Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Триптофан идентификация

    При анализе последовательности особенно удачна комбинация методов масс-спектрометрии и газовой хроматографии [137 — 140]. Сложные олигопептидные смеси, образующиеся при частичном гидролизе, после превращения в летучие производные разделяют на газовом хроматографе и идентифицируют с помощью Ma q- neKTpoM Tpa. Установление последовательности осуществляют с помощью ЭВМ, основываясь на данных идентификации всех олигопептидов. Серин, тирозин и триптофан не вносят каких-либо трудностей.  [c.374]


    Анализ. Методы анализа белковых макромолекул селективны и осуществляются в зависимости от того, какая структура является объектом исследования, и начинаются с определения аминокислотного состава. Для этого необходимо провести полный гидролиз пептидных связей и получить смесь, состоящую из отдельных аминокислот. Гидролиз проводят при помощи 6 М соляной кислоты при кипячении в течение 24 ч. Так как для гидролиза пептидных связей изолейцина и валина этого может быть недостаточно, проводят контрольный 48- и 72-часовой гидролиз. Некоторые аминокислоты, например триптофан, при кислотном гидролизе разрушаются, поэтому для их идентификации используют гидролиз при помощи метансульфоновой кислоты в присутствии триптамина. Для определения цистеина белок окисляют надмуравьиной кислотой, при этом цистеин превращается в цистеиновую кислоту, которую затем анализируют. Вьщеление и идентификацию аминокислот проводят при помощи аминокислотных анализаторов, принцип действия которых основан на хроматографическом разделении белкового гидролизата на сульфополистирольных катионитах, В основе количественного определения той или иной аминокислоты лежит цветная реакция с нингидрином, однако более перспективным следует считать метод, при котором аминокислоты модифицируют в производные, поглощающие свет в видимом диапазоне. Разделение смеси аминокислот проводят при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии, а само определение — спектрофотометрически. Следующим этапом является определение концевых аминных и карбоксильных [c.40]

    Расщепление полипептидной цепи на фрагменты проводят обычно при помощи протеолитических ферментов, таких, как трипсин, химотрипсин или пепсин. Эти ферменты действуют на различные участки полипептидной цепи, так как имеют повышенное сродство к различным аминокислотным остаткам. Необходимо учитывать также соседние аминокислотные остатки, т. е. пространственное окружение атакуемой пептидной связи. Оказалось, что трипсин гидролизует только те пептидные связи, в образовании которых участвует карбоксильная группа лизина или аргинина, а химотрипсин гидролизует связи по фенилаланину, триптофану и тирозину Обычно протеолитические ферменты, гидролизующие полипептидные цепи, предварительно иммобилизуют на нерастворимых матрицах для более легкого отделения их от продуктов гидролиза. Далее определяют аминокислотные последовательности каждого полипептидного фрагмента. Для этого чаще всего используют метод Эдмана, заключающийся в анализе полипептида только с Ж-конца. Концевая аминокислота при взаимодействии с фенилизотиоцианатом в щелочной среде образует стойкое соединение, которое можно отщепить от полипептида без его деградации. Фенилтиогидантоиновое (ФТГ) производное аминокислоты идентифицируется хроматографическим методом. После идентификации концевого Ж-амино-кислотного остатка метка вводится в следующий аминокислотный остаток, [c.41]


    Из обычных аминокислот флуоресцируют только те, которые содержат ароматические системы, например триптофан, тирозин и фенилаланин [343]. Они поглощают только ниже 300 нм, и в этой области возбуждаются также многие другие распространенные соединения, например продукты гидролиза белков. Поэтому Ваалкс и Юденфренд [344] разработали для тирозина химический метод (реакция с а-нитрозо-р-нафтолом в присутствии азотной и азотистой кислот) получения флуоресцирующего продукта, который можно возбудить в видимой области при 460 нм. Такой способ применяется, например, для определения тирозина в плазме или ткани с использованием сравнительно простой методики, не требующей полного выделения тирозина. В биохимических исследованиях такой принцип — сдвиг параметров флуоресценции в более длинноволновую область — очень часто используется с целью избежать помех, обусловленных многими сопутствующими веществами, и обеспечить более надежную идентификацию. [c.435]

    Новая аминокислота тирозин триптофан I фенилаланин [ метионин лейцин I изолейцин валин 1 новая аминокислота пролин треонин гистидин I аланин новая аминокислота I серинI глицин аргинин лизин I глутаминовая кислота ] аспарагиновая кислота. Идентификация и определение (порядок — в первой, коллидиновой, хроматограмме) [c.271]

    Затруднения при идентификации С-концевых аминокислот с помощью гидразинолиза имеют место в том случае, когда такими кислотами являются тирозин, цистин, гистидин и триптофан, поскольку при этом обнаруживается большое сходство межд дин1ггрофенилнроизводными (Акабори и сотрудники [1]). Если сократить время гидразинолиза, то можно отщепить концевые ди- и трипентиды (Браупитцер). [c.488]

    Положительную пробу дают а) простые спирты вплоть до гептанола (исключение метанол) б) альдегиды и метилкетоны в) фенолы г) производные анилина д) некоторые полиоксисоединения—проппленгликоль, триметиленгликоль и пинакон е) некоторые сахара—фруктоза, сорбоза, сукроза, О-арабиноза и О-ксилоза ж) некоторые аминокислоты—цистин, тирозин и триптофан. Предел идентификации 1—5 мг. [c.394]

    Первоначально в методе Эдмана тиогидантоины подвергали щелочному гидролизу для освобождения аминокислот, которые идентифицировали хроматографией на бумаге [129]. Аргинин и триптофан давали по два пятна, что затрудняло идентификацию. Сёквист [131] преодолел эту трудность, применив непосредственную хроматографию фТГ на бумаге и обнаруживая зоны реакцией с иодом и азидом [132]. Эдман и Сёквист [133] разработали количественный метод элюирования пятен ФТГ с последующим определением их ультрафиолетового поглощения при 270 ммк. [c.154]


Смотреть страницы где упоминается термин Триптофан идентификация: [c.149]    [c.28]    [c.48]    [c.48]    [c.56]    [c.348]   
Лабораторное руководство по хроматографическим и смежным методам Часть 2 (1982) -- [ c.126 , c.132 ]




ПОИСК





Смотрите так же термины и статьи:

Триптофан



© 2025 chem21.info Реклама на сайте