Поддерживающая среда

Оборудование для свободного электрофореза и ультрацентрифугирования достаточно дорого и сложно по своему устройству, что ограничивает широкое применение этих методов. Поэтому возникла идея замены свободного электрофореза (электрофоретического разделения белков в растворе) электрофорезом в специальной поддерживающей среде, который основан на том же принципе, но намного проще в осуществлении. [c.10]

Принцип метода см. электрофорез на бумаге. В качестве поддерживающей среды используется агаровый гель. [c.74]

Различают свободный электрофорез и электрофорез в поддерживающих средах. При свободном электрофорезе изучаемую смесь [c.190]

При электрофорезе в поддерживающих средах наблюдается и электроосмос, влияющий на разделение белковых фракций, особенно если электрофорез проводить не на бумаге, а в агаровом или крахмальном геле. [c.191]

Различают свободный электрофорез и электрофорез в поддерживающих средах. При свободном электрофорезе изучаемую смесь белков помещают в буферный раствор, контактирующий с электродами. Установка для свободного электрофореза сложна она имеет фотооптическую систему для регистрации результатов разделения белковой смеси. Второй тип электрофореза предусматривает использование поддерживающих сред (специальной хроматографической бумаги, ацетатной целлюлозы, агарового или крахмального геля и т. п.), которые сначала пропитывают буферными растворами, а затем помещают на них исследуемую белковую смесь. Концы бумажных полос, агаровых или крахмальных блоков и т. п. контактируют обычно с буферным раствором, в который погружены электроды, соединенные с источником постоянного электрического тока (рис. 95 [c.218]

Принцип и ограничения метода. Техника электрофореза основана на принципе дифференциальной подвижности белковых молекул в поддерживающей среде, или носителе (крахмал, полиакриламид, ацетат целлюлозы и др.), под действием электрического тока. Подвижность есть функция суммарного электрического заряда молекулы, который зависит от ионизации аминокислот белка и отсюда — от pH, а также от размеров молекулы белка. [c.39]

Метод зонального электрофореза имеет и некоторые недостатки. С его помощью нельзя произвести прямого определения скорости миграции белков. Между исследуемыми белками и поддерживающей средой возможны нежелательные взаимодействия, в результате которых часть белка адсорбируется в среде. Адсорбция происходит сильнее всего на бумаге, менее выражена на ацетат-целлю-лозной мембране и практически ничтожна в агаровом геле. [c.12]

Агаровый гель представляет собой очень удобную поддерживающую среду для зонального электрофореза, так как в 1—1,5%- ном агаровом геле белки мигрируют почти так же, как при свободном электрофорезе. По сравнению с бумажным агаровый электрофорез обеспечивает большую разрешающую способность и более быстрое фракционирование белков. Белки окрашиваются в агаре так же хорошо, как и на бумаге. Более того, прозрачность агарового слоя облегчает непосредственное фотоэлектрическое измерение белков. В агаре белковые фракции делятся весьма четко, без образования хвостов , что позволяет наносить большие количества белка, не снижая четкости разделения. [c.13]

Сравнительно новой разновидностью зонального электрофореза является электрофорез на ацетат-целлюлозной мембране [6]. Ацетат-целлюлозная мембрана, по-видимому,— очень хорошая поддерживающая среда, уже нашедшая благодаря ряду достоинств широкое применение. Выше мы отмечали, что приготовление крахмального и агарового гелей—довольно трудоемкая операция, осложняющая метод. В то же время способы предварительной обработки ацетат-целлюлозной мембраны почти так же просты, как и в случае с фильтровальной бумагой. При этом разделение белков происходит лучше и быстрее, а для анализа достаточно 5—1000 мкг белка, растворенного в объеме 0,1—10 мкл. Как белки, так и гликопротеиды очень хорошо окрашиваются на ацетат-целлюлозной мембране, поэтому она является прекрасной поддерживающей средой с точки зрения количественной оценки этих соединений. Электрофорез на ацетат-целлюлозной мембране позволяет получить больше белковых фракций сыворотки крови, чем электрофорез на бумаге, но меньше, чем электрофорез в крахмальном геле. С помощью электрофореза на ацетат-целлюлозной мембране можно определять весьма малые количества индивидуальных белков, благодаря чему он очень подходит для анализа гомогенности выделенного нативного белка. Ацетат-целлюлозные мембраны могут быть использованы также в опытах по иммунодиффузии, что является еще одним достоинством этого метода электрофореза. [c.14]

Несмотря на свою короткую историю, электрофорез в полиакриламидном геле уже очень широко используется в самых различных областях биохимии [2, 9]. Поддерживающей средой в этом методе электрофореза служит сополимер акриламидных и метиленбис- [c.14]

Следует иметь в виду, что использование любых типов футерованных аппаратов гидротермального выращивания кристаллов связано с определенными трудностями по созданию и поддержанию технологического температурного перепада между зонами растворения и кристаллизации. Особенно это обстоятельство существенно для плавающих футеровок, вокруг которых устанавливается сложный и не всегда стационарный конвективный тепломассообмен внещней поддерживающей среды. Поэтому иногда бывает необходимо устанавливать дополнительные перегородки и диафрагмы в полости между плавающей футеровкой и несущим сосудом для обеспечения требуемого термоградиента. [c.272]

Для одной пробы используют не менее двух пробирок. Спустя 30 — 60 мин после заражения в пробирки вносят по 1 мл поддерживающей среды и помещают в термостат при 37 °С. [c.263]

Чтобы исследуемый материал (фекалии и др.) не оказывал токсического действия на монослой клеток, его предварительно разводят в 1 мл питательной среды, а после контакта с культурой клеток в течение 30 — 60 мин его удаляют, заменяя поддерживающей средой. [c.263]

Чистый жидкий Не имеет упорядоченную структуру и малую энтропию, тогда как свойства раствора Не —Не иные. Особенностью жидкого Не является то, что вследствие сверхтекучести и почти нулевой энтропии при Т < 0,5" К он гидродинамически и термически почти инертен и ведет себя в растворе Не —Не лишь как поддерживающая среда для атомов Не . Слабый раствор Не в Не можно рассматривать как идеальный газ, состоящий из атомов Не , которые между собой не взаимодействуют теплоемкость идеального газа 3/27 , также велика и его энтропия. Таким образом, растворение Не в Не приводит к изменению состояния упорядоченности системы. Этот процесс аналогичен обычному испарению жидкости и сопровождается поглощением теплоты перехода из фазы почти чистого жидкого Не в фазу с его слабой концентрацией. Эта теплота перехода велика и используется. для охлаждения в области сверхнизких температур. Фаза, богатая Не , играет роль жидкости, а фаза богатая Не — роль пара осмотическое давление раствора эквивалентного давлению пара. [c.174]

По окончании электрофореза полученные белковые зоны окрашивают красителем, связывающимся с белками. Расположение окрашенных полос дает качественную характеристику компонентов смеси, а по интенсивности окрашивания судят о количественном содержании. Количественное содержание белковых фракций можно также определить, элюируя белки с поддерживающей среды. [c.122]

Особенно высокой селективностью выделения биополимеров из жидкости отличается метод электрофореза на поддерживающей среде. При этом наибольший эффект селективного выделения из жидкости биополимеров достигается при их предварительной гомогенизации. Биополимеры [c.64]

Анализ процесса электрофоретического выделения биополимеров на поддерживающей среде показывает, что этот процесс подобно и другим, используемым для разделения дисперсно неустойчивых систем, следует рассматривать как многостадийный и использовать для этого схему описания, показанную на рис. 3.4. На рис. 3.4 константы К, К2, Кз К4, Къ и Кь характеризуют соответственно скорость гомогенизации (разрушения) комплексов биополимеров К, скорость нового образования комплексов /С2, скорость электрофоретического разделения /Сз, скорость процессов, снижающих разрешающую способность электрофореза вследствие комплексо-образования Ка, скорость процессов, снижающих разрешающую способность электрофореза в результате диффузии Къ, скорость электрофоретического движения биополимеров в виде комплексов К%. При проведении электрофореза с использованием поддерживающей среды на величину /Сз может существенно влиять структура среды. [c.65]

Проведенные нами теоретические и экспериментальные исследования влияния структуры поддерживающей среды на процесс электрофоретического разделения смеси биополимеров показали, что подвижность и дис- Персия расстояний между отдельными заряженными частицами существенно зависят от структурных параметров поддерживающей среды [130] [c.65]

На электроды 8 к 9 подают разность потенциалов, необходимую для проведения электрофореза в поддерживающей среде — носителе, в качестве которого можно использовать различные гели. После электрофореза обечайку 1, выполненную из отдельных секторов, разбирают и извлекают из аппарата электрофореграммы, которые подвергают обработке. [c.67]

Когда проростки достигнут 2—4 см высоты, их берут в количестве 5—20 г и тщательно отмывают корни от поддерживающей среды. Растения переносят в небольшой кристаллизатор и заливают 5 мл дистиллированной воды, содержащей 2—5 мил- [c.110]

Зональный электрофорез в пористой поддерживающей среде. .. 80 [c.40]

Поддерживающей средой для электрофореза могут служить фильтровальная бумага, крахмальный или агаровый гели, аце-тат-целлюлозная мембрана, полиакриламидный гель и т. д. Создаваемое в смоченной буферным раствором поддерживающей среде электрическое поле заставляет различные компоненты смеси белков двигаться в определенном направлении со скоростью, соответствующей заряду молекул, что приводит к их разделению. Если электрофорез происходит в крахмальном или полиакриламидном геле, то разделение зависит не только от заряда, но и от величины и формы молекул, так как в этом случае поддерживающая среда выполняет роль молекулярного сита. При электрофорезе в щелочном буферном растворе белки сыворотки крови разделяются по меньшей мере на 5 фракций. При ионной силе 0,1 и pH 8—9 быстрее всех к аноду движется альбумин. За ним следуют в порядке уменьшения скорости миграции а-1-, а-2-, р- и 7-глобулиновые фракции. Подбирая соответствующую поддерживающую среду и буферный раствор, можно улучшить разделение. Поэтому даже в сравнительно малооснащенной больничной или клинической лаборатории зональный электрофорез позволяет проанализировать белки более детально, чем свободный. [c.10]

Главнейшие различия между фронтальным и зональным методами связаны именно с применением поддерживающей среды. Поэтому термин электрофорез в поддерживающей среде , или электрофорез на носителе , вероятно, лучше отражал бы суть дела, чем термин зональный электрофорез , введенный Тизелиусом. Все же мы будем пользоваться последним как более общепринятым. [c.42]

Язык APLI OT. Язык характеризуется гибкой схемой логического управления, реализующей как прямые цепочки, так и обратные цепочки рассуждения, обработкой коэффициентов уверенности и режимов объяснения. Поддерживающая среда состоит из пакета утилитов языка ПРОЛОГ, таких как итеративный редактор правил и предложений.vlPL/ OT реализован на языке ПРОЛОГ DE -10 и работает на компьютерной системе I OT ЕС-2060 7]. [c.230]

Разрешающая способность электрофоретических методов исследования значительно повысилась благодаря использованию в качестве поддерживающих сред таких носителей, как гель сефадекса, крахмальцый, агар агаровын или полиакриламидный гель. [c.219]

Весьма перспективными методами разделения белков (как и определения ряда физико-химических свойств) оказались разные варианты метода изоэлектрического фокусировання-изотахофореза, основанные на проведении электрофореза в поддерживающих средах (на колонке или в тонком слое) с градиентом pH. Точное местоположение на колонке каждого белка из смеси определяется значением его изоэлектрической точки, т.е. состоянием, при котором суммарный электрический заряд белковой частицы при данном значении pH равен нулю. При использовании [c.31]

После электрофоретического разделения белковые фракции можно фиксировать в поддерживающей среде и выявить с помощью специфического окрашивания. Среди многочисленных методов окрашивания особое значение в клинических исследованиях приобрели способы выявления связанных с белками липидных и углеводных компонентов. Благодаря простоте этих методов анализ липо-протеидов и гликопротеидов стал обычным в повседневной клинической практике. Он приобрел большое значение в диагностике некоторых заболеваний, а это позволило значительно продвинуться в выяснении их патогенеза. Специальные методы окрашивания помогают также обнаружить трансферрин, гаптоглобин, церуло-плазмин и другие компоненты сыворотки. [c.11]

Число фракций, на которые разделяется исходный белок при зональном электрофорезе, можно увеличить не только с помощью специальных методов окрашивания. Простая замена буферного раствора или поддерживающей среды дает тот же эффект. Например, при электрофорезе сыворотки на бумаге в буферном растворе трис-ЭДТА получается не пять, а девять белковых фракций [1 ]. Еще лучшее разделение можно получить в поддерживающей среде, которая обладает эффектом молекулярного сита, например в крахмальном или полиакриламидном гелях. Малые размеры пор этих гелей задерживают миграцию высокомолекулярных белков, так как трение при этом увеличивается настолько, что даже большой электростатический заряд их молекул не может компенсировать замедляющего действия поддерживающей среды. Однако в других поддерживающих средах величина белковой молекулы мало влияет на скорость миграции, поскольку эффект увеличения трения обычно компенсируется ее большим электростатическим зарядом. [c.11]

Кроме обычного окрашивания, белки, меченные радиоактивным изотопом, после разделения зональным электрофорезом можно выявлять радиоавтографически. Большое значение имеет также тот факт, что с помощью соответствующих субстратов можно непосредственно в поддерживающей среде тестировать ферментативную активность полученных белковых фракций. [c.12]

Реакция преципитации происходит вскоре после смешивания растворов антигена и иммунной сыворотки. Ее предварительный результат, как правило, можно учитывать через 30—60 мин инкубации полученной смеси при 37° С. Преципитация обычно завершается через 24 ч инкубации в холодильнике. При постановке реакции иммунодиффузии, когда соединение реагентов происходит лишь после их диффундирования в поддерживающей среде (например, в агаре), время образования преципитата, помимо прочих моментов, зависит от скорости диффузии. [c.17]

Преимуществом толстостенных плавающих футеровок является их высокая надежность в условиях трудноконтролируемого перепада давлений в рабочей и поддерживающей средах. Конструкция этих футеровок во многом повторяет устройство несущего сосуда, включает цилиндрический корпус с расчетной толсто-стенностью и затворные узлы. [c.258]

Поддерживающие среды. Их применяют для сохранения выросших монослоев клеток после заражения их вирусами. Эти среды содержат меньшее количество сыворотки или добавляются к культуре без нее. Перед использованием среды в нее вносят антибиотики для предотвращения роста случайно попавших микроорганизмов. Культуральные среды стерилизуют, а при наличии нестабильных компонентов — фильтруют. Оптимальные значения pH питательных сред (7,2 —7,6) поддерживают с помощью буферных систем (чаще всего используют бикарбонатный буфер). В среды добавляют индикатор феноловый красный, который становится оранжево-желтым при закислении и малиновым при защелачива-нии среды. [c.262]

В качестве поддерживающих сред применяется бумага, крахмальный, агаровый, полиакриламидный гели, порошки и другие вещества. Гели имеют ряд преимуществ по сравнению с бумагой и другими средами. Рыхлая ячеистая структура- гелей с больщим свободным объемом раствора обеспечивает большую скорость электрофореза. При регулировании величины пор (что лег- [c.121]

Получение реперной ДНК. Семена перед замачиванием стерилизуют в 1—3%-ном растворе NaO l в течение 15—20 минут, отмывают от NaO l стерилизованной водой и выращивают на инертной поддерживающей среде (песок, керамзит и т. д.) в оптимальных условиях температуры во влажной камере и в стерильных условиях. [c.110]

При диск-микроэлектрофорезе, как и при любом электрофорезе с применением поддерживающей среды, надо учитывать некоторые факторы, которые могут стать источником ошибок. Всегда можно принять, что между гелем и внутренней поверхностью стенок трубки существует слой жидкости, по которому может течь поток молекул. Йертен [21] показал, что если стенки стеклянного капилляра покрыть раствором метилцеллюлозы, имеющей вязкость 100 сП, то электроэндоосмос полностью ликвидируется. Поэтому авторы этой главы рекомендуют покрывать капилляры тонким слоем метилцеллюлозы. [c.284]

Зонный электрофорез. Главное отличие зонного электрофореза от фронтального состоит в том, что при зонном э,лектрофорезе используется поддерживающая среда, в которой осуществляется движение вещества, тогда как при фронтальном электрофорезе ионы свободно перемещаются в растворе. Поддерживающей средой, или носителем, служат обычно бумага, целлюлоза, крахмальные гели или блоки, пористые по,лиуретаны. и полиакрил-алшдиые гели. На фиг. 24 приведена схема прибора для зонного электрофореза. [c.77]

Исс,ледуемый материал наносится в виде узкой полосы иа поддерживающую среду приблизительно посередине между сосудами с буферным раствором, в которых находятся электроды. Каждый из компонентов мигрирует с определенной скоростью, зависящей от его заряда, к катоду или к аноду. В результате все компоненты четко разделяются. После этого носитель можно разрезать на соответствующие части и элюировать каждый из компонентов смеси. Таким образом, зонный электрофорез можно с успехом использовать как для анализа многокомпонентных смесей, так и д.пя препаративного выделения чистых белков. Выбор носителя для зонного электрофореза зависит главным образом от задачи, которая стоит перед экспериментатором. Если основной целью является разделение компонентов, то в качестве носителей используются бумага, крахмал или лучше полиакриламидный гель. Если же целью яв.ляется препаративное получение чистого белка, то лучше всего использовать крахмальный блок, на который [c.77]

При зональном электрофорезе необходимо принимать специальные меры для предотвращения конвекционного перемешивания зон. Это достигается применением поддерживающих пористых сред различных гелей, порошков, бумаги и т. д. В последнее время начал распространяться метод зонального электрофореза, в котором роль поддерживающей среды играет так называемый градиент плотности. Поддерживающая среда влияет на скорость электрофоретического перемещения, притом часто неконтролируе- [c.41]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология