Химотрипсин разных форм химотрипсинов

При изучении системы трансферрин — кональбумин у домашней птицы было показано, что железосвязывающие белки могут синтезироваться во многих тканях и что ген трансферрина может определять синтез различных форм белка в разных тканях. У цыплят описана гетерогенная популяция железосвязывающих белков, подобная той, которая наблюдается при сравнении белков сыворотки крови и СМЖ у человека [60]. Трансферрин сыворотки курицы и кональбумин яичного белка сходны по иммунологическим свойствам и аминокислотному составу. Оба белка образуют аналогичные продукты после обработки трипсином и химотрипсином, и тот и другой содержат аланин в качестве N-концевой аминокислоты. Генетически обусловленный полиморфизм трансферрина сыворотки цыпленка отражается в соответствующем полиморфизме кональбумина яичного белка [69]. Генетические вариации трансферрина сыворотки птиц были описаны Мюллером и сотр. [70]. Вильямс [60] показал, что обработка нейраминидазой не оказывает влияния на электрофоретическую подвижность кональбумина в крахмальном геле. Однако тот же фермент уменьшает подвижность двух компонентов трансферрина сыворотки цыпленка, образуя компоненты, соответствующие по подвижности компонентам кональбумина. Это позволило автору предположить, что трансферрин и кональбумин отличаются только по содержанию сиаловой кислоты в углеводных простетических группах. Основываясь на данных, полученных в опытах по включению меченых аминокислот в кональбумин в срезах яйцеводов, тот же автор [60] постулировал, что ген трансферрина у птиц определяет синтез как трансферрина (в печени), так и кональбумина (в яйцеводах). [c.126]

Однако если в растворе в равновесии фермент находится в нескольких разных конформациях, то при кристаллизации будет отбираться только одна из этих конформаций. Так, в условиях, при которых проводится кристаллизация, значительная часть а-химотрипсина находится в неактивной конформации [27], кристаллизуется же только активная форма фермента. [c.26]

Идентичность структуры ферментов в растворе и в кристаллах подтверждается следующими данными. 1. Несмотря на то что некоторые ферменты были получены в кристаллическом виде из разных растворителей и в различных формах, их структура оставалась практически одинаковой (например, субтилизин [18, 19] и лизоцим [20]). 2. Ферменты, принадлежащие к одному классу, имеют сходную структуру (например, сериновые про-теазы, см. ниже). 3. При образовании димера а-химотрипсина контакт между мономерами осуществляется одними и теми же участками как в растворе, так и в составе кристалла [21, 22]. [c.26]

Активность фермента можно охарактеризовать различными способами одним из наиболее иллюстративных способов является указание числа оборотов фермента, т. е. числа полных каталитических циклов, которые данный биокатализатор соверщает в единицу времени. Число оборотов может изменяться в очень щироких пределах в зависимости от функций, выполняемых ферментом в клеточных структурах, он должен действовать более или менее активно. Число оборотов медленно работа-щих протеолитических ферментов невелико и составляет, например для химотрипсина, величину, лежащую в интервале от 0,01 до 10 циклов в минуту. С другой стороны, один из наиболее деятельных ферментов каталаза, разлагающая перекись водорода, имеет число оборотов, равное 10 в минуту. Активность фермента не является строго постоянной величиной даже в одних и тех же условиях данный фермент может обнаруживать различную активность, если он получен из разных источников. Многие ферменты способны существовать в неактивной форме, которая превращается в активную под влиянием специфических веществ. Как было показано Опариным, различные ферменты растительных клеток инактивируются частично или полностью при адсорбции и активируются в результате десорбции. Связь активности с деталями строения субклеточных структур будет рассмотрена ниже более подробно. [c.58]

Насколько геометрические параметры реальных конформационных состояний полипептидной цепи отличаются от параметров так называемых вторичных структур, можно судить по рис. П.З, на котором показано распределение на конформационных картах ф—ф остатков некоторых сегментов цепей а-химотрипсина, карбоксипептидазы А и лизоцима [61]. Во всех исследованиях, посвященных поиску эмпирических корреляций, эти сегменты отнесены к а-спиральным или -структурным. Из рис. П.З видно, что в экспериментально наблюдаемых конформационных состояниях остатков, включенных при статистической обработке во вторичные структуры, значения двухгранных углов ф, ф не только не выражаются в точки ( фц, фц) и ( фр, фр), что должно иметь место при строгой регулярности структур, а обнаруживают существенный разброс в пределах а- и -областей. Более того, в ряде случаев значения ф, ф остатков а- и -сегментов вообще находятся в совершенно других местах конформационной карты. Если ограничить отклонения а-спиральных углов ф, ф от стандартных значений, например 15°, то в трех приведенных примерах в а-спиральных сегментах окажется не 41 остаток, а лишь 18 что же касается -структуры, то при таком ограничении углов ф, ф в нее не попадет больше двух остатков. Если же исключить из структур, считающихся вторичными, по три остатка с их N- и С-концов, которые, как правило, имеют большие отклонения по углам ф, ф или отвечают другим конформационным состояниям, то содержание в глобулярных белках участков, действительно близких к регулярным, уменьшится по сравнению с принятыми в литературе в 2—3 раза. При введении количественного критерия регулярности нельзя уже будет считать вторичными структурами большинство коротких а-спиралей и -структур, в том числе и большинство спиралей из 4—9 остатков, которые являются самыми распространенными в белках. В связи с тем, что в реальных белках вторичные структуры не обладают правильными регулярными формами, их идентификация субъективна и существенно отличается у разных авторов. Например, в лизоциме Чоу и Фасман [99] к а-спиралям и -структурам относят соответственно 54 и 21 остаток, а Бэржес и соавт. [101] — 46 и 4 в субтилизине BPN (отнесения [101] даны в скобках) — 86 (69) и 27 (44), в папаине — 54 (50) и 30 (21). Подобных примеров можно привести очень много. [c.269]

К заключению о правомерности использования модели двух состояний склоняют также данные прецизионных измерений П.Л. Привалова и H.H. Хечинашвили тепловых эффектов (ДН) тепловой денатурации метмиоглобина, а-химотрипсина, рибонуклеазы, лизоцима и цитохрома с [39]. Для этих белков отношение ДН /ДН (ДН — зависящая от принятой модели вант-гоффовская энтальпия) равно 1,05 0,03. Отклонение весьма незначительно, и поэтому денатурацию пяти белков можно рассматривать в первом приближении как кооперативный переход между двумя количественно разными макроскопическими состояниями, при котором промежуточные формы неустойчивы и присутствуют в незначительных количествах. Двухстадийный процесс денатурации, согласно П.Л. Привалову [40] и Т. Крейтону [18], обычно имеет место у однодоменных белков. [c.350]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология