Щелочная фосфатаза специфичность

Клетки подвергают лизису, белки фиксируют на фильтре. 3. Наносят на фильтр первые антитела, которые связываются только с искомым белком, 4. Несвязавшиеся первые антитела удаляют, наносят на фильтр вторые антитела, специфичные в отношении первых антител, связанные с ферментом (например, щелочной фосфатазой), [c.69]

Фосфатазы — ферменты, ускоряющие гидролиз эфиров фосфорной кислоты. Щелочной фосфатазой называют фосфа-тазу, оптимум pH которой находится в щелочной среде. В организме субстратом действия этого фермента является фосфоглицериновая кислота, однако специфичность фос-фатаз не велика и они гидролизуют многие другие эфиры фосфорной кислоты. Для обнаружения фосфатаз и их количественного определения используют в качестве субстратов такие бесцветные эфиры фосфорной кислоты, которые под действием фосфатаз распадаются на фосфат и окрашенное соединение. Активность фосфатазы оценивают по интенсивности окраски. Примером такого субстрата является нитрофенилфосфат, распадающийся при участии фосфатазы на фосфат и нитрофенол, имеющий желтый цвет [c.234]

Изложенные выше предположения были полностью подтверждены экспериментальными исследованиями субстратной специфичности многих ферментов. Целый ряд ферментов, как оказалось, проявляет лишь очень широкую групповую специфичность. Например, щелочная фосфатаза Е. соИ катализирует гидролиз разнообразных эфиров фосфорной кислоты, не проявляя видимой селективности в отношении этих субстратов [4]. Возможно, что в этом случае образование комплекса фермента с эфиром фосфорной кислоты происходит в основном за счет ионного взаимодействия, поскольку все эти эфиры яляются анионами и в активном центре фермента существенную роль играет катион Zn -. [c.96]

Щелочная фосфатаза характеризуется относительно невысокой субстратной специфичностью. Типичными субстратами являются первичные или вторичные фосфорные эфиры алифатических спиртов, фенолов, циклических спиртов, углеводов, аминов. [c.299]

Рекомбинантные ферменты, обладающие аллостерическими свойствами, могут быть использованы для создания новых био-Сенсоров. В частности, попытки проведения модификаций такого рода были предприняты в отношении щелочной фосфатазы [184]. Пептидные эпитопы, специфичные для ВИЧ типа I и вируса гепатита С, были встроены в полипептидную цепь щелочной фосфатазы, после чего исследовали влияние антител к этим эпи-Тонам на активность рекомбинантных ферментов. Установлено, что антитела снижали на 20% активность гибридных ферментов. Полученных на основе щелочной фосфатазы дикого типа, однако [c.381]

Фосфатазы обладают групповой специфичностью они действуют на эфиры фосфорной кислоты только с органическими соединениями. В зависимости от оптимума pH, делятся на щелочные и кислые. Щелочные имеют оптимум действия при рН=9,0—10,0 они найдены в почках, печени, слизистой оболочке кишечника и др. Кислые фосфатазы с оптимальным рН=3,0—5,0 находятся в кровяной сыворотке, а также в плесневых грибках и др. [c.341]

В то же время цикламы очень слабо захватывают щелочные и щелочноземельные металлы, а из переходных металлов заметно взаимодействуют лишь с Со и Ациклические полиамиды вообще не проявляют никакой избирательности. Таким образом, специфичность к Си достигается на низкомолекулярном уровне. Следует отметить, что в большинстве металлсодержащих ферментов (таких, как карбо-ангидраза, щелочная фосфатаза, карбоксипептидаза и т. д.) имеются соединения (типа имидазола, цистеина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты и т. д.), создающие в целом активные центры для удерживания ионов металлов. Для придания полимерам избирательной способности к захвату ионов Си " могут использоваться два следующих метода [c.97]

Опыт работы с С-специфичной нукле ой из сырых препаратов щелочной фосфатазы показывает, что она пригодна для расщепления олигонуклеотидов и небольших нуклеиновых кислот. При фракционировании по длине цепи продуктов действия С-нуклеазы на такие большие нуклеиновые кислоты, как РНК TMV, не удается достигнуть такого разрешения, как в случае панкреаттеского или Т. -РНК-азного гидролизатов. Причина этого не ясна. Возможно, не все связи, теоретически чувствительные к этому ферменту, гидролизуются, или же часть олигонуклеотидов, оканчивающихся цитидиловой кислотой, остается в виде промежуточных 2 ,3 -циклофосфатов, а не З -фосфомоноэфиров, Любая из этих возможностей должна привести к усложнению смеси [c.293]

Введение всего 40 мкг (0,104 микромоля) афолата листоеду Diabroti a ип-de impun tata вызывает снижение активности щелочной фосфатазы в половых железах самцов и самок [167]. Фосфатазы обычно находят в цитоплазме растущих клеток, где происходит синтез белка, хотя они также участвуют в метаболизме липидов, углеводов, нуклеиновых кислот и нуклеотидов. Термин щелочная фос-фатаза включает несколько ферментов, имеющих сходные, но неидентичные свойства. Фосфатазы, рассматриваемые нами, обладают замечательной специфичностью по отнощению к ДНК. Было отмечено также, что такая же доза афолата заметно ослабляет и инактивирует сперму. [c.162]

У больных апластической и гипопластической анемией выявляются изменения в содержании таких важных клеточных компонентов, как нуклеиновые кислоты, жир и гликоген (А. И. Зосимовская, Л. И. Казанова, Э. И. Терентьева, Ф. Э, Файнштейн, 1958). Обнаружено снижение количества рибонуклеиновой и дезоксирибонуклеиновой кислот во всех клетках, участвующих в гемопоэзе. Содержание жира и щелочной фосфатазы в зрелых гра-нулоцитах оказалось увеличенным, количество гликогена — уменьшенным. Жир и гликоген полностью отсутствовали в клетках эритропоэтического ряда, в которых определялось уменьшение цитохромоксидазы и увеличение глютатиона. Обнаружены изменения в процессе образования триптофана. Указанные сдвиги не являются специфичными, поскольку они обнаруживаются также в клетках крови и костного мозга и при лейкозах. [c.69]

А. Предосторожности. Следует избегать гемолиза. Б. Физиологическая основа. у-Глутамилтрансфераза (ГГТ) — высокочувствительный индикатор при заболеваниях печени. Уровень ее часто повышен, когда трансаминазы и щелочная фосфатаза в норме. Для диагностики алкогольного нарушения функции печени уровень ГГТ — показатель более специфичный, чем уровень двух указанных ферментов. ГГТ находится в печени, почках, поджелудочной железе, она переносит глутаминовую кислоту от глутатиона или другого у-глутамилпептида на акцепторный пептид или на Ь-аминокислоты фермент индуцируется алкоголем. [c.374]

При разработке конкретного варианта ИФА перед исследователем встает проблема выбора фермента в качестве метки. Для правильного выбора следует учитывать многие факторы например, в гомогенном ИФА в исследуемом образце должны отсутствовать свободный фермент-метка, или фермент, имеющий сходную с ним специфичность, ингибиторы или активаторы фермента и т. д. Выбор фермента может быть обусловлен также и целями ИФА. Например, при одновременном анализе очень большого числа образцов, выполняемого в течение довольно длительного времени, необходимо для уменьшения ошибки анализа использовать более стабильные субстраты. Гидролитические ферменты, например щелочная фосфатаза и р- )-галактозидаза, имеют более стабильные субстраты, чем оксидоредуктазы, такие, как пероксидаза и глюкозооксндаза, поэтому последние менее предпочтительны в случае реакции с продолжительным периодом инкубации, но могут быть с успехом использованы в быстрых методах иммуно-анализа. [c.68]

Специфичность. Щелочная фосфатаза катализирует гидролиз различных ортофосфатных эфиров, в том числе первичных и вторичных спиртов, сахарных спиртов, циклических спиртов и фенолов [c.73]

Козьи мостиковые антиглобулины, используемые в сочетании с кроличьими антителами, специфичными к тяжелым цепям, и кроличьими антителами против щелочной фосфатазы, подвергали очистке только в случае возникновения проблемы так называемого короткого замыкания (см. разд. II.В.1). Мостиковые антитела для использования в сочетании с антиглобулинами морской свинки получали иммунизацией кроликов препаратами IgG морской свинки. [c.212]

Косвенным указанием на возможность изменения специфичности транскрипции при изменении степени сверхспирализации ДНК служит тот факт, что в присутствии ингибиторов ДНК-гира-зы (антибиотиков налидиксовой кислоты, новобиоцина, коумерми-цина) изменяется спектр синтезируемых белков, хотя сами по себе эти ингибиторы не влияют на процессы транскрипции или трансляции. Например, у Es heri hia oli снижается синтез около 20 белков (в том числе щелочной фосфатазы), но одновременно стимули- [c.82]

Щелочные фосфатазы. Фосфатазы обладают широкои специфичностью они гидролизуют самые различные эфиры фосфорной КИСЛОТЫ- В генетической инженерии используют щелочную фосфатазу из клеток Е. oli и из кишечника теленка первая термостабильна, а вторая инактивируется при 68 °С. Эти ферменты применяют для дефосфорилирования одно- и двунитевых молекул ДНК или РНК на 5 р- и З р-концах. В однонитевых разрывах ДНК или на концах фрагментов, где фосфатная группа (например, 5 р) маскируется однонитевым З ОН-концом комплементарной цепи, реакция идет с трудом. Повышение температуры реакционной среды дестабилизирует двунитевую структуру и устраняет отмеченный недостаток. [c.186]

Анализируя действие различных активаторов и ингибиторов на мешающую ферментативную реакцию, можно попытаться выяснить, описывает ли какая-либо из приведенных выше схем эту реакцию, и какая именно. Согласно литературным данным, фосфат-ионы ингибируют ферментативную активность как щелочной фосфатазы [19], так и АМР-деаминазы [40]. Известно также, что глицерофосфат ингибирует АМР-деаминазу [41], но не щелочную фосфатазу [31]. В последнем случае субстратная специфичность такова, что при высоких концентрациях глицерофосфата действие щелочной фосфатазы на АМР пренебрежимо мало. Рис, 3.6 иллюстрирует влияние фосфата и глицерофосфата на деаминирование АМР и аденозина в тканевом адено-зиновом электроде. Видно, что при высоких концентрациях оба ингибитора резко [c.41]

Побочные действия. Благодаря высокой специфичности и избирательности действия побочные эффекты ацикловира проявляются весьма редко. Так, известен случай ошибочного внутривенного введения ацикловира в дозе 80 мг/кг без развития побочного действия. Изредка (не чаш,е, чем на фоне плацебо) отмечают аллергические реакции (крапивницу), диспепси ческие расстройства (тошноту, рвоту, боли в животе, диарею). Также может возникнуть не значительное кратковременное, проходящее после завершения лечения повышение содержания в крови билирубина, щелочной фосфатазы, мочевины и креатинина (особенно у обезвоженных больных), снижение количества эритроцитов и лейкоцитов. [c.378]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология