Динитрофенильная группа антитела к ней

И второй эксперимент. Обычный гамма-глобулин из сыворотки кролика можно перестроить в пробирке в антитела, специфичные, скажем, к человеческому сывороточному альбумину с динитрофенильным остатком (ДНФ) в качестве дополнительной группы. Для этого достаточно только заранее немного (неполностью) развернуть молекулу гамма-глобулина и предоставить идти процессу свертывания в присутствии ДНФ-альбумина. Конечно, большая часть молекул приобретет исходную форму, однако 0,5% молекул станут все-таки после этого специфичными к ДНФ-альбумину. Может показаться, что это совсем мало, однако, в сущности, именно этого и следовало ожидать, так как, очевидно, всегда лишь немногие антигены будут встречаться с частично развернутым глобулином в нужном месте и в нужное время. [c.346]

Наиболее характерно эффект иммунодоминантной группы выявляется при модификации отдельных аминокислотных остатков химическими соединениями, например динитрофенильной группой. Антитела, образующиеся в такой модифицированной антигенной детерминанте, способны реагировать не только с ней, но и с другими аминокислотными остатками, к которым будет пришита динитрофенильная группа. Более того, если в раствор, содержащий модифицированный белок и антитела, добавить свободный динитрофенол, то он будет ингибировать образование комплекса антиген — антитело. Это явление, которое впервые былГо описано и детально изучено К. Ландштейнером, послужило основой для получения антител против различных гаптенов. [c.13]

Участие различных видов сил взаимодействия подтверждает и изучение химического строения активного центра антигаптенных антител. Так, связывание отрицательно заряженного гаотена 3-нитро-4-окси-5-йодофенил-ацетата происходит за счет включения в комбинационный участок антитела положительно заряженного аргинина [102], а связывание гидрофобной динитрофенильной группы — за счет гидрофобного тирозина [139]. Более [c.47]

Межмолекулярные взаимодействия зарял енных и полярных и некоторых нейтральных молекул в растворах, как правило, обеспечиваются электростатическими силами, водородной связью или переносом заряда. Однако-в водном растворе эти типы взаимодействий малоэффективны (гл. 6, 7 и 9) ввиду высокой сольватирующей способности молекул воды, прочности образуемых ими водородных связей и слабости обычных взаимодействий с переносом заряда в основном состоянии. Чтобы объяснить большие энергии связывания, обнаруживаемые для фермент-субстратного взаимодействия, и связывания малых молекул с белками часто необходимо учитывать еще один тип взаимодействия, который за неимением точного термина условно назовем гидрофобной связью . Гидрофобные силы , вероятно, являются наиболее важным фактором, обеспечивающим нековалентное межмолекулярное взаимодействие в водном растворе. Свободные энергии связывания субстратов и ингибиторов с активными центрами ферментов часто равны примерно —10 ккал/моль (—42-10 Дж/моль) и менее, причем лишь небольшую долю-этой величины можно отнести за счет других типов взаимодействия. Сила и специфичность связывания малых молекул белками видны особенно четко при взаимодействии гаптенов с антителами, движущей силой которого обычно является гидрофобное взаимодействие. Свободная энергия связывания е-дини-трофениллизина специфическим для него антителом, которая почти полностью обусловлена взаимодействием с динитрофенильной группой, приблизительно равна —12 ккал/моль (—50-10 Дж/моль), а энергии связывания малых слабополярных гаптенов обычно лежат в интервале от —5 до —10 ккал/моль (от —21 до —42-10 Диг/моль) [1, 2]. [c.303]

Вероятно, комплексы с переносом заряда (КПЗ) играют весьма ограниченную роль в катализе и во взаимодействиях биологически важных макромолекул, хотя в ряде случаев было показано существование таких комплексов. Связывание 2,4-динитротолуола с антителами на динитрофенильную группу приводит к уменьшению коэффициента экстинкции в полосе поглощения динитротолуола и появлению новой полосы поглощения динитротолуола при 300 нм, которая указывает на образование КПЗ [2]. КПЗ с участиел пиридиновых и флавиновых групп, являющихся активными центрами коферментов, участвующих в биологических окислительно-восстановительных процессах, существуют, как было показано, в довольно специфических условиях и могут принимать участие в окислительно-восстановительных реакциях [c.332]

Гипервариабельные участки для каждого антитела, продуцируемого индивидуальной особью данного биологического вида и даже отдельными лимфоидными клетками данного индивидуума, уникальны по своему строению и отличаются от аналогичных участков антитела другой специфичности и даже от антитела той же специфичности, но синтезируемого другой лимфоидной клеткой. Таким образом, даже к такому простому химическому соединению, как например, динитрофенильная группа или арсани-ловая кислота, существует большой набор вариабельных генов (К-генов), кодирующих целый спектр антител, каждое из которых будет иметь характерные для него особенности первичной структуры гипервариабельных участков. [c.47]

Рис. 24 схематически иллюстрирует механизм метки по сродству на примере азопроизводного динитрофенильной группы. К настоящему времени синтезировано большое число различных реакционноспособных производных гаптенов, избирательно реагирующих с разными аминокислотными остатками. В ходе реакции образуются устойчивые ковалентные связи, поэтому, разделив полипептидные цепи и фрагментировав их, можно точно локализовать меченый аминокислотный остаток. Таким способом удалось установить, что оба вариабельных домена (от легкой и тяжелой цепей) участвуют своими аминокислотными остатками в формировании полости активного центра и что полость центра выстилают отрезки цепей, соответствующие гипервариабельным участкам. Данные, накопленные с помощью метода метки по сродству , были дополнены результатами, полученными методами дифференциальной спектрофотометрии и электроннопарамагнитного резонанса (см. гл. 12), а также химической модификации определенных аминокислотных остатков в молекуле антитгла. Для ряда гаптенов гидрофобного характера. (например, нитрофениль-ные производные) было доказано присутствие в активном центре антитела остатка триптофана, продемонстрирован гидрофобный характер полости антидетерминанты. Для других гаптенов установлена локализация остатков гистидина, лизина, тирозина и точно определено их местоположение в каждой цепи. [c.93]

Рис. 24. Метод метки по сродству . А — изображение активного центра (ан1иде-терминанты) антитела к динитрофенильной группе и места фиксации азопроизводного динитрофенильной группы на остатке тирозина в активном центре Б — локализация некоторых гаптенов в легкой и тяжелой цепях соответствующих антител при использовании для мечения азопроизводных гаптенов

Константа равновесия связана со стандартной свободной энергией уравнением ДР° = —RTlnK, где R — газовая постоянная, Т — абсолютная температура. На основании этого уравнения были найдены значения AF° для единичной связи гаптен-антитело в самых различных системах. Как показано ниже, величины ЛР для различающихся по своему строению гаптенов и соответствующих антител незначительно отличаются друг от друга (были использованы антитела кролика против динитрофенильной группы). Они не превышают —37,8 Дж/моль и Be b.N а невелики по сравнению с величинами [c.105]

Рис. 54. Гель-фильтрация антител против динитрофенильной группы на колонке с сефадексом 0-25, уравновешенным буферным раствором, содержащим динитрофеннллизин

Меченные иминоксильными радикалами гаптены нашли применение в изучении размера полости активного центра антитела (Л. Н51а, Е. Р1е11е, 1969). Готовили производные гаптена (например, динитрофенильного), отличающиеся между собой длиной алифатической цепи, к одному концу которой присоединяли динитрофенильную группу, а к другому — иминоксильную группу. Длина соединяющей две группировки ножки варьировала от [c.250]

Обработкой с помощью меченых Fab-фрагметоз антидинитрофенильных антител 30S субчастиц, которы реконструированы в присутствии белка S12, содержащего динитрофенильную группу. Радиоактивность была обнаружена в пике 30S субчастиц. [c.265]

Исходя из того, что имидазол действует в качестве нуклеофильного катализатора при гидролизе карбоксиэфиров в водных растворах, предполагали, что введение остатка гистидина в центр связывания динитрофенильных лигандов иммуноглобулина может придать ему способность осуществлять гидролиз сложных эфиров динитрофенола. В качестве исходного белка при конструировании абзима использовали Vl- и VH-фрагменты тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина, специфически взаимодействующего с динитрофенильными группами антигенов. Фрагмент ДНК, кодирующий VL-область легкой цепи, синтезировали in vitro и экспрессировали в клетках Е. соИ. При этом в процессе синтеза кодон, кодирующий Туг-34, был изменен на кодон His, так как было известно, что именно Туг-34 контактирует с молекулами динитрофенола в комплексах антиген-антитело. Очищенный рекомбинантный VL-фрагмент объединяли с VH-фрагментом тяжелой цепи природного иммуноглобулина, взаимодействующего с динитрофенолом, что приводило к образованию Fv-фрагмента. [c.431]

ГИИ стали проводить с динитрофенильными соединениями. ДНХБ и его аналоги использовали для эпикутанной сенсибилизации, а комплексные антигены, состоящие из протеина, пептида или аминокислоты с ДНФ-группой, вводили в подушечки лапок морских свинок с адъювантом Фрейнда [147]. Эти исследования представляют большую ценность для изучения аллергии к химическим веществам в целом, так как именно на модели сенсибилизации к ДНФ-группам была начата разработка таких важных вопросов, как изучение первичных механизмов контактной аллергии, роли гаптена и носителя в индукции и подавлении аллергических реакций, механизма образования комплексных антигенов, толерантности к химическим веществам, иммунологической характеристики антигаптенных антител, морфологии кожных реакций замедленного типа, генетического контроля иммунного ответа и т.д. Динитрофенильные антигены широко используются в теоретических иммунологических исследованиях и в настоящее время наряду с искусственными полимерными антигенами из аминокислотных остатков. [c.90]

Перенесенные на нитроцеллюлозные пластинки белки обрабатывают 2,4-ди-нитрофторобензолом. Образующиеся производные белка могут быть обнаружены в количестве 10 нг при обработке антителами к динитрофенильным. (ДНФ) группам с помощью пероксидаза-антипероксидазного комплекса. Метод в 100 раз более чувствителен, чем окрашивание кумасси, и в то же время лишен осложнений, возникающих при использовании комплекса сереб])а. [c.312]

Одна из наиболее изученных в кинетическом отношении систем это система с антителами против динитро-фенильнои группы. Многочисленные измерения с использованием очищенных адтител или миеломного мышиного иммуноглобулина 315 с динитрофенильной активностью дали величину прямой реакции порядка 10 —10 М с , а обратной — от 1 до 50 с Рассчитанная на основе этих данных Кп оказалась порядка —10 М [c.105]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология