помощи карбоксипептидазы В прямо на листе бумаги [63]. Теоретически после обработки карбоксипептидазой на диагонали должен быть только С-концевой пептид. Однако в случае у-цепи гемоглобина человека па диагонали оказались 3 пятна, а именно свободный Lys, дипептид Val-Lys (так как дипептиды очень медленно расщепляются карбоксипептидазой [46]) и ожидае- [c.484]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология