Цистеин, быстрое определение

БЫСТРОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЦИСТЕИНА И ЦИСТИНА В ФОРМЕ ЦИСТЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ В ОБРАЗЦАХ РАСТИТЕЛЬНОГО [c.262]

История вопроса. Мёрнер [463], повидимому, был одним из первых исследователей, предлон<нвших пользоваться слабощелочным раствором нитропруссида натрия для количественного определения цистеина. Арнольд [35] подтвердил специфичность нитропруссидной реакции. Среди встречающихся в природе аминокислот ее дает только цистеин. Арнольд рекомендует при подщелачивании раствора заменить NaOH или КОН аммиаком. При прибавлении уксусной кислоты раствор быстро обесцвечивается. [c.208]

В то время как сг-аминогруппы аминокислот и концевые л-аминогруппы пептидов очень быстро реагируют с азотистой кислотой, Е-аминогруппы лизина реагируют очень медленно. Прн действии азотистой кислоты медленно разлагается с образованием азота также аммиак, который при гидролизе соляной кислотой отщепляется от амидных групп аспарагина и глутамина [18]. Объем образовавшегося азота можно измерить либо при атмосферном давлении, либо манометрически — при пониженном давлении [20]. Метод Ван-Слайка дает прекрасные результаты с большинством аминокислот и пептидов. Необходимо, однако, принимать в расчет, что сама азотистая кислота под действием сильно восстанавливающих веществ (например, цистеина) разлагается с образованием азота [21]. При определении азота глицина и его пептидов также получаются данные, превышающие теоретически вычисленные величины [22, 23]. [c.26]

Наряду с тем, что метод с применением меченого ЫЭМ дает хорошие результаты в анализе белков, он представляется многообещающим и в определении очень малых количеств несвязанных низкомолекулярных меркаптанов. В нейтральном или слегка кислом растворе с избытком МЭМ соответствующая реакция идет быстро. Так, например, в случае г-цистеина эта реакция является количественной и завершается в пределах 2 мин при pH раствора от 5,4 до 6,6 [25, 36]. Быстро образуются и аддукты тиогликолевой кислоты, меркаптоэтанола, а также 2-амино-4-меркаптомасляной кислоты [26]. В принципе, при анализе низкомолекулярных соединений не требуется количественного гидролиза аддуктов до 5-сук-цинильных производных, однако он может способствовать отделению аддуктов от избытка реагента хроматографическим методом. В результате реакции меркаптана с МЭМ образуется производное, характеризующееся центром (новым) асимметрии, и этот фактор следует принимать во внимание при выборе метода разделения. Скорости реакций зависят от pH раствора, и кроме того, в воде эти реакции идут быстрее, чем в этаноле [36]. Это позволяет предположить, что реакция образования аддукта является скорее ионной, а не свободнорадикальной. С ЫЭМ реагируют также сульфидные, сульфитные и тиосульфатные анионы [37]. [c.355]

Вслед за первым сообщением [24] о быстром и количественном образовании продукта присоединения Ы-этилмаленимида (МЭМ) и алифатических меркаптанов в нейтральном или слабокислом растворе при комнатной температуре были проведены подробные исследования, которые показали применимость этой реакции для определений [25, 26]. При введении изотопа в остаток малеиновой кислоты молекулы ЫЭМ (как правило, в положения 2 и 3) получается реагент, широко применимый для определения микро- и полумикроколичеств меркаптанов. Так, ь-цистеин превращают в 5- (Ы-этилсукцинимидо) -ь-цистеин (I) [27] [c.354]

В. Л. Кретович и А. А. Бундель разработали быстрый метод определения аспарагиновой и глютаминовой кислот, который основан на том, что активированный, подкисленный оксид алюминия адсорбирует аспарагиновую, глютаминовую кислоты и цистин. Другие аминокислоты, которые проходят через хроматографическую колонку, этим адсорбентом не задерживаются. Цистин вымывают из колонки дистиллированной водой, насыщенной H2S (цистин при этом восстанавливается в цистеин, а оставшиеся дикарбоновые кислоты последовательно элюируют). Установлено, что глютаминовая кислота, адсорбированная на AI2O3, при элюировании слабым раствором кислоты быстрее передвигается по колонке, чем аспарагиновая. В полученных элюатах определяют азот методом Кьельдаля. [c.23]

Найдено, что в уксуснокислых растворах дегидрирование сульфгидриль-пых соединений при действии иода протекает быстро и в точных стехиометрических соотношениях [218]. В этих условиях становится излишним удаление кислорода воздуха. Теоретические величины для г. утатиона, тиомолочной кислоты и цистеина были получены практически только в растворе 70-процентной уксусной кислоты. При микроопределении применяют навески сульфгидриль-ного соединения от 0,2 до 0,5 лгг и двойное по сравнению с вычисленным количество 0,004 н. раствора иода в уксусной кислоте реакционную смесь оставляют па 1 мин. при 20°, разбавляют равным объемом воды и титруют остаток иода 0,004 п. раствором тиосульфата. Для количественного определения глутатиона, кроме того, рекомендуется метод, основатный на осаждении его в виде нерастворимого кадмиевого соединения, образующегося при действии лактата кадмия [219]. Синяя окраска, которую дает глутатион с фосфориовольфрамовой кислотой, использована в колориметрическом методе определения глутатиона. [c.277]

Восстановление фосфорновольфрамовой кислоты. Голубая окраска, получаемая при восстановлении фосфорновольфрамовой кислоты (реактив Фолина на мочевую кислоту) цистеином или цистином в присутствии сульфита, применялась в качестве метода определения многими авторами. Лагг [715—721] много работал по этому методу. Шинохара [722—725] и другие [726—727] провели его дальнейшее изучение. Скорость поя1вления окраски различна для различ ных пептидов цистина, а максимальная окраска найдена при гидролизе [728]. Кассель и Бранд [729] утверждают, что это происходит вследствие более быстрой реакции пептидов, и показали, что в конце проявляется та же самая окраска. Метод в его последней форме [729] дает хорошо воспроизводимые результаты и удобен для определения цистина и цистеина присутствии друг друга. [c.115]

Первый этап полного или даже частичного установления последовательности остатков обычно состоит в определении наличия каких-либо связей между различными частями цепи. Наиболее распространены дисульфидные связи, формирующиеся при окислении пар цистеинов. Образовавшийся дисульфид часто рассматривается как отдельный элемент и называется цистином. Как показано на рис. 2.9, система связей С—5—5—С в цистине нелинейна и обычно имеет неплоскую конформацию. Поэтому наличие цистина налагает сильные ограничения на белковую структуру. Два участка пептидной цепи должны быть сближены в пространстве и к тому же должны располагаться под определенными углами. Это означает, что при прочих равных условиях труднее разрушить структуру белков, содержащих дисульфидные связи. В самом деле, некоторые небольшие белки, в которых от 5 до 7 дисульфидов приходятся менее чем на 100 аминокислотных остатков, известны как наиболее стабильные. Они могут выдерживать экстремальные условия, возникающие при кипячении или воздействии сильных кислот, в которых очень многие белки довольно быстро и необратимо денатурируют. [c.66]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология