Лактатдегидрогеназа растворимость

Определяют активность лактатдегидрогеназы в растворимой клеточной фракции скелетной и сердечной мышц крысы в день выделения и после хранения препарата при —5° С. [c.339]

Выделение лактатдегидрогеназы из мышц кролика и изучение свойств растворимого и иммобилизованного фермента. [c.503]

Вполне разумно предположить, что ЫАО+-зависимые дегидрогеназы — класс ферментов, связанных с одним и тем же кофактором и обладающих одной и той же функцией — составляют группу структурно родственных ферментов. По-видимому, так оно и есть, однако структурное родство проявляется не столь четко, как в случае сериновых протеаз. При наложении молекул лактатдегидрогеназы акулы и растворимой малатдегидрогеназы свиньи (первых двух ферментов класса ЫА0+-зависимых дегидрогеназ, которые удалось получить в кристаллическом виде) наблюдается почти полное их совмещение исключение составляют первые 20 остатков лактатдегидрогеназы. Вполне естественно было предположить, что эти ферменты произошли от общей дегидрогеназы-предшественника. Установление структуры алкогольдегидрогеназы из печени лошади и глицеральдегид-З-фосфат—дегидрогеназы омара, которая оказалась существенно иной, усложнило картину, хотя и обнаружилось, что каждый из четырех ферментов состоит из двух доменов и один из них одинаков у всех четырех белков. Это участок, на котором происходит связывание ЫАО+ (рис. 1.13). [c.33]

Для очистки мембранной D-лактатдегидрогеназы Е. соИ хроматографией на оксиапатите [Pratt et al., 1979] был использован пологий линейный градиент концентрации (0—0,2 М) К-фосфатного буфера, pH 7,2 (500 мл для колонки размером 2,6 X 20 см). Растворимость белка обеспечивали включением в состав буфера детергентов (1% Тритона Х-100 и 0,1% ДДС-Na). Очистке на оксиапатите предшествовали освобождение фермента из ме.мбрин с помощью дезоксихолата натрия, хроматография на DE-52 и гель-фильтрация на сефадексе G-200. На всех хроматографических этапах очистки в составе элюентов тоже присутствовали детергенты. [c.234]

Состав реакционной среды объемом 3 мл 100 мМ трис-НС1 буфер, pH 7,5 фосфоенолпируват 0,8 мМ АДФ 3 мМ Mg l2 6 мМ КС1 100 мМ НАДН 0,1 мМ лактатдегидрогеназа 1 инт. ед. растворимая клеточная фракция 0,02—0,1 мл. Контрольная проба не содержит Mg—АДФ. Реакцию начинают добавлением фосфоенолпирувата. [c.334]

Изучают термостабильность лактатдегидрогеназы из разных источников, нагревая фермент (растворимая клеточная фракция) при 60°С в течение 10, 20, 30 мин. Оценивают защитный эффект 0,5 мМ НАДН от термоинактивации. С целью учета стабилизирующего влияния на лактатдегидрогеназу других белков цитозоля в качестве объекта исследования используют растворимую клеточную фракцию в разведении 1 7 и 1 200. [c.339]

Целью работы является получение активного мономера лактатдегидрогеназы (ЛДГ) из мышц свиньи сравнение каталитических характеристик растворимого фермента и различных форм иммобилизованного белка (тетрамера и мономера), а также изучение стабильности иммобилизованного и растворимого ферментов. [c.386]

Общий характер действия на теплокровных. Б. характеризуется высокой биологической активностью. Определяющее значение в токсическом действии имеет ион Ве +, обладающий общетоксическим, аллергическим, канцерогенным и эмбриотокси-ческим действием. Для растворимых соединений характерно также раздражающее действие. При вдыхании в легких развивается продуктивный межуточный процесс с формированием специфических гранулем. Заболевание такого рода получило название бериллиоза. Наблюдаются также изменение иммунобиологического состояния организма, активности многих ферментов, катализирующих энергетические процессы фосфоглюко-мутазы, энолазы, лактатдегидрогеназы, щелочной фосфатазы и др. в легких, печени, почках, мышечной и костной тканях. Наиболее выражены диспротеинемия в виде снижения альбу-мино-глобулинового коэффициента, дисбаланс некоторых микроэлементов (Иванова Кейзер и др.). О канцерогенном эффекте бериллиевой интоксикации свидетельствуют характерные изменения антигенов критического органа, появление низкомолеку- [c.92]

Более подробный анализ работ последних лет указывает на то, что химическими индукторами экзоцитоза являются ионы Са, Mg-ATФ, коньмодулин и цАМФ. Интересные опыты проведены с изолированными клетками мозгового слоя надпочечни--ков. При помощи краткосрочной электростимуляции суспензии или краткосрочной обработки клеток детергентами в низкой концентрации (сапонин, дигитонин) осуществляли электрический или химический пробой мембран, т. е. создавали в мембранах поры , благодаря которым можно регулировать внутриклеточный состав и регулировать экзоцитоз катехоламинов и их спутников секреции. Данный пробой мембран не повреждал аппарат секреции, не опустошал хромаффинные гранулы, но способствовал цитоплазматической утечке содержимого клеток во внешнюю среду (например, лактатдегидрогеназа как цитозольный растворимый фермент вытекала во внешнюю среду). Оказалось, что действительно Са + (1—10 мкМ), кальмодулин (1—10 мкМ), Mg-ATФ (1—5 мМ) индуцируют экзоцитоз катехоламинов, АТФ, хромогранина, дофамин-р-гидроксилазы и энкефалинов в среду инкубации. [c.76]

В качестве простейшего случая структурного подобия можно взять две (или большее число) молекулы белка с довольно сходными структурами и близкими функциями. Однако особый интерес представляет сравнение таких белков, которые явно сходны либо только в структурном, либо только в функциональном отношении. Сравнение целого ряда белков, связывающих нуклеотиды, дает замечательный пример этого. Два упомянутых выше домена, связывающие NAD в лактатдегидрогеназе, были обнаружены также в растворимой малатдегидрогеназе, в глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназе и в алькогольде-гидрогеназе печени. На рис. 2.39 приведено схематическое изображение вторичной структуры этих областей. В перечисленных выше четырех белках не отмечается какой-либо значительной гомологии в первичных структурах. Более того, положения динуклеотид-связывающих доменов в первичной структуре совершенно различны. В трех белках этот домен располагается в области первых 150 остатков с N-конца, тогда как в алкогольдеги- [c.119]

При исследовании растворимой митохондриальной Н+АТФазы из сердца быка (фактор Fi) как в сопряженной регенерирующей системе, содержащей пируваткиназу с ее субстратом фосфоенолпируватом + лактатдегидрогеназа (рис. 2 А, В), так и в системе с рН-индикатором нейтральный красный (рис. 2 Б, Г) (уд. активность соответственно 50 ед./мг и 20 ед./мг) было установлено, что коэффициент седиментации активного фермента (12,4+0.4 5) с точностью до ошибки измерений совпадает с данными, которые получаются при обычной скоростной седиментации в отсутствие субстрата Mg-АТФ. По-видимому, этот фермент не изменяет своей общей конфигурации при гидролизе АТФ. В ходе этой работы было обнаружено, что гидростатическое давление в ячейке ультрацентрифуги инактивирует F , причем тем скорее, чем выше скорость вращения ротора (измерения проводили при 48000, 60 000 и 68 000 об/мин). Инактивация приводила к искривлению графиков Inr(t), из наклона которых вычисляется s, и это вынудило искать пути к стабилизации фермента. Измерения удалось произвести в двух вариантах. 1. Фактор Fi был обработан бифункциональным сшивающим агентом — диметилсуберимидатом — в условиях, когда в среднем на молекулу фермента приходилась одна сшивка при этом сохранялось около 40% активности и исчезала чувствительность к давлению (по крайней мере до 300 атм). [c.186]

Рис. 3.6. Растворимость альдолазы из мышц кролика в растворе сульфата аммония при pH 7,0. Светлыми кружками обозначена растворимость чистого фермента lg (растворимости) =6,30—2,84Х (конц. соли). Черные кружки означают растворимость смеси ферментов из мышц кролика — альдолазы, пируваткиназы, глицеральдегидфосфатдегидрогеназы и лактатдегидрогеназы в соотношении 3 3 3 1. (Неопубликованные результаты автора.)

Кристаллическая структура растворимого (цитоплазматического) фермента установлена с разрешением 2,5 А [45]. Карта электронной плотности еще не соотнесена с аминокислотной последовательностью, но, как указывалось в гл. 1, укладка полипептидной цепи фермента в принципе аналогична укладке цепи лактатдегидрогеназы, хотя малатдегидрогеназа является всего лишь димером с мол. весом 70 ООО. Вероятно, механизм действия обоих ферментов одинаков, поскольку малатдегидрогеназа также содержит важный для катализа остаток гистидина, который может модифицироваться диэтилпирокарбонатом [46]. Два моля NADH (или NAD+) связываются с одинаковым сродством [47]. Кажущаяся отрицательная кооперативность при связывании кофермента, обнаруженная для одного из препаратов фермента, может быть обусловлена тем, что на самом деле в препарате присутствовали две формы [48, 49]. [c.356]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология