Прямая экспрессия

Однако наиболее общими являются методы иммунохимического анализа, применимые как в случае прямой экспрессии, так и при синтезе гибридных белков. [c.439]

Значение IS-элементов для эволюции бактерий связано с тем, что эти элементы при своих перемещениях инактивируют разл. гены или нарушают их нормальную регуляцию. Помимо прямого влияния на экспрессию гена (раз- вития признака, контролируемого данным геном) вследствие транспозиции инсерционной последовательности непосредственно в кодирующую часть гена или его регуляторную зону, эти М. г. э. могут влиять также на транскрипцию (биосинтез информационной РНК на матрице ДНК) окружающих их последовательностей ДНК генома. Это происходит вследствие того, что мн. IS-элементы содержат промоторные (инициирующие транскрипцию) и термина-торные (прекращающие транскрипцию) участки ДНК. Транспозиции IS-элементов могут вызывать слияние двух не [c.79]

Простота вычислительного алгоритма ОР-метода позволяет при работе управляющей микро-ЭВМ в реальном масштабе времени осуществить такие принципы управления, которые по своему уровню радикально отличаются от цифрового копирования обычных аналоговых регуляторов. Скажем, возможна оптимизация управления с помощью периодически повторяющихся в многократно ускоренном темпе экспресс-прогнозов протекания процессов на основании измерений внешних воздействий и текущего состояния объекта. При этом расширяется в сторону быстродействия и круг объектов, где возможно осуществить прямое микропроцессорное управление подобного уровня. [c.101]

Проведите количественное определение (метод нейтрализации прямым титрованием экспресс-анализ) [c.183]

Применительно к каучукам, получаемым методом эмульсионной полимеризации, необходимо измерение вязкости по Муни как конечного продукта (товарного, каучука), так и полимера латекса, что привело к разработке экспресс-методов определения этого показателя [14]. Существует два вида экспресс-методов косвенные, помогающие найти достаточно точную и воспроизводимую корреляционную зависимость между какой-либо быстро определяемой характеристикой полимера и вязкостью по Муни и прямые. Из косвенных наибольший интерес представляют методы, исключающие стадии выделения и сушки полимера [15, 16]. В них совмещены процессы коагуляции латекса и растворения полимера вязкость рассчитывается по значениям удельной вязкости раствора полимера по корреляционным зависимостям. К недостаткам косвенных методов относится нарушение корреляции из-за влияния различных факторов, не учитываемых уравнением, например влияния полидисперсности полимера на вязкость по Муни [17, 18, 19], остатков эмульгатора на удельную вязкость растворов [15]. Поэтому воспроизводимость этого метода на практике часто приводит к большим погрешностям преимущество прямых методов -большая надежность получаемых результатов, так как измеряется непосредственно нужный показатель. [c.442]

Из многих фотореакций, опосредованных фитохромом, лучше всего изучены, вероятно, инициация цветения, прорастание семян и позеленение этиолированных тканей. В первом случае очень кратковременное освещение даже части растения (одного листа) светом требуемой длины волны инициирует реакцию, для завершения которой необходимо несколько недель. Ясно, что при этом происходит экспрессия новой генетической информации. В природных условиях начало цветения определяется длиной дня, или, говоря более точно, продолжительностью темпового периода. Так, у растений короткого дня цветение начинается в условиях длинной ночи и короткого дня, в то время как для растений длинного дня необходимы прямо противоположные условия — длинный световой и короткий темновой период. В обоих случаях фитохром является фоторецептором, который опосредует реакцию. [c.371]

Для выделения анализируемого лекарственного вещества из многокомпонентной лекарственной формы используют хроматографию. Особенно перспективно применение для экспресс-анализа распределительной хроматографии на бумаге и тонкослойной хроматографии. После выделения лекарственного вещества из лекарственной формы выполняют химические реакции на ионы или функциональные группы, причем эти реакции могут быть выполнены прямо на хроматограмме. [c.249]

Экспресс-диагностика. Обнаружение в исследуемом материале вируса гриппа основано на выявлении специфического вирусного антигена с помощью прямой и непрямой РИФ. При наличии вируса гриппа в клетках эпителия обнаруживается зеленовато-жел-тое свечение (см. цв. вклейку, рис. 16). [c.279]

Экспресс-диагностика. Экспресс-методы основаны на прямом обнаружении антигена в исследуемом материале от больного. Для этих целей используют РИФ, РНГА, ИФА и их модификации, которые дают возможность обнаружить и типировать вирусспецифический антиген в клетках. [c.291]

ЭКСПРЕСС-МЕТОД ПРЯМОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕАКЦИИ ТЯЖЕЛЫХ ПИРИДИНОВЫХ ОСНОВАНИЙ [c.114]

Для последних критериев, а также в целях общей характеристики содержания органических примесей в воде очень важным является быстрое определение углерода органических веществ. Методики прямого определения этого показателя основаны на измерении углекислого газа, выделяющегося при полном окислении органических соединений [34]. Быстрый экспресс-анализ по Некрасову [35] осуществляется без выпаривания пробы воды с применением в качестве окислителя 1-н. раствора бихромата калия с добавкой персульфата калия (40 г/л) и азотнокислого серебра или перманганата калия (1 г/л)-, кислая реакция среды создается смесью концентрированных кислот (двух частей серной и одной части фосфорной, по объему). [c.45]

Разработан экспресс-метод прямого количественного определения маслорастворимых нейтральных и щелочных нефтяных сульфонатов и минерального масла путем жидкостного распределительного хроматографирования (см. разд. П1.2.2.2.2.). [c.324]

Прямая экспрессия в S. erevisiae Термин прямая экспрессия применяется для описания векторных систем, при использовании которых синтезированные белки аккумули- [c.137]

Для получения белков содержащих более 150 аминокислот, чаще используется прямая экспрессия соответствующих генов, в результате которой сразу синтезируются требуемые белки лишь с иезначительиой модификацией. При этом кодирующая часть геиа соединяется с бактериальным промотором, рибосомсвязывающим участком и инициирующим кодоиом ATG (рис., 255). [c.438]

Имеются два общих подхода к осуществлению внутриклеточной экспрессии клонированных генов. Соответствующий ген может быть клонирован в одной рамке считывания с синтетическими или бактериальными кодирующими последовательностями и экспрессироваться с образованием гибридного белка. Другой способ — непосредственная экспрессия встроенного гена. Потребность в экспрессии эукариотических полипептидов в составе гибридных белков возникла, когда было обнаружено, что уровень экспрессии эукариотических белков в клетках Е. oli ограничивается по той причине, что они распознаются клеткой как чужеродные и разрушаются [9]. Это особенно наглядно проявилось в случае полипептидов небольшого размера. При сшивании эукариотического гена с бактериальным синтезировались гибридные продукты, которые накапливались в клетке в значительно больших количествах [10, 11]. Однако, если требуется получить эукариотический полипептид в чистом виде, возникает необходимость в методе, позволяющем правильно расщепить гибридный белок. С другой стороны, непосредственная экспрессия одного эукариотического гена дает возможность получить нужный белковый продукт. Однако первичные продукты трансляции несут на своем Ы-конце остаток метионина. В клетках Е. соН имеются ферменты, осуществляющие при необходимости эффективное отщепление метионина от природных белков однако в случае рекомбинантных белков эти ферменты работают не столь эффективно [1]. Таким образом, белки, полученные в результате прямой экспрессии эукариотического гена, могут содержать несвойственный природному белку N-концевой метионин. [c.98]

Второй метод называется методом прямой экспрессии. В этом случае стыковка структурного гена производится в области инициации трансляции с образованием гибридного сайта узнавания рибосомами (рис. 5.3). Такой способ позволяет получать почти естественный чужеродный белок обычно с лишним метионино-вым остатком на МНг-конце полипептидной цепи. Последнее обстоятельство связано с тем, что многие необходимые нам белки человека, такие, как инсулин или интерфероны, синтезируются [c.100]

Рис. 7.4. Конструирование плазмид для прямой экспрессии химерных лейкоцитарных интерферонов

Разработаны методики экспресс-определения ряда катионов редких, драгоценных и тяжелых металлов, хлора, кислорода, неорганических анионов, фенолов, аминов, гидразинов, альдегидов. Построены линейные градуировочные графики зависимости коэффициентов пропускания и диффузного отражения от концентрации микрокомпонентов с прямой пропорцианальной зависимостью или на основе функции Кубелки-Мунка-Гуревича. Погрешность определения с помощью стандартных цветовых шкал компараторов ЭКОТЕСТ 10-50% относительное стандартное отклонение для тестов ФОТОКО-ЛОРИМЕТРА-РЕФЛ ЕКТОМЕТРА 0,1-0,3. [c.106]

Исследование закономерностей процессинга необходимо для выяснения механиз>юв регуляции экспрессии генов. Рассмотрение этапов процессинга и его вариантов у разных организмов затрагивает также ряд других принципиальных проблем. Оказалось, что молекула РНК и в отсутствие белка может выступать как аутокатализатор, осуществляя благодаря конформационной гибкости молекулы сложную и точную собственную перестройку с образованием новых ковалентных связей. Таким образом, полирибонуклеотиды могут функционировать подобно ферментам. Открытие возможности аутокаталитических превращений полирибонуклеотидов показало, что исследование процессинга РНК имеет прямое отношение к вопросу о пребиотических стадиях эволюции макромолекул. [c.163]

С помощью клонирования специфических генов и последующей их экспрессии в бактериях получен целый ряд белков, которые можно будет использовать в качестве лекарственных препаратов. Большинство этих белков имеют эукариотическое происхождение, так что для выделения нужного гена сначала получают препарат мРНК, обогащенный интересующими исследователя фракциями, затем создают кДНК-библиотеку и встраивают соответствующую ДНК в подходящий вектор для экспрессии. Произведя обмен участков родственных генов, кодирующих аналогичные белковые домены, или прямо заменяя сегменты клонированного гена, кодирующие функциональные части белка, можно создавать новые модификации таких белков. В качестве лекарственных средств можно использовать и некоторые ферменты. Например, для снижения вязкости слизи, которая накапливается в легких больных муковисцидозом, применяют в виде аэрозоля рекомбинантную ДНКазу I и альгинатлиазу. [c.224]

Для обеспечения экспрессии чужеродньгх генов, введенных в растительные клетки, использовали растительные промоторы. Различные промоторы, функционирующие только в определенньгх растительных тканях или на определенной стадии развития растения, идентифицировали по экспрессии репортерного гена без промотора после его интеграции в хромосомную ДНК растения. Были разработаны методы встраивания чужеродных генов непосредственно в хлоропластную или митохондриальную ДНК так, чтобы кодируемый белок синтезировался прямо в этих органеллах. И наконец, для того чтобы успокоить общественность, были разработаны методы удаления маркерных генов из трансгенных растений. [c.387]

Трансгенные растения, трансформированные сильно измененным геном протоксина, синтезировали в 100 раз больще токсина, чем растения, трансформированные геном дикого типа, при этом наблюдалась прямая корреляция с увеличением инсектицидной активности. Полученные данные позволяют надеяться, что аналогичным образом удастся повысить уровень экспрессии в растениях множества других чужеродных генов. [c.392]

Самая простая из них — прямое введение ДНК-конструкций в клетки ткани-мищени. Если в скелетную мыщцу мыщи инъецировать плазмидную ДНК, то она проникнет в некоторое число клеток, о чем свидетельствует экспрессия гена-репортера в течение по крайней мере 50 сут. Однако применение этого подхода ограничивается тем, что не все ткани доступны для инъекций, а кроме того, нужны больщие количества ДНК. Можно бомбардировать с помо- [c.499]

Фактор как долго может определяться са.мопроизвольно с помощью молекулярного механизма транскрипции и трансляции ДНК для нас же особый интерес представляют факторы сколько и где . Если сайт (т. е. клеточное окружение развивающейся козетки на пути от нервной пластинки к специализированному органу-мишени) влияет на экспрессию гена, то это предполагает ограничение генетической детерминированности организма. В самом деле, имеются доказательства того, что клетки влияют друг на друга в период развития. Это происходит либо при прямом контакте, молекулярный механизм которого не вполне ясен, либо при выделении химических сигналов, называемых факторами роста нервов. Последние мы будем обсуждать в связи с термином трофизм, а механизм прямого контакта будет показан на примере образования и стабилизации синапсов. Следует отметить, что не только генетическая программа определяет окончательную структуру нейрональной сети, существенно также положение отдельной клетки в пространстве и времени. Именно последнее и помогло сделать следующий вывод геном человека содержит >10 генов, а число синапсов >10 (10 ° нейронов, каждый из которых имеет 10 синапсов, см. выше), так что маловероятно (хотя и нельзя считать совсем невозможным вследствие огромного разнообразия антител, продуцируемых ограниченным числом генов), чтобы специфичность каждого отдельного синапса программировалась определенным участком гена. Мы еще вернемся к этому важному вопросу при рассмотрении синаптогенеза, т. е. процесса образования и стабилизации специфических синапсов. Представляется вполне допустимым, что развитие нервной системы контролируется несколькими факторами генетическим, трофи- [c.319]

Недавно для определения активности фермента был предложен экспресс-метод [74], позволяющий непрерывно регистрировать образование глюкозы непосредственно в спектрофотометрической кювете. При избытке глюкозооксидазы и пероксидазы в системе лимитирующей стадией сопряженной реакции является гидролиз целлобиозы и скорость образования окраски прямо пропорциональна скорости образования целлобиозы. Определение активности проводится в рН-оптимуме целлобиазы (pH 4,5-5,0), занимает 2-10 мин Метод позволяет в 10-20 раз повысить чувствительность определения целлобиазной активности. Недостатком данного способа является, прежде всего, нестабильность реагента при хранении даже в течение дня. [c.140]

Методы индикации возбудителя (экспресс-диагностика). Для быстрого обнаружения патогенных для человека легионелл в исследуемом материале применяют прямую РИФ (исследование мокроты), а также ИФА, РИА и реакцию агглютинации латекса (исследование мочи). Чувствительность этих методов составляет 25 — 90 %, специфичность — более 85 %. Результаты исследования получают через несколько часов недостатком является ограниченное количество выявляемых серогрупп легионелл. [c.138]

Микроскопия. Из взятого материала готовят несколько мазков и фиксируют их в смеси Никифорова. Мазки окрашивают по Граму и параллельно — метиленовым синим по Леффлеру (см. цв. вклейку, рис. 1). С целью экспресс-диагностики мазки обрабатывают также меченой люминесцентной антисывороткой к Y. pestis (прямая РИФ). [c.172]

Экспресс-методом диагностики хламидиозов можно считать обнаружение в клиническом материале (моча, отделяемое половых органов, материал соскобов) группового антигена возбудителя. Для выявления антигенов как элементарных, так и ретикулярных телец используют ИФА, но чаще — РИФ (прямой и непрямой варианты). На рис. 25 (цв. вклейка) представлены результаты прямой РИФ с исследуемым материалом. При использовании антител, меченных флюорохромом, свечение измеряют с помощью прибора — флюорометра. [c.246]

Экспресс-диагностика. Быстрое обнаружение вируса основано на прямом исследовании материала от больного и дает возможность установить ориентировочный диагноз заболевания, вызванного одним из вирусов оспенной группы. Для выявления вирионов используют электронную микроскопию, а антигенов вирусов — РИФ, РОПГА, РПГ, ИФА. [c.287]

Харрис [64 ] описывает ряд методов определения воды в некоторых материалах. По его утверждению, абсолютное определение воды во многих смесях невозможно, особенно при проведении экспресс-анализов, например при контроле качества. Поэтому достоверность анализа становится важной проблемой в этом случае результаты анализа могут даваться в относительных единицах, приведенных к определенному стандарту. Имеется насущная необходимость установления национальных и международных стандартов, вероятно, через такие организации, как ASTM (Американское общество испытания материалов) и ISO (Международная организация стандартизации). Калибровку каждого конкретного аналитического метода следует осуществлять путем определения воды в образцах, содержащих строго определенное количество воды и являющихся устойчивыми соединениями. Такими образцами, например, могут служить соответствующие гидратированные соединения. С другой стороны, для калибровки можно использовать результаты прямого измерения термодинамических или электрических величин или других констант. Имеются многочисленные методы получения газовых смесей с заданным составом, пригодных в качестве стандартов для калибровки физических измерений, используемых для определения влажности газов. В работе Гринспена [60] (Национальное бюро стандартов) кратко описывается генератор влажности, который позволяет задавать определенное содержание воды (несколько млрд ) в воздухе и в других газах. Автот утверждает, что ему удалось измерить с точностью до 0,05 °С точку замерзания (—100 °С), что соответствует 14 млн , воды в воздухе при атмосферном давлении. Измерения возможны в интервале давлений от 500 до 200 ООО Па в широком интервале температур. Решкович и Грязина [56] обсуждают условия приготовления и хранения стандартов для определения влажности газов, а также описывают методики определе- [c.30]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология