Пероксидаза антитела против нее

Клетки отмывают от антител PBS и инкубируют 3 ч при комнатной температуре со вторыми, обычно конъюгированными с пероксидазой хрена антителами против первых антител (например, против кроличьих или мышиных иммуноглобулинов). [c.290]

В основу метода положена наиболее распространенная схема определения антител, включающая адсорбцию вируса гриппа в лунках-полистирольных планшетов, последовательную инкубацию иммобилизованного вируса с исследуемой сывороткой крови (или другим препаратом, содержащим антитела) и с меченными пероксидазой антителами против иммуноглобулинов человека и определение активности фермента в образовавшемся специфическом комплексе на носителе, [c.267]

Морфий Антитела против морфия, глюкозооксидаза, 4-хлор-1-нафтол, фосфат натрия, альбумин, коньюгат пероксидазы с морфием, глюкоза А 1,16 0,005 (0,005) Кровь, моча [c.238]

В качестве примера приведем схему определения кроличьих антител против какого-либо антигена ПАП-методом. К иммобилизованному антигену добавляют исследуемую пробу. После инкубации и отмывки несвязавшихся компонентов к носителю добавляют антивидовые антитела (например, сыворотку крови осла, иммунизированного IgG кролика). Проводят повторную инкубацию, отмывку и вводят в систему антитела кролика против пероксидазы. Смесь инкубируют, носитель отмывают и на последней стадии добавляют пероксидазу, образующую специфический комплекс с соответствующими антителами, который выявляют обычными методами. Одним из вариантов схемы является добавление на стадии 5) не антител против пероксидазы, а заранее приготовленного ПАП-комп-лекса. Схема метода [c.103]

В табл. 8.1 приведены количества иммобилизованных антител против IgG человека, определенные методом титрования иммуносорбентов конъюгатом IgG—пероксидаза. Иммуносорбенты получены с использованием носителей и методов иммобилизации, ши- [c.218]

КОНЬЮГАТЫ ПЕРОКСИДАЗЫ С АНТИТЕЛАМИ ПРОТИВ IgG [c.123]

Концентрацию антител против пероксидазы подбирают так, чтобы интенсивность окраски полоски сравнения соответствовала интенсивности окраски индикаторной полоски при концентрации определяемого вещества на уровне предела обнаружения. Результаты анализа определяют по отношению интенсивности окраски индикатора (I) к интенсивности окраски полоски сравнения (Н). Если индикаторная полоска окрашена интенсивнее, чем полоска сравнения (1/К>1,0), пробу считают отрицательной, в противном случае (1/Н 1,0) ее считают положи-, тельной. [c.137]

На рис. 10-5 показана зависимость интенсивности окраски индикаторной полоски, содержащей антитела против морфия, и полоски сравнения, содержащей антитела против пероксидазы, от концентрации морфия в образце. Интенсивность окраски индикаторной полоски обратно пропорциональна концентрации определяемого вещества в интервале от 5 до 1000 нг/мл. Предел обнаружения равен 5 —10 нг/мл, а при концентрации —70 нг/мл модуляция иммуноспецифического сигнала составляет 50% от максимальной. Как и ожидалось, интенсивность окраски полоски сравнения в исследованном интервале не зависит от концентрации морфия. Откладывая на графике отношение интенсивностей окраски индикатора и полоски сравнения, можно построить совершенно равноценную калибровочную кривую. Легко также заметить, что предел обнаружения, определяемый как концентрация вещества, при которой интенсивности окраски индикатора и полоски сравнения одинаковы, можно регулировать, увеличивая или уменьшая интенсивность окраски полоски сравнения. Таким образом можно изготовить индикаторные полоски [c.139]

Влияние времени проявления на интенсивность окраски индикатора, содержащего антитела против морфия, и полоски сравнения, содержащей антитела против пероксидазы, изучали при анализе положительных (20 мкг/мл) и отрицательных об- [c.140]

Введение ферментной метки через комплекс со специфическими антителами против фермента наиболее часто применяется при использовании в качестве метки пероксидазы хрена. Этот анализ встречается в литературе под названием ПАП-метода (ПАП—пероксидаза—антипероксидаза). [c.103]

Рис. 19. Связывание конъюгата инсулин — пероксидаза (Инс — ПХ) с ад- , сорбированными на полистирольном ен фермент, ТО важным эта-планшете антителами против инсулина, выделенными из разных сывороток по оси ординат — оптическая плотность А при 490 нм продукта пероксндазной реакции окисления о-феннленднамнна перекисью водорода.

Ротавирусный антиген, специфические антитела против ротавируса (АТ), конъюгат специфических антител с пероксидазой Ат-ПХ), антивидовые антитела против иммуноглобулинов быка, меченные пероксидазой (АтрПХ), положительные и отрицательные стандарты для выявления ротавируса и специфических антител, компоненты для приготовления субстратов на основе 5-АС (см. 1 этой главы), полистирольные планшеты, микропнпеткн, спектрофотометр. [c.273]

Антитела против тестостерона конъюгат тестостерона с соевым ингибитором трипсина (ТС-СИТ) меченные пероксидазой антивн-довые антитела стандартные растворы с известной концентрацией ТС реагенты для приготовления субстратной смеси на основе о-фенилендиамина полнсти-рольные планшеты для ИФА автоматические пипетки спектрофотометр, [c.281]

В ферментативной иммунохроматографии также используются конъюгат фермента с определяемым веществом и специфические антитела против последнего. Однако в отличие от EMIT здесь определение не связано с изменением активности конъюгата в комплексе с антителом. Принцип метода ферментативной иммунохроматографии представлен на рис. 6.4. Определенный объем пробы смешивают с раствором, содержащим конъюгат фермент -гаптен и соответствующий ферментный реагент. В рассматриваемом примере сопряженным ферментом является пероксидаза из корней хрена, а ферментным реагентом - глюкозооксидаза. Глюко- [c.84]

IgG человека определяли с помощыо фторид-селективного электрода после перерастворения осадка иммунного комплекса, образующегося при взаимодействии IgG человека с антителами против IgG, меченными пероксидазой [20 ]. Активность ферментной метки измеряли путем определения фторидного иона, образующегося в результате катализируемой пероксидазой реакции окисления п-фторанилина под действием пероксида водорода. [c.211]

I. Срезы обрабатывают в растворе, содержащем антитела против изучаемого гормона антитела связываются с гормоном. II. Срез инкубируют с раствором, содержащим меченные пероксидазой антитела к антителам (у>глобулину). III. Срез инкубируют с субстратом—3,3 -днаминобеизидином, в результате образуется коричневый осадок в местах нахождения гормона. [c.305]

В модельной системе ИФАМ, предложенной для измерения. ДНФ-лизина, в качестве модулятора фермента используют антитела против пероксидазы, а в качестве индикаторного фер- [c.62]

Рис. 4-3. Ингибирование пероксидазы хрена антителами против пероксидазы, меченными ДНФ (ДНФ—Атпх). Публикуется с разрешения издательства (Ngo, Lenhoff, 1980).

Определение морфия. Индикаторную полоску, содержащую антитела против морфия (10 мкг/см ) и глюкозооксидазу (4 мМЕ/см ), погружают в 2 мл образца (буферного раствора или мочи) и инкубируют 1 мин. Переносят полоску в 2 мл проявителя (содержащего в 1 л 0,1 моль фосфата натрия 0,2 моль хлорида натрия 2 г бычьего сывороточного альбумина, 300 мг 4-хлорнафтола 50 ммоль глюкозы 0,25 г тритона QS-44 300 мг конъюгата пероксидазы с морфием), встряхивают 3—5 с и выдерживают 1() мин. Вынимают полоску, промокают ее для удаления остатков жидкости и измеряют интенсивность окраски с помощью отражательного спектрофотометра марки Ma beth . Следует отметить, что анализ по существу не зависит от объема образца или проявителя важно только, чтобы они полностью покрывали поверхность полоски. Все стадии анализа проводят при комнатной температуре. [c.134]

Описан новый гомогенный флуоресцентный метод иммуноанализа, построенный по бесконкурентному принципу с использованием одноточечной системы детектирования и автоматической проточно-инжекционной системы. Пероксидаза хрена, конъюгированная с антителами против IgG человека, катализирует окисление ЛДАДХФ (лейкодиацетилдихлорфлуоресцеи- [c.169]

Ферментативный иммунохроматографический метод. Добавляют 10—20 мкг образца (буферного раствора, сыворотки или цельной крови) к 1 мл ферментного реагента (приготовленного на 0,1 М натрий-фосфатном буфере, pH 7,0 и содержащего 0,2 моль хлорида натрия 0,2—1,0 мг конъюгата [теофиллин — пероксидаза] 100 мг глюкозооксидазы 2 г неиммунных IgG барана). В полученную смесь погружают край индикаторной полоски (4x90 мм), содержащей иммобилизованные антитела против теофиллина ( 30 мкг/см ),и дают растворителю подняться за счет капиллярных сил до противоположного края полоски (на это уходит 10 мин). Переносят полоску в проявитель (приготовленный на 0,01 М натрий-фосфатном буфере, pH 7,0, и содержащий в 1 л 0,02 моль хлорида натрия 0,5 г тритона QS-44 400 мг 4-хлорнафтола 0,05 моль глюкозы 2 г бычьего сывороточного альбумина). Через 5 мин на бумаге появляется голубая окрашенная область в форме ровной полосы или ракеты. Высота окрашенной области пропорциональна концентрации определяемого вещества. Для количественного анализа предварительно строят калибровочную кривую, отражающую зависимость высоты окрашенного фронта от концентрации теофиллина. [c.135]

Как показано на рис. 10-2, активную поверхность индикаторной полоски образуют антитела против морфия, иммобилизованные совместное глюкозооксидазой на подложке из целлюлозы. На первой стадии анализа полоску погружают в жидкий образец. Центры связывания на антителах заполняются молекулами антигена, причем степень заполнения пропорциональна его концентрации. Затем полоску переносят в проявляющий раствор, содержащий конъюгат [пероксидаза—морфий], глюкозу и хромогенный субстрат пероксидазы (4-хлорнафтол).При инкубации с проявителем конъюгат связывается с вакантными центрами на иммобилизованных антителах и катализирует окисление 4-хлорнафтола пероксидом водорода, генерируемым иммобилизованной глюкозооксидазой, с образованием нерастворимого голубого продукта, который остается на поверхности полоски. Через 10 мин визуально или с помощью отражательного спектрофотометра определяют интенсивность окраски. [c.136]

Многие свойства ферментных меток исключительно ценны для иммуноанализа в лабораторных условиях, однако нелабораторные методы предъявляют более жесткие требования. Ферментам присущи ограниченная термостабильность, зависимость катализа от времени и температуры, чувствительность к помехам со стороны образца. В лабораторных методах для преодоления этих недостатков применяют ячейки с регулируемой температурой, точно измеряют время и предварительно обрабатывают образцы. Чтобы упростить использование индикаторных полосок, мы создали систему внутреннего стандарта, в которой компенсируются изменения каталитической активности. Эта система, состоящая из совместно иммобилизованных глюкозооксидазы и антител против пероксидазы, отличается от индикаторной полоски для определения морфия только специфичностьк антител. Поэтому можно ожидать, что цветные реакции на обеих поверхностях в одинаковой степени зависят от температуры активности фермента и от помех со стороны образца. [c.137]

Вирусы картофеля (X, V, М, 5) специфические ан-итела против вирусов конъюгат специфических антител с пероксидазой поло- нтельиый и отрицательный стандарты субстратная смесь для определения ероксидазной активности на основе 5-АС см. 1 данной главы) полисти-эльиые планшеты автоматические пипетки спектрофотометр. [c.276]

Рис. 10-5. Калибровочная кривая для определения морфия. Нормальные образцы мочи объединяли, добавляли к ним морфий в указанных концентрациях и анализировали, как описано в разделе Материалы и методы . Представлены интенсивности окраски индикаторных полосок, содержащих антитела против морфия (светлые кружки), и полосок сравнения, содержащих антитела против пероксидазы (темные кружки), а также отношение I/R (темные треугольники). Публикуется с разрешения издательства (Litman et ai., 1983).

Пероксидаза хрена и специфические антитела против нее (Ан-тиПХ) широко используются в иммуноферментном анализе [Им-муноферментный. .., 1988 Ким, 1989] и иммуноцитохимии [По-лак, Ван Норден, 1987]. Способов использования пероксидазных реакций в аналитических целях в настоящее время накопилось очень много. Однако особый интерес вызывают способы анализа [c.50]

Были сделаны попытки установить местоположение фитохрома в клетке. Наиболее прямой подход состоит в использоваиии иммуиоцитохимйческих методик. Для этого сначала получают кроличьи антитела против чистого фитохрома и обрабатывают ими срезы растительных тканей. Молекулы кроличьих антител взаимодействуют с молекулами фитохрома, находящегося в клетке. Затем срез обрабатывают бараньей антисывороткой к кроличьим антителам, что приводит к образованию кроличьего аитипероксидазио-пероксидазного комплекса, так что каждая молекула фитохрома метится ферментом пероксидазой, локализацию которого можно определить гистохимическими методами (рис. 8.7). Таким путем было установлено, что фитохром в форме Рк не имеет строгой локализации в клетке и может находиться в митохондриях и пластидах, а также в цитоплазме, ио не в ядрах или вакуолях. Одиако, перейдя в форму Р дк в [c.307]

Смотреть страницы где упоминается термин Пероксидаза антитела против нее: [c.201] [c.268] [c.270] [c.85] [c.173] [c.202] [c.211] [c.465] [c.54] [c.60] [c.62] [c.63] [c.118] [c.119] [c.119] [c.145] [c.380] [c.380] [c.233] [c.47] [c.302] [c.318] [c.275]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология