Двумерное разделение, метод РРР

Для улучшения разделения многокомпонентных смесей применяются двумерные комбинированные методы хроматографии двумерная хроматография и комбинация хроматографии с электрофорезом. [c.300]

ДВУМЕРНОЕ РАЗДЕЛЕНИЕ, МЕТОД РРР [c.44]

Двумерное разделение пептидов, наиример гидролизатов белков, на целлюлозных н силикагелевых пластинках, где в одном (чаш е первом) направлении используется электрофорез в тонком слое (ТСЭ) при кислом pH буфера, а во втором — распределительная ТСХ. Оно применяется как для целей идентификации и сопоставления родственных белков (например, для выявления мутационных или патологических изменений), так и в качестве препаративного метода для последуюш,его анализа аминокислотной последовательности в пептидах. [c.460]

Весьма наглядно двумерное разделение аминокислот на бумаге —метод отпечатков пальцев . В этом случае сорбентом [c.72]

По-видимому, различные токоферолы можно также выделить методом распределительной хроматографии на пропитанных слоях или провести одно- или двумерное разделение их нитрозопроизводных, как это делают в случае хроматографии на бумаге [36]. [c.231]

Рис. 161. Двумерное разделение смеси окисленных надмуравьиной кислотой 20 белковых аминокислот, р-аланина и у-амино-н-масляной кислоты [44], полученное восходящим методом.

В зависимости от обстоятельств смесь аминокислот и пептидов приходится анализировать методом ХТС, используя двумерное разделение, отдельно элюировать разделенные вещества и проверять их однородность повторным анализом методом ХТС, [c.408]

В случае разделения смесей очень сложного состава используют двумерные комбинированные методы тонкослойной хроматографии после завершения хроматографического разделения в одном направлении проводят еще одно хроматографическое разделение в перпендикулярном к первоначальному направлении с использованием элюента другого состава. При анализе органических веществ с ионогенными группами целесообразно одно из хроматографических разделений заменить тонкослойным электрофорезом. [c.87]

М. отпечатка пальцев . Аналитический метод двумерного разделения смеси веществ в двух взаимно перпендикулярных направлениях хроматографией или/и электрофорезом на плоском носителе. [c.259]

Разделение сложных смесей на бумаге методами хроматографии или электрофореза в одном направлении не всегда приводит к получению чистых веществ. Очевидно, что для увеличения рабочего поля, на котором распределяются вещества, хроматографию или электрофорез (или их комбинацию) выгоднее проводить в двух взаимно перпендикулярных направлениях. При проведении такого двумерного разделения в одинаковых условиях по обоим направлениям все компоненты распределяются по диагонали рабочего поля. Для использования всего имеющегося поля условия разделения во взаимно перпендикулярных направлениях должны отличаться. Поэтому двумерный электрофорез проводят при различных pH, а двумерную хроматографию — в различных буферных системах. Комбинированный способ разделения веществ, когда в одном направлении проводится электрофорез, а в перпендикулярном ему — хроматография, по своему значению стоит на первом месте. Менее гибок метод двумерной хроматографии, еще меньшее значение имеет двумерный электрофорез. [c.234]

Двумерное разделение чаще всего проводят методами БХ и электрофореза на бумаге, а не методом БХ с двумя различными системами растворителей (см. гл. 12). [c.124]

Количественно оценивают радиохроматограммы различными способами непосредственно на слое сорбента (в процессе развития хроматограммы или после его остановки) как в одномерном, так и в двумерном варианте, методом извлечения из слоя или путем предварительного отбора участков сорбента вместе с разделенными веществами (схема VII. 1). [c.121]

Одно из преимуществ метода пропитки адсорбента жидкостью после нанесения слоя адсорбента реализуется при двумерной хроматографии. В этом случае пропитку адсорбента проводят по окончании первого проявления хроматограммы. При этом адсорбент можно модифицировать таким образом, что он при втором элюировании приобретет новые адсорбционные характеристики и в результате улучшится разделение. Так, например, Кауфман и сотр. [451] вначале проводили обычное адсорбционное хроматографическое разделение в одном направлении, после этого пропитывали адсорбент на пластинке парафиновым маслом или ундеканом [452] и проводили в перпендикулярном направлении разделение методом распределительной хроматографии с обращенной фазой. Урбах [423] сначала проводил разделение на оксиде алюминия в одном направлении, далее пропитывал адсорбент 2-феноксиэтанолом и хроматографировал в перпендикулярном направлении. Бергельсон и сотр. [445] при разделении мононенасыщенных жирных кислот первое элюирование проводили на силикагеле, пропитанном додеканом, затем наносили на пластинку комплексообразователь (нитрат серебра) и элюировали еще раз в поперечном направлении. [c.99]

Этим методом разделяются вещества, которые не удается разделить методом электрофореза. Правда, верно и обратное методом электрофореза иногда удается разделить соединения, не разделяющиеся электрической фокусировкой. Сочетание этих двух методов позволяет добиться прекрасных результатов при двумерном разделении. [c.171]

Особенно легко и быстро удается разделить смесь аминокисаот с помощью комбинации двумерного разделения, например тонкослойного электрофореза на целлюлозе и хроматографии (метод отпечатков пальцев ). Сначала проводят электрофорез (низковольтный электрофорез без охлаждения, 20 В/см, муравьиная кислота), а затем хроматографируют во втором направлении, например с элюентом состава /Г Ре/п-бутанол метанол пиридин муравьиная кислота вода (33 43 9,6 0,4 20). В слу- [c.58]

Существует три этапа в этом классическом методе анализа последовательности. Первоначально РНК расщепляют иа фрагменты умеренной длины (примерно 50 пар оснований) частичным гидролизом РНазой. Затем анализируют общий состав оснований этих дискретных фрагментов с последующим их расщеплением до маленьких блоков, для которых можно непосредственно установить последовательность оснований. И наконец, большие по размеру фрагменты располагают в нужном порядке, используя частичное перекрывание последовательностей. Такие частичные перекрывания возникают в результате различных способов расщепления, получаемых при действии панкреатической РНазы (специфичной к пиримидинам) и такадиастазы Т] (специфичной к гуанозину). Сложное разделение большого числа фрагментов, получаемых в результате частичного расщепления нуклеазами, удается наилучшим образом осуществить при использовании двумерного разделения ( фингерпринт ), сочетая ионофорез на ацетате целлюлозы при pH 3,5 в одном направлении и ионофорез- на ДЕАЕ-целлюлозной бумаге при кислых значениях pH [30]. Во всех случаях фрагменты детектируют без деструкции с использованием Р-меченных нуклеотидов. [c.193]

Комбинированное использование тонкослойной гель-фильтрации с электрофорезом или иммунодиффузией до настоящего времени представляет собой один из наиболее тонких методов микроанализа белков. Хансон и др. [10] разработали метод двумерного разделения, используемый для анализа белков. На первом этапе белки подвергают гель-фильтрации в тонком слое сефадекса G-200 или G-100, а на втором — электрофорезу. Они предложили прибор, в котором хроматографическую пластинку можно закреплять под углом для гель-фильтрации и горизонтально для электрофореза. В описанных экспериментах использовали стеклянные пластинки размером 30 x 30 см и толщиной 1 мм, на которые наносили слой геля сефадекса толщиной 0,5 мм. Для набухания сефадекс оставляли в 0,05 М вероналовом буферном растворе pH 8,6. Сначала проводили гель-фильтрацию, а затем в направлении, перпендикулярном первому, в течение 3 ч вели электрофорез при градиенте напряжения 10 В/см. Этот метод весьма успешно был применен для анализа сывороток крови человека, спинномозговой жидкости и гормона роста. [c.240]

Метод круговой ТСХ предназначен для проведения градиентного разделения, поскольку его рабочая методика (разд, 3,3,6) проста, результаты воспроизводимы, а занимающее много врел1ени предварите.тьное приведение системы в равновесие проводить не обязательно (в противоположность ЖХ), Это в известной степени компепси-рует большой недостаток КТСХ по сравнению с линейной — невозможность проведения двумерного разделения, о котором, однако, не следует забывать, [c.87]

В большинстве случаев пробы афлатоксипов определяли на одной пластинке со стандартами, разделенными в одном направлении (рис. 8.24). Однако в этом случае разность наклонов калибровочных графиков, соответствующих двумерному и одномерному разделению, достигала 15%, что обусловлено воздействием второго элюента при двумерном разделении на квантовый выход флуоресценции определяемого вещества. Чтобы предотвратить воздействие второго элюента, Белжаарс [15 предложил так называемый антидиагональный метод, основанный на элюировании определяемых и стандартных растворов идентичными растворителями на одних и тех же пластинках. Как показано на рис. 8.24, одну пробу и два стандарта наносят в левом углу пластинки не по диагонали. Для идентификации на участки сорбента, где проводят одномерное разделение, дополнительно наносят два стандарта. С помощью подобранного элюента примеси перемещают в верхнюю часть пластинки (рис. 8.24). Для количественной оценки участки позади и впереди фронта афлатоксипов при облучении УФ-светом следует отметить точками, которые помогают определить соответствующие участки сорбента на стадии сканирования фотометром. Количественные результаты представлены па рис. 8.25. [c.208]

В гомоядерных методах двумерного разделения могут возникать артефакты, если под действием рефокусирующего импульса угол поворота отклоняется от своего номинального значения = -к [7.10]. В разд. 8.3.1 показано, что при значительных ошибках в углах поворота 2М-спектр напоминает корреляционный спектр с задержкой регистрации (так называемый спектр корреляций спинового эха). Если ошибки малы, то нежелательные пути переноса когерентности можно устранить с помощью процедуры Ехогсус1е [7.11] или с помощью более простой последовательности с трехступенчатым циклическим изменением фазы [7.12]. Осложнения, возникающие из-за сильного взаимодействия, будут рассмотрены в разд. 7.2.3. [c.438]

В методе блуждающего пятна эти две задачи рещаются одновременно. Смесь меченык фрагментов подвергается двумерному разделению. Сначала оно проводится путем электрофореза на полосках ацетата целлюлозы при pH 3,5 (разделение по составу), а затем влажная полоска прикладывается к краю пластинки с ДЭАЭ целлюлозой. которая сорбирует частично ра деленные олигонуклеотиды, и разделение ведется в направлении, перпендикулярном первому (разделение по длине). В качестве элюента используется гидролизат РНК. содержащий олигонуклеотиды всех возможных длин и составов (такая процедура называется гомохроматографией). [c.318]

Особо следует отметить описанную Хонеггером [7а] в разд. 19.VI комбинацию тонкослойного ионофореза (электрофореза) с двумерным разделением при ХТС. Рис. 176 иллюстрирует успех этого метода при разделении сложной смеси аминов и аминокислот. Там же приведены условия опыта. [c.304]

Непрерывная электрохроматография. Можно достичь двумерного разделения ионных веществ на листе фильтровальной бумаги, пропуская поток проматографического растворителя в поперечном электрическом поле. Используется мягкая фильтровальная бумага размером до 50x50 см, помещаемая на листе стекла или пластмассы с не-больш пм наклоном к вертикали. Фоновый электролит (обычно буфер) самотеком просачивается через поры фильтровальной бумаги сверху вниз и переносит с собой поток исследуемого раствора, который непрерывно подается на верхнюю сторону листа бумаги через капилляр или по бумажной нити. На рис. 18.7 представлен один из таких приборов. Нижний край листа надрезан на несколько узких заостренных полосок. Каждая полоска свисает в свою отдельную пробирку, стоящую в штативе. Критическое обсуждение конструкционных деталей, таких, как размер и форма листа бумаги, метода установления электрического контакта без опасности загрязнения образца продуктами электролиза, а также особенностей эксплуатации приводится Стрейном [44]. Он предлагает применять лист бумаги, расширяющийся книзу, с тем чтобы градиент потенциала был наибольшим в точке инжекции образца. На рис. 18.8 показан один из листов Стрейна с эффективным разделением [c.261]

Рис. 48. Хромато1 рамма разделения методом двумерной тонкослойной хроматографии с предварительным гидролизом неионогенных и анионоактивных ПАВ

Рис. 6. Двумерное разделение лиофилизованного гормона роста человека сочетанием методов гель-фильтрации и электрофореза на сефадексе 0-200. Разделение позволило обнаружить значительную гетерогенность препарата, а—лиофилизованный гормои роста б—сывороточный альбумин человека 150],

Рис. 49. Хроматограмма разделения методом двумерной тонкослойной хроматографии без предварительного гидролиза неионогенных и анионоактивних ПАВ

В зависимости от сорбционных свойств разделяемых компонентов и их соотношений в разделяемой смеси применяются разные методы тонкослойной хроматографии [5] а) хроматография с элюентом постоянного состава б) хроматография с элюентом переменного состава при фронтальном разделении многокомпонентного элюента на активном слое (полизональная хроматография) в) градиентная элюция г) хроматография в условиях поперечного размывания пятен д) двумерные комбинированные методы тонкослойной хроматографии. [c.86]

На рис. 25 сравпиваго1 ся результаты двумерного разделения аминокислот методами бумажно]" и тонкослойной [c.91]

Применяют также [185] метод тонкослойного ионофоре-за и двумерный комбинированный метод тонкослойного ионофореза и хроматографии на стеклянной пластинке на слоях силикагель — гиис, кизельгур — гинс и окись алюминия — гипс для ионофорезного 1аздолония аминов и аминокислот и силикагель — гинс — для их комбинированного ионофорезного и хроматографического разделения. [c.97]

Двумерные разделения в настоящее время выполняются почти исключительно на бумаге, хотя известны подобные разделения на геле и комбинированные — на бумаге и геле. Ниже мы кратко опишем процедуру двумерного разделения на бумаге, не касаясь принципов методов хроматографии и электрофореза (см. соответствующие статьи настоящего сборника, а также работы [1, 2]), а затем приведем примеры применения двумерных методов разделения на бумаге. При разделении пептидов обычно используется Whatman 3 ММ или хроматографическая бумага с номи- [c.234]

Наиболее подходящими методами обнаружения радиоактивных зон на тонкослойных электрофоретограммах являются авторадиография и радиосканирование. В связи с тем что обычно используют двумерное разделение или методы отпечатков пальцев [19], применение авторадиографии более удобно. Следует еще раз упомянуть о необходимости предотвращения миграции разделенных веществ во время сушки перед измерением радиоактивности. [c.137]

Применение ацетата целлюлозы для двумерного разделения меченых нуклеотидов описано в работах [И, 66]. Сэнджер с сотр. [66] разделял смеси компонентов нуклеиновых кислот из Es heri hia соИ. Сначала проводили высоковольтный электрофорез на 3-сантиметровых полосках ацетата целлюлозы, после чего разделенные компоненты промоканием переносили на ДЭАЭ-бумагу. Затем проводили электрофорез на бумаге. Полученную электрофоретограмму высушивали и авторадиографиро-вали. Таким образом достигалось разделение сложной смеси нуклеотидов. С некоторыми видоизменениями метод использовали и другие исследователи [12, 67]. [c.155]

Для улучшения эффективности разделения некоторые авторы используют специальные приемы работы круговую ТСХ, многократное (повторное) элюирование, двумерное разделение, градиентные методы (с изменением разделительной способности слоя, элюирующего растворителя, температуры и т. д.). О них подробно говорится в упоминавшихся выше монографиях и руководствах по ТСХ. Здесь остановимся лишь на некоторых приемах, используемых в неорганической ТСХ. [c.19]

Те же авторы [359] проводили на сефадексах 0-100 и 0-200 двумерное разделение соединений, входящих в состав сыворотки крови человека. При этом в одном направлении проводили разделение методом гель-фильтрации, а в перпендикулярном направлении — разделение методом электрофореза. Моррис [360, 361] разделял на сефадексах 0-100 и 0-200 белки с молекулярной массой до 180 000. Он кондиционировал сефадекс в течение 48 ч, а затем выдерживал пластинки в про-явительной камере 18 ч для достижения равновесия. В 1962 г. Доун и Краузе [357] применили сефадекс для тонкослойного электрофореза белков. Сефадекс 0-50 ( тонкий ) смешивали с избытком буферного раствора (1 7,5) и выдерживали в нем 24 ч, после чего буферный раствор отфильтровывали и полученный гель, который был пластичным, но не жидким, переносили на стеклянные пластинки, снабженные бортиками. Фей-зелла и сотр. [362] описали разделение белков на сефадексах 0-25, 0-100 и 0-200. Сефадекс выдерживали при перемешивании 30 мин в подходящем буферном растворе, затем давали смеси отстояться и сливали жидкость. Эту операцию повторяли пять-шесть раз, с тем чтобы общее время контакта с буферным раствором было не менее 48 ч для сефадекса 0-25 и не менее 72 ч для сефадексов 0-100 и 0-200. Вендрили и сотр. [363] увеличивали твердость слоев сефадекса для электрофореза, добавляя к ним агарозу. Для этого 1,25 г агарозы растворяли в 65 мл буферного раствора и осторожно добавляли 4 г сефадекса 0-200, 5 г сефадекса 0-100 или 6,5 г сефадекса 0-75, предварительно приведенных в равновесие с буферным раствором. [c.80]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология