Фингерпринты ДНК

Общепризнано, что спектрофотометрия в инфракрасной области спектра представляет собой наилучший метод идентификации вследствие уникальности четко выраженной фингерпринт-ной области спектра для данного лекарственного вещества. [c.12]

Для разделения пуриновых и пиримидиновых оснований, нуклеозидов и нуклеотидов в лабораторной практике используют все виды хроматографии хроматографию на бумаге (включая электрофорез на бумаге и фингерпринт ), тонкослойную хроматографию [16], все типы колоночной хроматографии (адсорбционную, распределительную, ионообменную и гель-проникающую). Считают, что при разделении методом тонкослойной хроматографии оптимальное количество нуклеотидов составляет 0,2—30 мкг методом хроматографии на бумаге 10—200 мгк методом электрофореза на бумаге 100—500 мкг. На колонке можно делить нуклеотиды в количестве от 50 мкг до нескольких сотен миллиграммов. Конечно, в отдельных случаях аналитического или препаративного разделения эти рамки можно существенно раздвинуть. [c.37]

Пептидная карта (фингерпринт). Характерное для данного белка двумерное расположение пептидов, образующихся при его частичном гидролизе. [c.1016]

Большой интерес представляет тонкослойная модификация [40] бумажного фингерпринта по Инграму, позволяющая в десять и более раз сократить время получения пептидных карт (фингер-принтов) и существенно уменьшить количество анализируемого триптического гидро лизата. Кроме того, для выполнения этого [c.317]

Более быстрым методом разделения пептидов энзиматического гидролизата является метод пептидных карт ( отпечатка пальцев , или фингерпринта ), сочетающий высоковольтный электрофорез и хроматографию на бумаге. С помощью этого метода возможно сопоставление пептидных смесей, получаемых при расщеплении различных белков, и выявление столь малых различий в аминокислотном составе отдельных пептидов, как замещение единичной аминокислоты какой-либо другой. Такие различия имеют большое значение при сравнительном изучении гомологичных белков различных видов растений и животных, а также прй определении генетических изменений в структуре белка, возникающих в результате точечной мутации. [c.81]

Однако необходимо отметить, что фракции, элюируемые с сефадекса, как правило, не являются гомогенными и содержат несколько пептидов (до 10 и более). Поэтому этот метод разделения необходимо сочетать с такими приемами фракционирования, как фингерпринт и ионообменная хроматография. [c.83]

Аналогичные фингерпринты олигонуклеотидных смесей можно получить в тонком слое целлюлозы. Описаны два типа таких разделений тонкослойный электрофорез с по- [c.55]

Большую часть работ последнего времени проводили с радиоактивными РНК, что позволило устанавливать структуру на гораздо меньших количествах вещества. Наряду с методами фингерпринта для быстрой идентификации и выяснения структуры олигонуклеотидов такой подход представляется наиболее перспективным для будущих исследований в этой области. [c.78]

Отдельные пятна элюируют, и в тех случаях, когда не требуется дополнительной очистки, олигонуклеотиды идентифицируют и определяют молярную концентрацию по их радиоактивности относительно суммарной радиоактивности. Типичные фингерпринты, полученные для РНК вируса-сателлита вируса некроза табака путем гидролиза панкреатической иТ -РНК-азами, показаны на рис. 11.1 и 11.2. Совпадение картин, полученных в разных лабораториях, подтверждает, что для идентификации мономеров, димеров и тримеров достаточно знать их положение на фингерпринте. [c.265]

Рис. 11.1. Фингерпринт Т-, -РНК-азного гидролизата РНК вируса-сателлита вируса табачного некроза.

Фингерпринты нерадиоактивных нуклеиновых кислот [c.283]

Рис. 4-53. Получение пептидной карты ( фингерпринта или отпечатков пальцев ) белков В данном случае белок расщепляли трипсином и получили смесь мелких фрагментов полипептидов. Эту смесь фракционировали в двух направлениях электрофорезом и распределительной

Молекулярная масса и изоэлектрическая точка - характерные параметры белка. Однако в основе точной идентификации белковой молекулы лежит определение аминокислотной последовательности. Уже на первом этапе этого процесса, включающего расщепление белка на мелкие фрагменты, можно получить значительную информацию о данном белке. В настоящее время в продаже имеются протеолитические ферменты и химические реактивы, расщепляющие белки по определенным аминокислотным остаткам (табл. 4-10). Так, фермент трипсин отщепляет остатки лизина и аргинина со стороны карбоксильных групп химический реактив бромистый циан расщепляет пептидные связи, расположенные после остатков метионина. Поскольку такие специфические ферменты и реактивы расщепляют в белковой молекуле ограниченное количество связей, при их воздействии образуется смесь больщих пептидов. Разделив эту смесь методом электрофореза или хроматографии, можно получить пептидную карту, характеризующую исследуемый белок. Такие пептидные карты называют иногда фингерпринтами (отпечатками пальцев) белка (рис. 4-53). [c.219]

B. Метод олигонуклеотидного фингерпринта..... [c.6]

Существует три этапа в этом классическом методе анализа последовательности. Первоначально РНК расщепляют иа фрагменты умеренной длины (примерно 50 пар оснований) частичным гидролизом РНазой. Затем анализируют общий состав оснований этих дискретных фрагментов с последующим их расщеплением до маленьких блоков, для которых можно непосредственно установить последовательность оснований. И наконец, большие по размеру фрагменты располагают в нужном порядке, используя частичное перекрывание последовательностей. Такие частичные перекрывания возникают в результате различных способов расщепления, получаемых при действии панкреатической РНазы (специфичной к пиримидинам) и такадиастазы Т] (специфичной к гуанозину). Сложное разделение большого числа фрагментов, получаемых в результате частичного расщепления нуклеазами, удается наилучшим образом осуществить при использовании двумерного разделения ( фингерпринт ), сочетая ионофорез на ацетате целлюлозы при pH 3,5 в одном направлении и ионофорез- на ДЕАЕ-целлюлозной бумаге при кислых значениях pH [30]. Во всех случаях фрагменты детектируют без деструкции с использованием Р-меченных нуклеотидов. [c.193]

После того как установлена первичная структура- какого-либо белка, обычно нет необходимости проводить полное изучение аминокислотной последовательности у гомологичных белков из близких (соответствующих) источников. Быстрый ответ можно получить, используя технику трипсинового фингерпринта . Для этого подвергают гидролизу трипсином белок с известной структурой и параллельно ему гомологичный белок полученные в результате гидролиза пептиды разделяют обычно с помощью двумерного электрофореза или хроматографии. Если разница в последовательностях невелика, то больщинство пептидов должны занимать идентичное положение на двумерном фингерпринте. Те немногие пептиды, которые отличаются по подвижности, необходимо элюи-.ровать и подвергнуть аминокислотному анализу по Эдману. Эта техника особенно полезна при изучении аномальных гемоглобинов, которые отличаются от нормального природой только одного участка. [c.276]

В упоминавшемся вшпе диапазоне фингерпринта расположены полосы, отвечающие различным деформационным колебаниям. В этом диапазоне имеются не только полосы поглощения, характерные для изучаемого соединения в целом, но и полосы, типичные для некоторых группировок. Так, картина распределения полос поглощения в диапазоне 1000--750 см Г помогает выясшпъ положение заместителей у двойной связи или в ароматйческом кольце. [c.45]

Были проведены широкие систематические исследования состава флавоноидов в высших растениях различных видов и сортов. Для получения фингерпринтов, позволяющих быстро определять состав флавоноидов у того или иного вида растения, использовали двумерную хроматографию на бумаге. Было показано, что состав флавоноидов является чрезвычайно важным таксономическим признаком как при установлении родства между видами, принадлежащими к одному семейству, так и при выявлении различий между близкородственными видами. В этом отношении может быть очень характерным присутствие флавоноидов тех или иных классов и распределение заместителей у индивидуальных соединений. [c.137]

Большинство полос поглощения в ИК-спектрах органических соединений, как правило, не поддаются расшифровке по табличным данным характеристических частот. Это в первую очередь касается области ниже 1400 см" , особенно богатой пиками и перегжбаш, которую часто называют областью "отпечатка пальцев" или "фингерпринта" В этой области различные соединения, для которых характерны сходные полосы поглощения в интервале 3600-1400.см" , имеют почти всегда различные частоты колебания. Также трудно подцаются точному учету различные обертонные и составные частоты, которые могут проявиться в различшх местах. [c.264]

На колонке со смолой Дауэкс 50X2 удавалось разделить на отдельные пики все пептиды, определяемые фингерпринтом, по Инграму. Эта колонка оказалась весьма селективной, разделяя изомерные пептиды вал—тре—лей и тре—ва.п—лей, ала—гли и гли—ала, гли—глу и глу—гли. [c.172]

Рис. 2.9. Фингерпринт олигонуклеотидной смеси на хроматографической бумаге. В одном направлении проводили электрофорез при низком значении pH, в другом -хроматографию в смешанном водноорганическом растворителе. Данный фингерпринт описан Рушицким и Собе- оы (Rushizky, Sober, 1962). Некоторые олигонуклеотиды были идентифицированы следующим образом

В большинстве случаев фрагменты, выделенные STHNi методом, оказывались гомогенными сегментами исходной молекулы, содержащими один или более остатков специфических олигонуклеотидов. Олигонуклеотидный состав каждого фрагмента устанавливали в результате полного гидролиза Т1 - или панкреатической РНК-азами и последующего электрофоретического фракционирования процуктов гидролиза. Чтобы идентифицировать образовавшиеся олигонуклеотиды, полученный фингерпринт сравнивали с фингерприн-том всей 5S РНК. В сомнительных случаях идентификацию олигонуклеотида подтверждали щелочным гидролизом. [c.91]

Возможности его применения лимитируются увеличением числа разных олигонуклеотидов и усложнением фингерпринтов, Во многих лабораториях, занимающихся анализом нук— леотианых последовательностей, хорошо известно, чго трудности возрастают не в арифметической прогрессии, а скорее в геометрической. [c.97]

Sander, 1970) может создать основу для быстрого и эффективного метода выяснения структуры более длинных олигонуклеотидов. Сначала устанавливается структура самого короткого из продуктов гидролиза (см. рис. 7.8 и 7.9). Следующий по длине олигомер содержит первую последовательность и добавочный сегмент вплоть до второго Gp,который можно идентифицировать на фингерпринте после исчерпывающего Т -РНК-азного гидролиза продуктов, отвечающих второму пику. Подобным же образом из данных третьего пика можно получить следующий участок цепи, и т. д. [c.147]

Фингерпринты, полученные после гидролиза гемоглобиновой мРНК различными нуклеазами, должны отличаться от фингерпринтов, полученных из известного образца рРНК из ретикулоцитов. [c.255]

Ингрэм (Ingram) получил первые пептидные карты ( фингерпринты - отпечатки пальцев ), показав при этом, что различия [c.218]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология