Избирательная денатурация

Цель избирательной денатурации состоит в создании таких условий, при которых нужный фермент или совсем не денатурирует, или же потери его составляют не более 10—20%, тогда как множество других компонентов смеси денатурирует и в основном осаждается в результате проведенной обработки. Для избирательной денатурации используют преимущественно 1) температуру, 2) pH и 3) органические растворители. Эти три способа воздействия обычно взаимосвязаны, поскольку денатурация под действием температуры в большой степени зависит от значений pH, и наоборот. При денатурации органическими растворителями необходимо тщательно подбирать температуру, pH и величину ионной силы. Ионная сила может несколько изменять влияние температуры и pH, особенно если сравнивать поведение белков при низкой ионной силе (от 0,01 до 0,1) с их поведением при высокой концентрации соли, например в 1 М растворе сульфата аммония. Эти три типа денатурации рассматриваются ниже. [c.83]

В некоторых случаях получение чистого белка из белковых смесей облегчается путем избирательной денатурации сопутствующих белков. Например, неочищенный препарат трипсина можно очистить, нагревая раствор в 0,5 н. НС1 до 90° [18], так как в этих условиях все инертные белки денатурируются. [c.14]

ОСАЖДЕНИЕ ВСЛЕДСТВИЕ ИЗБИРАТЕЛЬНОЙ ДЕНАТУРАЦИИ [c.83]

Балластные белки обычно осаждают одним из известных методов фракционирования — избирательной денатурацией. Если фермент устойчив к нагреванию (например, рибонуклеаза выдерживает нагревание до 90° С без инактивации), проводят термическую денатурацию инертных белков, нагревая экстракт определенное время при 50—70° С. Применяют также кислотную денатурацию (подкисляют экстракт до pH 5 или ниже), если выделяемый фермент не инактивируется при данном pH используют и обработку экстракта хлороформом или смесью хлороформа и спирта. Денатурированные балластные белки отделяют от фермента центрифугированием или фильтрацией, а затем из водного раствора путем дробного осаждения (в основе которого лежит различная растворимость белков-ферментов) выделяют фракцию, обладающую наибольшей ферментативной активностью. [c.200]

Неоднократно подчеркивалось, что если при фракционировании органическими растворителями температура слишком высока, то может произойти денатурация белка. Однако эта дена турация носит избирательный характер. Некоторые ферменты отличаются удивительной стабильностью. В частности, внекле-точные белки, а также ферменты термофильных организмов должны быть более устойчивыми, что объясняется условиями их природного окружения. Такие белки выдерживают воздействие органических растворителей при повышенной температуре. Использование органических растворителей для избирательной денатурации обсуждается далее в разд. 3.6. [c.81]

М. Ц. диссоциирует на субъединицы прп обработке его восьмпмолярным р-ром мочевпны лпбо при диализе против ацетатного буфера pH 4,0, содержащего аскорбиновую или этилепдпаминтетрауксус-ную к-ту. Выделение Ц. производят фракционированием белков сывороткп крови сульфатом аммония, осаждением спиртом в изоэлектрич. состоянии балластных белков, избирательной денатурацией белков хлороформом II спиртом и последующей экстракцией Ц. пз конечного осадка солевым р-ром (см. также Металлопротеиды). [c.411]

Групповое разделение белков. Высаливание — разделение белков на фракции по их растворимости. Принцип метода заключается в дегидратации белков (обычно с помощью сернокислого аммония) при pH, близком к Р1. Различные белки выпадают в осадок при разных концентрациях соли. Это грубый метод разделения на группы. Например, глобулины выпадают в осадок при полунасыщении, а альбумины — при полном насыщении (НН4)2804. Избирательная денатурация — это выпадение в осадок при нагревании раствора до 50 °С или при подкислении среды до pH 5,0. Если выделяемый белок устойчив к нагреванию и изменению pH, то часть ненужных белков можно удалить таким простым способом. Органические растворители при низких температурах используются для щадящего группового разделения белков. По методу Кона белки плазмы крови фракционируют спиртом при температуре 3—5 °С альбумины — спирт 40%, pH 4,8, при 1-5 °С р, у-глобулины — спирт 25%, pH 6,9, при 1-5 °С а-глобулины — спирт 18%, pH 5,2, при 1-5 °С фибриноген — спирт 8%, pH 7,2, при 1-3 °С а2-глобулин — спирт 40 , pH 5,8, при 1—3 °С. Диализ — освобождение белковых растворов от низкомолекулярных соединений (например, от сернокислого аммония (NH4)2S04). Белки не проходят через полупроницаемую мембрану, а низкомолекулярные вещества проходят, что и позволяет очистить раствор белков от низкомолекулярных примесей. Получаем группу (смесь) белков, обладающих близкими физико-химически-ми свойствами. [c.50]

Для удаления большой массы неактивных белков, находящихся в растворе, используют методы избирательной денатурации посредством прогревания экстрактов при 50—70° С в течение определенного времени. Проводят также денатурацию белков путем подкисления раствора фермента до pH 5,0 или ниже и выдерживания его при охлаждении в течение 10—15 мин. Иногда . рименяют осаждение балластных белков тем или иным реактивом. Выпавший осадок отделяют фильтрованием или центрифугированием. [c.127]

Регуляторные ферменты после модификации химическими или физическими методами часто становятся нечувствительны к аллостерическим эффекторам, сохраняя каталитическую активность. Показана избирательная денатурация аллостерических центров при действии на ферменты ртутьсодержащих реагентов, мочевины, рентгеновских лучей, протеолитических ферментов, растворов с экстремальными значениями ионной силы или pH, при длительном хранении при О— 5 С, замораживании или нагревании. [c.107]

Избирательная денатурация. Многие белки денатурируются и выпадают в осадок при нагревании раствора до 50-70 °С или при подкислении примерно до pH 5. Если выделяемый белок выносит эти условия, то часть посторонних белков можно удалить из раствора таким способом. [c.54]

Какова структура области перекрестка двух геномов в восьмерках Точка контакта (пересечения Х-форм всегда делит всю структуру на две пары плеч равной длины. Это означает, что геномы соединяются в области гомологии (рис. 31.5). Если бы плазмиды соединялись в области негомологичных последовательностей, то длины всех четырех плеч распределялись бы случайным образом. Кроме того, точка контакта располагается примерно с равной вероятностью вдоль всей плазмиды отсюда следует, что спаривание может происходить во многих положениях. Способ соединения нитей в области перекреста был исследован с помощью его избирательной денатурации. На электронных микрофотографиях видно, что четыре двухцепочечные молекулы в местах соединения двух геномов отходят от кольца, [c.199]

При обработке иммобилизованных тетрамеров дегидрогеназ 8 М раствором мочевины могут быть получены ковалентно связанные с сефарозой мономеры. Однако в процессе длительной инкубации в мо= чевине они теряют активность из-за денатурации. Подбирая концентрацию мочевины и время инкубации, можно провести избирательную денатурацию всех субъединиц тетрамера дегидрогеназы, за исключением той, которая связана с матрицей ковалентно, так как за счет стабилизирующего действия матрицы именно эта субъединица является наиболее устойчивой к действию мочевины. [c.302]

Избирательная денатурация, а также использование органических растворителей в процессе фракциони рования обсуждались ранее (см. разд. 3.4 и 3.5). Применение последнего метода обычно требует низких температур для предотвращения денатурации. В противном случае белковые растворы нельзя подвергать действию органических растворителей или других денату-рантов, таких, как мочевина или додецилсульфат. [c.252]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология