Модификации в клетках дрожжей

Эта методика особенно удобна при изучении диффузии с ограничениями, когда небольшая модификация соотношения (7.3) позволяет определить не только 3>, яо я получить информацию о размерах области, ограниченной стенками или барьерами, в которой происходит движение молекул [81]. Так, при исследовании дрожжей [81] было найдено, что коэффициент самодиффузии воды в клетках составляет величину 3x2-10" см -с , а диаметр клетки а — около 4,1-10 см. Были проведены также измерения образцов яблок, сердцевины табачных стеблей и других аналогичных систем [81]. [c.153]

Генетически модифицированные дрожжи. Развитие генетики и молекулярной биологии дрожжей позволило приспособить многие штаммы дрожжей к потребно-стям пивоваров, что, в свою очередь, привело к упрощению процесса пивоварения. На предмет возможной модификации были изучены все важнейшие виды пивоваренных дрожжей, и созданы довольно интересные штаммы (их обзор см. в [46]). В некоторых работах [27,36,93, 95, 124] описана перенос в дрожжах так называемого гена-киллера , который представляет собой природный дрожжевой токсин, убивающий нестойкие дрожжевые клетки. Перенос этого гена в пивоваренные дрожжи помогает предотвратить их контаминацию дикими дрожжами при брожении. Некоторые из полученных дрожжевых штаммов с таким геном по характеру брожения и вкусовым качествам конечного пива дают такие же результаты, как и исходные немодифицированные штаммы. [c.70]

Один из ключевых регуляторных белков, синтезируемых локу-сом, ответственным за тип спаривания у дрожжей, это белок-репрессор, обозначаемый аз (см. МБК, рис. 10-29). В гаплоидных клетках, относящихся к а-типу спаривания, белок й2 выключает гены, специфические для типа спаривания а. В диплоидных клетках типа а/а репрессор й2 действует совместно с продуктом гена а , так чтобы в дополнение к а-специфическим генам выключить набор гаплоид-специфических генов. Двум наборам контролируемых генов в последовательности ДНК предшествуют, как было обнаружено, два разных, но родственных между собой типа консервативных последовательностей ДНК одна из этих последовательностей расположена перед а-специфическими генами, а другая-перед генами, специфическими для гаплоидных клеток. Поскольку эти последовательности сходны, то репрессор й2 скорее всего связывается с ними обеими, однако его свойства должны каким-то образом измениться под действием белка до того, как произойдет узнавание гаплоид-специфической последовательности. Вы хотите понять, за счет чего происходит это изменение. Катализирует ли а1 ковалентную модификацию аг или же а модифицирует й2 за счет стехиометрического взаимодействия с этим белком [c.173]

Эффективность экспрессии белков человека в дрожжевых системах зависит от природы самого продукта известны успешные опыты, есть здесь и не очень рекламируемые неудачи (как, например, i-интерферон, на долю которого приходится менее 0,1% всех белков, образующихся в дрожжевой клетке). Вдобавок существуют белки — например, многие из тех, что участвуют в процессах свертывания крови, — посттрансляцион-ная модификация которых происходит по такому пути, который не может реализоваться в клетках дрожжей (в данном случае это гамма-карбоксилирование остатков глутаминовой кислоты) [7]. [c.210]

Многие биологически активные белки высших эукариот синтезируются в форме предшественников, подвергающихся секреции из клеток. В ряде экспериментов бьшо обнаружено, что если белки такого типа (например, гормон роста быка, активатор тканевого плазминогена человека, у-интерферон человека, прохимозин быка) в процессе синтеза в бактериальной или дрожжевой клетке остаются в цитоплазме, то они переходят в нерастворимую и неактивную форму. Поэтому создание продуцентов, обеспечивающих секрецию и сопутствующую ей модификацию белка, является крайне важной задачей генетической инженерии и биотехнологии. Большое внимание уделяется дрожжам, у которых ряд белков эффективно выводится из клеток в окружающую среду. В отличие от бактерий в клетках дрожжей в процессе секреции может происходить гликозилирование и правильная укладка эукариотических белков. Особо следует отметить, что большинство штаммов S. erevisiae не вьщеляет в культуральную среду протеазы, что в еще большей степени повышает перспективность данной системы для создания высокопродуктивных штаммов, секретирующих в окружающую среду целевые белки. [c.318]

Нередко возникает задача ввести ген в клетки эукариот, например в дрожжевые клетки, в которых могут нарабатываться белки, прошедшие после их образования необходимые стадии модификации, несвойственные прокариотическим клеткам. Для этой цели используют специальные, так называемые челночные, векторы, которые могут автономтю размножаться как в прокариотических, так и в эукариотических клетках, например в Е.соН и дрожжах. В эукариотические клетки плазмиды вводят на заключительных стадиях, поскапьку многие предварительные этапы клонирования существенно проще проводить в кле гках прокариот. [c.304]

Помимо химических средств, гипотермии и гипоксии модификация радиорезистентности производилась с помощью фракционированного облучения в невысоких летальных дозах. На клетках асцитной карциномы было показано, что при увеличении времени между двукратным облучением одновременно с возрастанием радиорезистентности объектов общее содержание эндогенных тиолов увеличивается. Параллельное исследование радиорезистентности и уровня сульфгидрильных групп проводилось также на клетках, находящихся на разных стадиях роста и клеточного цикла. Так, Э. Я. Граевский (1969) привел сравнительные данные из работ по изучению изменения тиолов и радиорезистентности микроспор в процессе клеточного деления. Оказалось, что в процессе мейоза и митоза происходят однонаправленные изменения содержания тиолов в клетках и их устойчивости (устойчивость оценивалась по выходу хромосомных аберраций) к действию ионизирующей радиации. Динамика изменения уровня эндогенных сульфгидрильных групп в зависимости от изменения радиорезистентности прослежена также на синхронно делящейся икре морских ежей в различных стадиях клеточного цикла, на растущих клетках асцитной карциномы Эрлиха в процессе ее старения, на синхронной культуре клеток разных штаммов хлореллы в процессе клеточного деления, на клетках в различных фазах роста. Эти данные позволили авторам заключить, что изменения радиочувствительности в цикле связаны не только с изменением генетического аппарата в клетке, но и с варьированием содержания внутриклеточных тиолов, выполняющих функции эндогенных радиопротекторов. Эти представления получили дополнительное обоснование в работе Ю. В. Корогодиной и др. (1975). Так, на диплоидных дрожжах (штамм Мегри 139 В) было установлено, что клетки, находящиеся в логарифмической фазе роста, в отличие от стационарной фазы более радиорезистентны и содержат в полтора раза больше сульфгидрильных групп. Авторы считают, что именно высокий уровень тиолов почкующихся дрожжевых клеток может определять их повышенную радиорезистентность. [c.283]

Конверсия генов. Еще один относящийся к обсуждаемому предмету феномен давно известен в экспериментальной генетике под названием генной конверсии [122]. Различные данные, полученные при изучении глобиновых генов, позволяют предполагать наличие такого феномена и в геноме человека (разд. 4.3 см. также рис. 2.97). Генная конверсия есть не что иное, как модификация одного из двух аллелей другим, в результате чего гетерозигота Аа, например, становится гомозиготой АА. Винклер, который впервые обсуждал этот феномен более 50 лет тому назад, допускал физиологическое взаимодействие аллелей. Однако работы на дрожжах показали, что он связан с атипичной рекомбинацией. Данный процесс иллюстрирован на рис. 2.97. Кроссинговер всегда приводит к разрыву последовательности ДНК в сайте перекреста. Обычно разрыв репарируется, для чего последовательность сестринской хроматиды используется как матрица. Таким образом восстанавливается исходная двойная спираль. Однако иногда репарация осуществляется на матрице гомологичной хромосомы. В этом случае наблюдаются отклонения от обычной сегрегации. Генная конверсия имеет место и в соматических тканях, особенно у растений. Возможно, что в этом случае рекомбинационный процесс протекает атипично. Наличие генной конверсии не является неожиданным, поскольку спаривание гомологичных хромосом в соматических клетках и соматический кроссинговер характерны для многих видов [c.144]

На устойчивость микроорганизмов к процессам криоконсервирования влияют самые различные факторы возраст клеток, условия их культивирования, плотность клеток в суспензии. Установлено, в частности, что клетки Е. соИ проявляют наибольшую криорезистентность в конце логарифмической или в начале стационарной фазы роста. Культивирование дрожжей и молочнокислых бактерий в средах, содержащих ненасыщенные жирные кислоты, повышает их устойчивость к замораживанию. Эти изменения криорезистентности клеток обычно связывают с модификацией мембранных структур. Что касается плотности клеток, то установленный факт повышения титра жизнеспособных микроорганизмов с увеличением исходной концентрации клеток в суспензии пока не имеет объяснения. [c.73]

У представителя низших эукариот Sa kammy es erevisiae имеется по крайней мере пять генов, кодирующих белки, которые участвуют во внесении разрывов в УФ-облученную ДНК. Нарушение только в одном из этих пяти ЛЛЛ-генов приводит к тому, что клетки утрачивают способность к внесению разрывов в ДНК и, следовательно, к удалению пиримидиновых димеров. У дрожжей существуют также мутанты с нарушенной способностью к удалению сшивок между цепями, хотя элиминация УФ-индуцированных повреждений проходит нормально. Это предполагает, что у дрожжей, как и у человека, для удаления поперечных сшивок, а возможно, и для исправления множества других химических модификаций в ДНК существуют специфические, весьма сложные механизмы репарации. [c.102]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология