Мышь иммунизация

Для иммунизации используют мышей — самок инбредной линии BAL В/с в возрасте 8—12 нед. [c.309]

Предпринимаются попытки ввести зародышам мышей гены иммуноглобулинов человека с целью создания трансгенных мышей, которые в ответ на иммунизацию конкретным антигеном смогут вырабатывать иммуноглобулины человека. Чтобы получить от трансгенных животных клетки, секретирующие специфические моно- [c.215]

Для выведения линий животных, устойчивых к возбудителям инфекций, можно использовать другой подход, заключающийся в создании путем трансгеноза наследуемых иммунологических механизмов. С этой точки зрения рассматривают самые разные гены, ответственные за работу иммунной системы гены основного комплекса гистосовместимости, Т-клеточных рецепторов, лимфокинов. Наиболее обнадеживающими на настоящее время являются предварительные результаты, полученные при введении мышам, кроликам и свиньям генов, кодирующих Н- и L-цепи какого-либо моноклонального антитела. Идея этого подхода заключается в том, чтобы снабдить трансгенное животное наследуемым механизмом защиты, позволяющим обойтись без иммунизации с помощью прививок. [c.434]

Одна из нерешенных и ожидающих своего объяснения загадок иммунологии связана с тем, что животное после иммунизации бывает иногда способно сохранять невосприимчивость в течение многих лет или даже всей своей жизни. У таких животных в течение всего периода невосприимчивости можно обнаружить присутствие антител [136]. Очень трудно решить вопрос о том, сохраняются ли в организме этих животных небольшие количества антигена, активно способствующего образованию антител. Это, повидимому, имеет место при некоторых вирусных заболеваниях, сопровождающихся длительно сохраняющимся иммунитетом [2]. Небольшие количества ослабленного вируса могут сохраняться в организме и вызывать образование антител. Еще более поразительным примером может служить то, что введенные мышам в дозе 0,5 мг антигенные полисахариды пневмококков удается обнаружить в органах подопытного животного через несколько месяцев после инъекции [137]. Эти данные подтверждают ту точку зрения, что даже в тех случаях, когда иммунитет сохраняется в течение длительного периода времени, образование антител происходит таким же путем, как описано выше, т. е. путем изменения белкового синтеза под действием молекул антигена. Длительным пребыванием антител в тканях организма, возможно, объясняется также так называемая анамнестическая реакция, т. е. появление в организме значительных количеств антител в том случае, когда животному производится повторная инъекция небольшой дозы антигена через большой промежуток времени после первой инъекции. Наблюдаемое при этом внезапное увеличение титра антисыворотки обусловлено, повидимому, переходом антител из ткани в кровоток. Истинное новообразование антител в этих случаях никем до настоящего времени не было еще достаточно убедительно показано [139]. [c.350]

Как уже говорилось (разд. 3.5.5), локусы главного комплекса гистосовместимости (МНС) расположены в хромосоме 6 человека и гомологичны генам комплекса Н2 мыши [113]. Иммунизация инбредных линий мышей разными, явно неродственными антигенами (синтетическими полипептидами, сывороточными белками, антигенами клеточных поверхностей) индуцирует высокие уровни антител в одних линиях и низкие уровни (или отсутствие ответа) в других. Количество индуцированных антител контролируется локусами иммунного ответа (1г), которые являются частью комплекса Н2. Заражение мышей вирусом лейкемии вызывает рак, более легкий в одних линиях, чем в других [766]. Эти различия контролируются генами, которые, подобно генам 1г, относятся к комплексу Н2 [741 740 765 783]. Позже было продемонстрировано сцепление комплекса Н2 с генетическими факторами предрасположения к аутоиммунному тиреоидиту мышей [859] и восприимчивости к лимфоцитарному вирусу хориоменингита. [c.267]

Для целей анализа подбирают такие условия иммунизации животных, при которых образовывались бы антитела с максимальной специфичностью и прочностью связи с антигеном. В зависимости от структуры антигена и поставленной задачи для получения антител используют различные виды животных от мелких лабораторных (мыши, морские свинки, кролики, куры) до крупных (овцы, козы, лошади). После нескольких инъекций антигена в присутствии стимуляторов иммунного ответа в сыворотке крови накапливаются специфические антитела. При иммунизации крупных животных можно получать большие количества антител для практических целей. В последнее время для иммунизации стали использовать кур, у которых антитела накапливаются в желтке яиц, что упрощает их получение и выделение. [c.103]

Иммунизация крыс проводится в тех случаях, когда требуется получить антитела к антигенам мыши, для которых отсутствует полиморфизм у разных линий мышей. Полученные гибридом-ные клетки можно выращивать в организме крыс, если применять миеломные клетки крыс, или в организме мышей после подавления их иммунологической реактивности (см. ниже). [c.100]

Моноклональные антитела находят очень широкое применение, в том числе для диагностики и терапии различных заболеваний человека. Например, антитела против опухолевых антигенов, сшитые с токсинами (иммунотоксины), могут быть применены для селективного убивания опухолевых клеток в организме человека. Такие антитела несложно получить, используя для иммунизации мышей или крыс и последующее конструирование гибридом. Однако употребление этих антител очень ограничено, так как при их введении в организм человека (особенно повторном) возникают реакции на гетерологичный белок. Поэтому крайне желательно получать моноклональные антитела человека. [c.119]

Введение облученным мышам клеток только костного мозга (ККМ) или только тимуса (КТ) не обеспечивает развитие иммунного ответа достаточной силы. В то же время введение смеси этих клеток приводит к интенсивной продукции антител к использованному для иммунизации антигену (эритроцитам барана — ЭБ). Причем ответ при совместной инъекции клеток значительно выше, чем сумма ответов при раздельном введении клеток различного происхождения. Таким образом, кооперация двух типов клеток приводит к синергическому эффекту. Ответ оценивали по количеству бляшкообразующих (антителообразующих) клеток (БОК) в селезенке [c.240]

После однократной подкожной или повторной внутри-брюшинной иммунизации мышей белковым ферментом фитоуреазой радиорезистентность животных повышалась [c.35]

Влияние эстифана нри его четырехкратном внутрибрюшинном введении до иммунизации на гуморальный и клеточный иммунный ответ мышей на эритроциты барана [c.399]

Получение антител, специфичных к определенному белку, производится повторным инъецированием очищенного белка в организм животного кролика, морской свинки, овцы, козы, курицы, лошади, мыши. Процедура иммунизации остается пока еще эмпирической и зависит от иммуногенности конкретного белка. Так, для некоторых растительных белков достаточно для всякой процедуры иммунизации доли миллиграмма (некоторые ферменты типа а-амилаз, рибулозобисфосфаткарбоксилаза, ФЕП-карбокси-лаза), тогда как других белков (некоторые фракции проламинов семян) требуется несколько десятков миллиграммов (в очищенном виде), чтобы путем нескольких инъекций вызвать образование антител. [c.95]

Образование и отбор гибридных клеток Первый шаг в процессе получения гибридной клеточной линии, продуцирующей антитела одного типа, состоит во введении мышам антигена. После ряда иммунизаций, проведенных в течение нескольких недель, проверяют, произошло ли развитие у животных иммунного ответа. Если ответ развился, то животных умерщвляют, извлекают селезенку, промывают ее, измельчают и несильно встряхивают для высвобождения единичных клеток, среди которых находятся и антителопродуцирующие В-клетки. Взвесь клеток селезенки смешивают со взвесью миеломных клеток, дефектных по гипоксантин-гуанин-фосфорибозилтрансферазе (НОРКТ ). Комбинированную взвесь в течение нескольких минут инкубируют в 35%-НОМ полиэтиленгликоле, а затем переносят в среду, содержащую гипоксантин, аминоптерин и тимидин (среда ГАТ). [c.185]

Перспективы генной иммунизации были тщательно изучены. В одной из серий экспериментов мышам в квадрицепсы обеих задних конечностей вводили раствор с Е. со//-плазмидой, несущей кДНК нуклеопротеина вируса гриппа [c.233]

А, транскрипция которой находилась под контролем промотора вируса саркомы Рауса или ци-томегаловируса. Хотя уровень экспрессии гена нуклеопротеина был настолько низок, что не поддавался регистрации, через 2 нед после иммунизации в крови мышей обнаруживались антитела к нему. Выживаемость иммунизированных мышей оказалась значительно выше, чем мышей из контрольной группы (рис. 11.5). Более того, они были нечувствительны и к другому штамму вируса гриппа. Такая перекрестная защита не вырабатывается при введении традиционных противогриппозных вакцин, полученных на основе поверхностных антигенов вируса, и поэтому каждая вакцина специфична лишь к одному штамму вируса. Более того, традиционные вакцины сохраняют свою эффективность только до тех пор, пока остаются неизмененными поверхностные антигены. К сожалению, для генов поверхностных антигенов характерна высокая частота мутаций, что приводит к появлению существенно различающихся штаммов вируса. Кбровые же белки, такие как нуклепротеин, относительно стабильны и активируют иммунную систему по другому механизму, чем поверхностные антигены. [c.233]

Введение в организм реципиента генов антител, которые связываются со специфическими антигенами, было названо иммунизацией in vivo. Для этого гены Н- и L-цепей иммуноглобулинов моноклонального мыши- [c.434]

Линия гибридомных клеток не истинно нейрональная модельная система, однако она должна быть упомянута здесь, поскольку представляет собой полезный инструмент исследования в нейрохимии. Каждый В-лимфоцит обычно секретирует только один тип антител. Смесь большого числа моноспецифических антител образует нормальную гетерогенную антисыворотку. Для получения высокопродуктивных моноспецифических лимфоцитов, секретирующих антитела, Кёлер и Милштейн проводили слияние В-клеток иммунной мыши с опухолевыми клетками. В отличие от нормальных лимфоцитов, полученные гибридные клетки растут и размножаются практически бесконечно и продуцируют смесь антител против антигена, используемого для иммунизации. Даже если антиген является индивидуальным белком, продуцируемые антитела представляют собой смесь многих антител, каждое из которых направлено против одного специфичного антигенного участка исходной молекулы. Для получения моноспецифической сыворотки, т. е. раствора антител против одной антигенной области и происходящих из одного вида гибридомных клеток, эти клетки необходимо отобрать и клонировать . Теперь клон продуцирует моноклональные антитела , гомогенную популяцию антител против только одной детерминанты антигена. Эти моноклональные антитела можно пспользовать для разнообразных исследований, например для идентификации функциональных участков молекулы. Но что еще более важно, такой метод может использоваться для полу- [c.371]

В целях получения лимфоиддых клеток животному (мыши) вводят внутримышечно или внутрибрюшинно антиген в дозе примерно 5- 200 мг в расчете на чистый белок. В ответ на сильный антиген в селезенке 0,05% клеток секретируют IgM и IgG в соотношении, близком 10 1 из примерно 1% всех секретирующих клеток. Через 3—4 недели повторно вводят 10—100 мкг антигена. В течение последующих 2—4 недель проверяют титры антител и затем перед экстирпацией селезенки в течение нескольких дней вводят внутривенно небольшие дозы антигена для активации В-лимфоцитов. Могут быть приняты и другае схемы иммунизации. [c.573]

Сходные эксперименты с различными инбредными линиями мышей (т.е. линиями, в которых все мыши генетически однотипны) дали результаты, близкие к полученным ранее на морских свинках при иммунизации простым синтетическим полимером некоторые жнии давали сильный иммунный ответ Т-клеточного типа, тогда как другие линии совсем не реагировали. На специально выведенных линиях мышей, различавшихся только ограниченным участками генома (так называемых конгенных линиях), были проведены исследования по картированию геиов 1г, и оказалось, что эти гены расположены в пределах генного комплекса Н-2 в области между Н-2К и Н-20, впоследствии названной 1-областью. Сейчас у мышей описан уже ряд различных генов 1г, контролирующих зависимые от Т-клеток ответы на разные антигенные детерминанты, и определена их локализация в нескольких субобластях 1-области (рис. 17-64). В большинстве таких локусов способность отвечать на антигенную детерминанту определяется доминантным аллелем, однако в отдельных случаях доминирует неспособность к ответу. В этих случаях можно показать, что наследственная неспособность к иммунному ответу обусловлена активностью Т-клеток-супрессоров, и гены, контролирующие ответ этих клеток на специфическую детерминанту, называют ие /г-генами, а генами иммунной супрессии (1з). [c.60]

Био синтез и получение индивидуальных иммуноглобулинов. Иммуноглобулины синтезируются в лимфоцитах, которые образуются при диф( ренциации лимфоидной стволовой клетки. В настоящее время общепринятой является так называемая теория клональной селекции, согласно которой каждый лимфоцит может синтезировать, вероятно, только один иммуноглобулин. Групйа лимфоцитов, специализировавшихся на синтезе какого-либо иммуноглобулина, называется клоном. При обычном иммунном ответе (действие нормальной микробной флоры или заражение) про- исходит образование многих различных лимфоцитов, иммуноглобулины которых направлены на различные участки молекулярной структуры антигена. Такой ответ называется поликлональным. В некоторых случаях при гиперстимуляции иммунизации—продолжительной инъекции антигена—наблюдается преобладание относительно небольшого числа клонов это так называемый ограниченный ответ. При ограничении числа клонов практически возможно выделить чистые иммуноглобулины. Еще большие возможности возникают при моноклональном типе ответа. Такой ответ редко наблюдается при обычной иммунизации, но имеет место при дезорганизации размножения клеток — опухолях плазменных клеток. Такие опухоли можно легко трансплантировать нормальным животным, где они продолжают продуцировать большие количества гомогенного иммуноглобулина. Возможно у популяции мышей индуцировать опухоли плазменных клеток частыми внутрибрюшинными инъекциями минерального масла или рентгеновским облучением. [c.103]

Межмолекулярная конкуренция может сочетаться с внутримолекулярной, хотя полного параллелизма отметить не удается. Интересны в этом плане опыты Taussing [141] на мышах линии СзН с генетически обусловленным иммунным ответом на искусственные детерминанты (Фен-Глу) и (Про-Лиз) и не отвечающие на (Ала-Лиз) и тирозин-глутамин (Тир-Глу). При иммунизации мышей сополимером, имеющим две активные детерминанты (Фен-Глу)-Про-Лиз, авторы наблюдали сохранение первичного ответа на (Про-Лиз) и уменьшение на (Фен-Глу) log2 титра в РПГА уменьшился соответственно с 4,2 0,7 до 0,9 0,3. В то же время при иммунизации смесью сополимеров (Фен-Глу)-Ала-Лиз и (Тир-Глу)-Про-Лиз, т. е. сополимеров, имеющих для мышей СзН лишь по одной активной детерминанте, эффект подавления иммунного ответа был возможен лишь в случае количественного превосходства одной из детерминант. Так, если соотношение количества конъюгата (Фен-Глу)-Ала-Лиз в смеси было в 25 раз больше, чем конъюгата (Тир-Глу)-Про-Лиз, то доминантной детерминантой оказывалась (Фен-Глу). Если же количество первого сополимера было, наоборот, в 5 раз меньше, то доминантной детерминантой была уже (Про-Лиз). [c.53]

У животных, получивших водные вытяжки, настаиваелше при 60° С, были, таким образом, обнаружены изменения, аналогичные изменениям у животных 1-й подопытной группы — у белых мышей в динамике веса тела и условнорефлекторпой деятельности, а у крыс в средних весовых коэффициентах печени помимо этого, у последних было отмечено понижение способности к выработке специфических антител после иммунизации. [c.62]

При длительном скармливании (примерно в течение 15 мес.) белым мышам и крысам водных вытяжек пз нестабилпзпрованпого полипропилена (температура настаивания 20 и 60° С) отмечались очень незначительные по сравнению с животными контрольной группы изменения в отдельных показателях (вес и условнорефлекторная деятельность у мышей весовые коэффициенты печени у крыс). У крыс, получавших водные вытяжки, настаиваемые прп 60° С, наблюдалось также снижение продукции специфических антител после иммунизации. [c.63]

В течение хронического опыта велось наблюдение за общим состоянием и весом всех животных. У кроликов следили еще за скоростью свертывания крови, длительностью гипноза и продукцией специфических антител после иммунизации, у морских свинок — за работоспособностью. У белых мышей изучали потребление кислорода, морфологический состав периферической крови, способность к суммации подпороговых кожноэлектрических импульсов и условнорефлекторную деятельность. В конце эксперимента у мышей исследовали работоспособность методом плавания. [c.146]

В течение эксперимента существенные различия были обнаружены между подопытными и контрольными животныдш лишь у кроликов в выработке специфических антител после иммунизации и у мышей в условнорефлекторной деятельности и в иродолжительности времени плавания. Во всех остальных изучавшихся показателях статистически значимых различий между животными подопытной и контрольной групп пе наблюдалось. [c.147]

Помимо нарушений гемопоэтической активности селезенки, развивающихся в результате описанных выше повреждений, при нейтронном облучении изменяется и ее иммунная функция, что проявляется в снижении продукции гуморальных антител при иммунизации мышей эритроцитами барана. При количественной оценке такого угнетения антителогенеза учитывалось образование антител определенным числом облученных клеток селезенки, которые вводили смертельно облученной мыши той же генетической линии, что и донор ОБЭ нейтронов деления по этому показателю составила 4—5 (Gottlieb, Gengozian, 1970). По данным, полученным с помощью другой методики, — по оценке выработки антител клетками селезенки в культуре, — ОБЭ нейтронов близкой энергии оказалась существенно люньше — 2.3+0.2. Однако и эта [c.96]

Выделение гибридных белков, содержащих -галактозида-зу, было детально описано в предыдущей главе. Для иммунизации мышей требуются относительно небольшие количества антигена, поэтому его можно наработать любым методом. Хотя белковый материал, полученный в результате препаративного ДСН-электрофореза в ПААГ, не всегда обладает такими имму-ногенными свойствами, которые присущи большинству нативных препаратов, он имеет то преимущество, что вызываемый им иммунный ответ обусловлен устойчивыми к денатурации эпитопами. Используемый нами метод выделения нерастворимых гибридных белков приведен в табл. 6.4. Моноклональные антитела к таким эпитопам часто удается с успехом использовать в последующем детальном иммунохимическом анализе белковых антигенов. Наличие абсолютно чистого иммуногена не требует- [c.180]

Выбор экспериментального животного. Он определяется наличием родительских миеломных линий, возможностью получения гибридов клеток этих линий и иммунных лимфоцитов, а также способностью к размножению полученных гибридом в организме животного. Обычно для иммунизации используют мышей и крыс. Это связано с тем, что подходящие миеломные клетки мышей и крыс щироко распространены и, кроме этого, не представляет сложностей выращивание полученных гибридом в организме этих животных. При иммунизации мышей берут линию Ва1Ь/С это связана с тем, что все имеющиеся миеломные линии, образую- [c.99]

Хотя Пастер разработал принципы вакцинации и успешно применял их на практике, он ничего не знал о факторах, включенных в процесс защиты от инфекции. Первыми, кто пролил свет на один из механизмов невосприимчивости к инфекции, были Эмиль фон Беринг и Китазато. Они продемонстрировали, что сыворотка от мышей, предварительно иммунизированных столбнячным токсином, введенная интакгным животным, защищает последних от смертельном дозы токсина. Образовавшийся в результате иммунизации сывороточный фактор — антитоксин — представлял собой первое обнаруженное специфическое антитело. Работы этих ученых положили начало изучению механизмов гуморального иммунитета. [c.6]

На первом этапе работы от мышей, иммунизированных опеределенным антигеном (АГ), получали суммарную, недифференцированную популяцию Т-клеток, содержащую самые различные клоны (на рис. цифры 1 -6). Второй этап состоял в выделении отдельных клонов Т-клеток, среди которых были и специфичные к использованному антигену (на рис. в качестве примера приведено четыре клона, один из которых — клон 3, — специфически реагирует с антигеном). Третий этап работы включал получение моноклональных антител (мАТ) к антигенреактивно-му клону. Задача этого этапа — получение моноклональных антител, способных реагировать только с клоном, использованным для иммунизации. В то же время перекрестная реакция мАТ говорит об общей специфике антигенреактивного клона и непримированных клонов (верхняя таблица). Отсутствие перекрестной реактивности мАТ указывает на наличие у положительно реагирующего примирован-ного клона особой специфичности — предположительно, антигенраспознающего рецептора. Подтверждением подобного предположения является реакция задержки взаимодействия мАТ с соответствующим клоном в присутствии использованного антигена (нижняя таблица). Получение мАТ к антигенраспознающему рецептору Т-клеток создало условия для его полноценного изучения [c.101]

Мышей с определенной характеристикой по локусу К или D иммунизировали одним из вирусов (условно вирусом А). От примированных животных получали Т-клетки, которые использовали в цитотоксическом тесте с клетками-мишенями, зараженными вирусом и относящимися по характеру локуса К (или D) либо к донору Т-клеток, либо к его аллельному варианту. Цитотоксическую реакцию оценивали по интенсивности выделения Сг из клеток-мишеней. Примированные Т-киллеры гаплотипа не дают реакции с генетически идентичными, интактными клетками-мишенями (1). Нет реакции и при заражении клеток-мишеней вирусом, отличающимся от вируса использованного при иммунизации (2). Цитотоксическая реакция положительная, если генетически идентичные Т-кил-лерам клетки-мишени заражают гомологичным вирусом (3). В то же время при использовании клеток-мишеней, отличающихся по локусу К от Т-киллеров, цитотоксическая реакция не развивается даже при наличии гомологичного вируса у клеток-мишеней (К" против К или К против К — 4,5). Аналогичные отношения выяапены для локуса D. В то же время генетические ограничения не проявляются по генам, контролирующим молекулы П класса. Из этих опытов следует, что Т-киллеры распознают как собственные молекулы I класса, так и чужеродный вирусный антиген [c.171]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология