Гидролизат лактальбумина

Данная концентрация питательных веществ может поддерживать существование только определенного количества клеток. При истощении того или иного питательного вещества клетки часто могут использовать другие вещества, но на практике такой путь используется редко, поскольку он всегда сопровождается снижением скорости роста (например, при индукции альтернативных ферментов). Если минимальные среды, такие как МЕМ или основная базальная среда Игла, используются с сывороткой в качестве единственной добавки, то проблема истощения возникает скорее, чем при использовании полных сред (например, среды 199) или сред с добавками гидролизата лактальбумина, пептона или БСА (сред, включающих многие жирные кислоты). К питательным веществам, истощающимся в первую очередь, относится глутамин, частично вследствие его спонтанной циклизации до пирролидоновой карбоновой кислоты, а также в результате ферментативного превращения (ферментами сыворотки и клетск) в глутаминовую кислоту, лейцин и изолейцин. Диплоидные клетки человека почти уникальны по интенсивной утилизации цистина. Многочисленные публикации об аргинине как лимитирующем факторе, по-видимому,, ошибочны вследствие частого загрязнения клеток микоплазмой. Напомним, что то или иное питательное вещество перед истощением начинает тормозить рост клеток. По мере снижения концентрации аминокислот клеткам становится все труднее-поддерживать достаточный внутриклеточный пул. Проблема [c.63]

Питательные среды для культур клеток. В составе этих сред имеется полный набор аминокислот, витамины, ростовые факторы. Наряду с сухими средами и отдельными компонентами выпускают готовые жидкие среды (199, Игла, гидролизат лактальбумина, сухие среды и концентраты), которые перед использованием обычно разводят в воде. [c.261]

Чтобы пометить вирус в культуре с помощью Р, необходимо истощить запас фосфата в клетках, инкубируя их в течение ночи в среде, не содержащей фосфатов и сыворотки. В состав среды должны входить гидролизат лактальбумина и глюкоза (конечная концентрация 0,05%). [c.194]

Для преодоления неидентифицированных ограничений роста клеток и промотирования роста культуры в культуральную среду часто добавляют неочищенную смесь питательных веществ В приложении 1 (табл. 9, 10 и 11) приведены методы получения гидролизата лактальбумина, экстракта куриных эмбрионов и триптозофосфатного бульона, а в соответствующих главах этого издания встречаются указания на использование этих компонентов. [c.86]

По методу, разработанному Солком, вирус полиомиелита размножают в тканевой культуре почек обезьяны. Для этого ткань коркового слоя свежих почек размельчают и суспендируют в специальной среде (№ 199). Затем размельченную ткань многократно обрабатывают по 20 мин 0,5%-ным раствором трипсина при pH среды 7,6, чтобы ферментативно гидролизовать ткани и отделись клетки одну от другой. Затем суспензию клеток центрифугируют и клетки суспендируют в той же среде с добавками плазмы телячьей крови или гидролизата лактальбумина. Суспензию клеток инкубируют 5 сут в особых сосудах, где за это время на стенках сосуда образуется однослойная пленка клеток. [c.126]

В среду без фосфатов добавляют 0,5% (объем на объем) глюкозы, 0,5% (вес на объем) гидролизата лактальбумина, 2 мМ глутамина и антибиотики, как описано выше, но не добавляют сыворотки. [c.198]

Биологическое испытание воды второй перегонки, полученной в чешских аппаратах, показало возможность лишь ограниченного ес использования. Клетки почечной ткани обезьян в растворе гидролизата лактальбумина, приготовленного на этой воде, достигли нормального развития только на 14-й день, тогда как клетки в контрольных матрасах нормально развивались уже к 7-му дню. Следовательно, использовать эту воду при изготовлении сред для культур тканей едва ли целесообразно ввиду медленного развития клеток. [c.16]

Клетки MS могут расти, если компоненты среды 199 заменит на 0,5% гидролизат лактальбумина на растворе Эрла и дополни тельно ввести в среду 0,375 г/л глутамина и 2 г/л глюкозы. [c.43]

Среда с 0,57о гидролизатом лактальбумина в растворе Хэнкса с 2% бычьей сыворотки хранится при 4—6° в течение 3 месяцев. [c.44]

Готовят отдельно 5% раствор лактальбумина, для этого 25 г гидролизата лактальбумина растворяют в 500 мл бидистиллированной воды. Раствор автоклавируют 10 минут ири давлении [c.44]

Хорошие результаты были получены при использовании среды, не содержащей сыворотки. Среда состояла из 0,5% гидролизата лактальбумина, 25 мг глутамина, 10 мг ОЬ-валина и 4 мл 30% жидкого бычьего альбумина на 1 л раствора Хэнкса. [c.66]

Вопрос о сохраняемости клеток при 4—6° был подвергнут детальному исследованию М. Н. Ермаковой (1961) на модели клеток почки обезьян. Изучалась возможность сохранения ткани в виде цельного органа, измельченной на кусочки размером 2—4 мм, и в виде взвеси трипсинизированных клеток, В качестве питательной среды применяли 0,5 7о гидролизат лактальбумина в растворе Хэнкса с 2% телячьей сыворотки (pH 7,1). Полученные результаты представлены на рис, 18. [c.97]

Была применена методика титрования клеток, основанная на изменении цвета индикатора фенолового красного в питательной среде 0,5 /о гидролизата лактальбумина в растворе Хэнкса с 2% телячьей сыворотки при исходном pH 7,5. В опыт отбирали матрасы со сплошным ростом клеток (перевиваемые штаммы клеток [c.153]

Питательная среда. Для приготовления разведений вируса и суспензий клеток употребляют обычно 0,5% раствор гидролизата лактальбумина в растворе Хэнкса с 2% телячьей сыворотки, которую предварительно проверяют на отсутствие вируснейтрализующих антител или ингибиторов вируса. К среде прибавляют пенициллин (100 ЕД/мл), стрептомицин (100 (хг/мл) и феноловый красный до 0,002%. Добавлением 7,5<>/о раствора бикарбоната натрия или 3% уксусной кислоты pH среды доводят до 7,6—7,7, [c.156]

Простую среду для постановки цветной пробы использовала Л, Г. Степанова (1959). Она показала, что четкие результаты получаются при работе с 0,5% раствором гидролизата лактальбумина, содержащим 2 /о нормальной телячьей сыворотки (pH 7,8). Ею отмечено также, что для постановки цветной реакции пригодны линии перевиваемых клеток СОЦ и Нер-2 (табл, 21). [c.160]

Гидролизах лактальбумина растворяют в слегка подогрето растворе Хэнкса, не содержащем бикарбоната натрия. Затем дс бавлением соды доводят pH до 7,4 и пропускают через фильт Зейтца. pH лошадиной сыворотки в случае необходимости такж доводят до 7,4. Кэ К раствор гидролизата лактальбумина, так лошадиную сыворотку сохраняют при температуре —20°. Отдель ные ингредиенты среды соединяют непосредственно перед употреС лением, после чего pH среды доводят до 7,4. [c.45]

Крет указывает, что сочетание гидролизата лактальбумин с лошадиной сывороткой обеспечивает все потребности клето HeLa в питательных веществах. [c.45]

Уолэс и Кокс (Walla e, Сох, 1959) изучили рост во взвешенном состоянии клеток линий M N, Нер-1 и HeLa. Эти клетки культивировали в среде, состоящей из 30% лошадиной или телячьей сыворотки и 70% 0,5% раствора гидролизата лактальбумина в растворе Эрла. [c.92]

Выращивание производили в среде, применяемой обычно дл5 культивирования однослойных культур почечной ткаии обезьян состоящей из 0,5 /о гидролизата лактальбумина в растворе Хэнкс с добавлением 2% телячьей сыворотки, фенолового красного I антибиотиков, В среде поддерживали pH 7,1—7,3 при сдвип рн в кислую сторону в среду добавляли раствор соды при за щелачивании среды, что. иногда имело место в поздние сроки куль тивирования, производили газирование СОг. В различные срою от Начала культивирования во взвесь добавляли свежую сред с целью доведения ее до нужного объема после взятия проб илт для повышения питательных свойств среды. [c.93]

Наиболее благоприятной для хранения клеток HeLa является температура 20—22°. В этом случае клетки сохраняются без большого ущерба в течение 15 суток в среде, содержащей коровью сыворотку, и до 25 суток в среде, состоящей из 0,5% гидролизата лактальбумина в солевом растворе Хэнкса и 5% сыворотки человека. [c.99]

Однослойные культуры клеток почек обезьян готовили путем обычной трипсинизации. Клетки культивировали в 0,5% растворе гидролизата лактальбумина с 5% телячьей сыворотки. Штаммы перевиваемых клеток ERK и HeLa культивировали в среде Игла с 15% телячьей сыворотки. [c.120]

Первым этапом постановки опыта по методу Купера является приготовление агарового покрытия, С этой целью смешивают равные объемы питательной среды (25% экстракта куриного эмбриона или 1% гидролизата лактальбумина, 0,1 /о кристаллического бычьего альбумина и 0,1% дрожжевого экстракта, 0,6% органического буфера оксиметиламинометан) и расплавленного, а потом охлажденного до 44 " 1,8% агара. 6 мл такой смеси вносят в чашку Петри диаметром 100 мм, 2 мл агарового покрытия добавляют в пробирку, в которую уже были внесены клетки в 0,5 мл растворе Эрла и 0,1 мл вирусного материала. Полученную суспензию сразу же выливают в чашки на основной слой агарового покрытия. После формирования второго слоя чашки переносят в термостат. [c.176]

Влияние различных факторов на образование бляшек в суспензиях клеток было изучено Уотерсоном (1958). Он находит, что количество отдельных колоний вируса чумы птиц зависит от концентрации клеток куриных фибробластов, от состава питательной среды и от свойств используемой серии нейтрального красного. Снижение концентрации клеток в агаре с 220—97,5 10 до 50—32 10 ведет к уменьшению числа бляшек и резко затрудняет их иол счет. При введении в состав агарового покрытия 0,5% гидролизата лактальбумина, 0,1% дрожжевого экстракта и [c.177]

Заслуживает внимания также работа Барона и Лоу (Baron, Lou, 1958), предложивших вместо сыворотки вводить в состав агарового покрытия двойную концентрацию разработанной ими поддерживающей среды, в состав которой входит среда 199 с 20% специально обработанного снятого молока или среда с 0,5% гидролизата лактальбумина и молока. - [c.183]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология