Субкультивирование

Существующие методы субкультивирования изолированных клеток в условиях in vitro, позволяют использовать их как для фундаментальных исследований, так и для практического применения. Особый интерес представляет способность изолированных клеток, тканей и органов синтезировать вещества вторичного метаболизма, которые широко используются в медицине, защите растений, ветеринарии, кормопроизводстве, пищевой промышленности, парфюмерии и др. Такой интерес исследователей к этому направлению работ неслучаен, так как клеточная биотехнология для получения физиологически активных веществ имеет ряд преимуществ по сравнению с использованием традиционного растительного сырья 1) получение биомассы клеток не зависит от сезона, климатических и почвенных условий 2) возможность оптимизировать условия культивирования суспензии клеток, позволяющих синтезировать в нео б-ходимом количестве нужные вещества 3) автоматизация процесса. [c.103]

Длительное субкультивирование, при котором накапливаются генетически измененные каллусные клетки. [c.171]

Клеточная линия — возникает из первичной культуры при первом удачном субкультивировании название "клеточная линия" относится к таким культурам, которые включают линии клеток, изначально присутствующих в первичной культуре. Если известен статус культуры, то используют термины "прерывная" или "непрерывная" культура. Если же статус неизвестен, то достаточен термин "линия". [c.494]

Субкультивирование — перенос транспланта (инокулюма) на свежую питательную среду. [c.498]

Хорошо растущая суспензия имеет, как и каллусная культура, 8-об-разную кривую роста. Обычно длительность пассажа составляет 14—16 дней. При этом плотность возрастает от 5 Ю до 5 10 кл/мл. Суспензия для субкультивирования берется в конце экспоненциальной фазы. Увеличение числа клеток, их сырой и сухой массы — основные критерии роста суспензионных культур. [c.94]

Каллусная ткань представляет собой легко доступный материал, который наиболее часто используют для клеточной селекции. Как правило, работу проводят на первичной или пересадочной каллусной ткани, которая не утрачивает способности к регенерации на протяжении ряда субкультивирований. Однако при работе с каллусными культурами многие исследователи отмечают существенные недостатки данного объекта медленный рост ткани, неравноценное для всех клеток действие токсических веществ, которые применяются в качестве селективного фактора, а также потеря регенерационной способности в процессе культивирования каллусных клеток. Несомненно, проводить селекцию целесообразно на уровне одиночных клеток (суспензионная культура, протопласты). Однако для многих видов растений не разработаны эффективные технологии и способы культивирования одиночных клеток. Поэтому, несмотря на перечисленные выше недостатки использования каллусных культур, этот способ селекции остается для некоторых видов растений пока единственным. [c.143]

КОЛЬЦО диаметром 25—30 мм, слегка смазанное вакуумной смазкой. Затем на центральную часть мембранного фильтра наносят несколько капель разведенной пробы и инкубируют чашку в анаэростате при 37 С в течение 1—2 нед. Трепонемы достаточно малы они способны мигрировать через поры фильтра и проникать в расположенный под ним агар, где вызывают помутнение. Кольцо и мембранный фильтр снимают с поверхности агара, с помощью пастеровской пипетки удаляют поверхностный слой агара в области помутнения и микро-скопируют его в темном поле для выявления трепонем и контаминирующих форм. Методы субкультивирования и очистки культуры описаны в разд. 8.1.11. Подавлению роста сопутствующих бактерий часто способствует добавление в агаровую среду полимиксина В (800 ед./мл) и налидиксовой кислоты (800 ед./мл). [c.288]

Использование полужидкой среды позволяет также осуществлять селекцию мутантов, не способных к хемотаксису [2, 18]. В случае положительного хемотаксиса эти мутанты (а также неподвижные мутанты) не реагируют на сформированный клетками градиент субстрата и остаются в центре чашки Петри, откуда их можно извлечь для субкультивирования и очистки. В случае отрицательного хемотаксиса мутанты, не способные к хемотаксису, можно выделить из прозрачной зоны, окружающей кусочек твердого агара. [c.372]

Частоту пересевов (субкультивирования) определяют экспериментальным путем. Субкультивирование следует проводить как можно реже во избежание селекции вариантов. На случай потери культуры желательно сохранять дубликаты пробирок с ней. После каждого пересева культуру проверяют на чистоту и периодически проводят сокращенную проверку для выявления каких-либо изменений в фенотипических свойствах бактерий. В пересеваемых культурах не следует выделять единичные колонии, поскольку при этом повышается вероятность селекции мутантов. [c.514]

Этому методу присущи такие же недостатки, как и обычному субкультивированию (разд. 12.1.1). Кроме того, следует помнить о возможном загрязнении масла. [c.515]

Цикл выращивания — период от помещения инокулюма или трансплантата в свежую среду до последующего субкультивирования. [c.9]

Штамм — культура, возникшая после первого субкультивирования. Состоит из многих клеточных линий, возникших из клеток, присутствующих в первичной культуре. [c.9]

В процессе субкультивирования формируется штамм, характеризующийся индивидуальными генетическими и физиологическими особенностями. [c.17]

Несмотря на возможность длительного субкультивирования ассоциации на среде без связанного азота и наличие повышенных, по сравнению с чистыми культурами, значений НГА у бактерий, вклад бактериальной азотфиксации в обеспечение роста растительных клеток в данной системе не доказан. В ассоциации не было прироста биомассы, превышающего прирост биомассы в контроле (монокультура сахарного тростника на среде без связанного азота способна к медленному росту). [c.65]

Суспензия клеток моркови (через 10 дней после субкультивирования). [c.165]

Мышиные MTV делятся на три общие группы 1-я высоко или умеренно онкогенные вирусы, которые могут передаваться от матери к дочери с молоком и индуцировать карциномы молочной железы в раннем возрасте 2-я — низко онкогенные вирусы, которые обычно передаются яйцом или спермой и индуцируют карциномы молочной железы в позднем возрасте 3-я — непродуцирующие вирусы, передающиеся как вирусы 2-й группы. В опухолях не отмечается продукция вирионов, однако открытые вирионы могут быть индуцированы субкультивированием или радиацией. [c.207]

Микрокультивирование — in vitro клональное культивирование растений из почечных верхушек или узловатых эксплантов, обычно. с ускоренной пролиферацией почек в течение субкультивирования. [c.496]

Маловероятно, чтобы какой бы то ни было промышленный процесс выщелачивания имел дело с чистой культурой. Богатые культуры выделяют из того же месторождения, что и минералы, которые должны быть ими переработаны, или из минералов близкого состава, которые могут служить источником такой культуры. Внимание должно быть обращено на толерантность культуры к металлам, выделяющимся из минералов в результате выщелачивания, и ее способность окислять как серу, так и железо. Т. ferrooxidans может переносить железо в концентрации 40, медь — 70, цинк—119 и никель — 70 г/л [427—429] с помощью непрерывного субкультивирования можно получить штаммы, адаптированные к разным металлам — кобальту, урану, хрому и мышьяку. Толерантность к ртути и селену гораздо ниже. Таким образом, наличие этих и других ингибирующих металлов может влиять на результаты выщелачивания. [c.212]

II э т а п — собственно микроразмножение. На этом этапе необходимо добиться получения максимального количества мериклонов, учитывая при этом, что с увеличением субкультивирований увеличивается число растений-регенерантов с ненормальной морфологией и возможно образование растений-мутантов. Как и на первом этапе, используют питательную среду по рецепту Мурасига и Скуга, содержащую различные биологически активные вещества, а также регуляторы роста. Основную роль при подборе оптимальных условий культивирования эксплантов играют соотношение и концентрация внесенных в питательную среду цитокининов и ауксинов. Из цитокининов наиболее часто используют БАП в концентрациях от I до 10 мг/л, а из ауксинов — ИУК и НУК в концентрациях до 0,5 мг/л. При долгом культивировании растительных тканей на питательных средах с повышенным содержанием цитокининов (5—10 мг/л) происходит постепенное накопление их в тканях выше необходимого физиологического уровня, что приводит к появлению токсического действия и формированию растений с измененной морфологией. Вместе с тем возможно наблюдать такие нежелательные для клонального микроразмножения эффекты, как подавление пролиферации пазушных меристем, образование витрифицированных (оводненных) побегов и уменьшение способности растений к укоренению. Отрицательное действие цитокининов возможно преодолеть, по данным Н.В. Катавой и Р.Г. Бутенко, используя питательные среды с минимальной концентрацией цитокининов, обеспечивающих стабильный коэффициент микроразмножения, или чередованием циклов культивирования на средах с низким и высоким уровнем фитогормонов. [c.119]

Клетки большинства культур, включая первичные, размножаются в форме монослоя, прикрепившись к стеклу или пласти- <овому субстрату. Некоторые культуры, главным образом трансформированные клетки, кроветворные клетки и асцитные опухоли, могут размножаться в суспензии. Этим обеспечивается простота размножения (субкультивирование требует только разведения без трипсинизации), отсутствие необходимости увеличения плошади поверхности роста наряду с возрастанием объема, простота сбора клеток и возможности получения в случае необходимости равновесной культуры (см. гл. 3). [c.17]

Получение стабильно устойчивых линий — процесс длительный. Как правило, селекция начинается с получения достаточного количества каллусной массы из изолированных растительных эксплантов, использующейся в дальнейшем для определения концентрации селективного фактора (построение дозовой кривой), при которой наблюдается одновременно рост каллусной ткани, и в то же время часть каллусных колоний погибает. Выбранная концентрация селективного фактора признается оптимальной и используется в дальнейших экспериментах. Так как первично полученные на средах с селективными факторами колонии клеток могли возникнуть вследствие физиологической адаптации или определенного состояния дифференцировки клеток и не быть генетически устойчивыми, то в течение последующих А—6 субкультивирований на селективной среде проверяется стабильность устойчивости полученных клонов. Затем их переносят на среду без селективного фактора и субкультивируют еще 2—3 пассажа. И только после повторного возвращения в селективные условия отбирают стабильные клоны, из которых пытаются получить рас-тения-регенеранты. Однако работы, проведенные с получением растений, устойчивых к повышенным солям, а также к токсинам, выделенным из грибов — возбудителей болезней, показали, что устойчивость клетки и растения к исследуемому селективному фактору может совпадать и не совпадать. Прямая корреляция между устойчивостью растений и клеток in vitro отмечена лишь для низких температур, устойчивостью к гербицидам, высоким концентрациям алюминия и другим факторам. [c.143]

Субкультивированне — перенос трансплантов (инокулюма) в другой культуральный сосуд на свежую питательную среду. [c.467]

Первичными клетками называются клетки, полученные от животного и поддерживаемые в культуре вплоть до субкультивирования. Эта глава посвящена описанию методов получения клеток от животных. Что касается человека, то задача получения первичных клеток осложняется необходимостью свести к минимуму наносимый донорам вред. В связи с этим, как правило, используются два типа клеток лимфоциты и фибробла- сты кожи. Лимфоциты (обычно неделящиеся клетки) требуют митогенной стимуляции, для чего используются ФГА или другие растительные лектины. Стимулированные лимфоциты претерпевают несколько делений, после чего гибнут. Фибробласты кожи также имеют ограниченный, хотя и более продолжительный период жизни в культуре (Hayfli k, 1965а), но их редко удается получить в таком же количестве, как лимфоциты. [c.60]

Субкультивирование — перенос клеток в другой культуральный сосуд на свежую пиJaтeльнyю среду. [c.9]

Фильтрование рекомендуется и в нескольких последующих субкультивированиях до приобретения клеточной суспензией желательных характеристик. Однако агрегированность суспензии зависит не только от характеристик начальной линии, но и от условий культивирования. На рис. 6 показано влияние условий перемешивания на состав и соотношение различных по агрегированности единиц, составляющих суспензионную культуру женьшеня и мака. [c.23]

Способность к формированию побегов в смешанных культурах сохранялась в течение длительного их субкультивирования (на протяжениии 10—11 пассажей). Более того, из регенерантов первого поколения, ассоциированных с азотфиксирующими цианобактериями, получен вторичный каллус, а из него — регене- [c.79]

Таким образом, в изложенных здесь экспериментах было продемонстрировано получение искусственных ассоциаций культивируемых тканей и растений-регенерантов с цианобактериями. Удалось получить ассоциации цианобактерий с каллусом и побе-гами-регенерантами, происходящими из изолированных протопластов. В ассоциациях с азотфиксирующими цианобактериями культивируемые ткани и растения имеют преимущества в росте в условиях дефицита или отсутствия связанного азота по сравнению с неинокулированными культурами и растениями, что обусловлено фиксацией азота цианобионтом. Показана высокая стабильность полученных клеточных систем при их субкультивировании и сохранение ассоциативных взаимодействий в ряду переходов каллус — побег. [c.88]

Обычно принималось, что клеточные культуры поддерживались в виде монослоя или суспензий, варьирующих по их ростовым свойствам in vitro, и что клетки со способностью расти в суспензии как агрегаты могут обладать более высокой онкогенной потенцией. Для клеток, растущих монослоем или в суспензии как и для клеток с их комбинированным ростом, можно подобрать условия культивирования. Методы и схемы субкультивирования и выбор среды, в которой клетки будут расти, крайне важны. Некоторые предназначены для роста клеток в суспензии. Культуральные среды, используемые для размнояшния клеток в монослое, высоко вариабельны, и специфический выбор особенной среды редко проводится исследователями. Например, обоснованно ли сравнивать свойства клеток, растущих в минимальной среде Игла, свободной от антибиотиков, но содержащей 10 % эмбриональной телячьей сыворотки, с клетками, растущими в среде Ham (F-10), содержащей 5 % телячьей сыворотки, 1 % лошадиной сыворотки, 10 % триптозофосфатного бульона, 1 % экстракта куриных эмбрионов и антибиотики. [c.192]

Свежевыделенные культуры носят название первичных культур до начала пассирования или субкультивирования. Клетки первичной культуры обычно гетерогенны и характеризуются малым пролиферативным пулом, но в них наиболее полно представлены типы клеток той ткани, откуда они были получены, а также четко обнаруживается экспрессия ряда свойств, присущих данной ткани. Субкультивирование обеспечивает возможность продления существования культуры (в результате субкультивирования получаются линии клеток), возможность клонирования (см. гл. 4 и 8), исследования и сохранения клеток (гл. 4), а также получения более однородных популяций. При этом во многих случаях субкультивирование приводит к потере специализированных клеток и дифференцировочных признаков, если не принимаются меры для отбора специализированных линий, и сохранения или реиндукции дифференцировочных свойств (см. ниже). [c.16]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология