Иммуноэлектрофорез Реакции

Иммуноэлектрофорез представляет собой сочетание электрофореза с реакцией преципитации. Сначала проводят электрофорез белков в тонком слое геля. После электрофореза [c.148]

Область применения. Предварительное определение зоны эквивалентности необходимо для постановки количественной реакции преципитации (см. стр. 125) и иммуноэлектрофореза (см. стр. 137). [c.123]

Иммунодиффузию можно сочетать с электрофорезом не только на бумаге, но и на ацетат-целлюлозных мембранах, в крахмальном геле и т. д. Этот метод нашел широкое применение при исследовании белков благодаря высокой специфичности реакции преципитации и очень хорошей разрешаюш,ей способности. Пример разделения приведен на рис. 18. Подробно иммуноэлектрофорез описан в обзорах [33, 52]. [c.100]

Иммуноэлектрофорез. Исследование проводится в два этапа 1) электрофоретическое разделение исследуемого материала в агаре 2) иммунологический анализ. В агаре параллельно оси миграции электрофоретических фракций вырезают траншеи, в которые вносят иммунную сыворотку, содержащую антитела к исследуемым антигенам. В случае реакции между антигенами и диффундирующими в агар антителами формируется преципитат в виде дискретных дуг, соответст- [c.117]

Большим достоинством книги является подробное описание многочисленных вариантов метода иммуноэлектрофореза, в котором высокая разрешающая способность, свойственная электрофорезу в гелях, сочетается со строгой специфичностью иммунных реакций. [c.6]

Рассмотрение различных вариантов иммуноэлектрофореза естественным образом завершает начатое еще в предыдущей книге изложение методов фракционирования белков и нуклеиновых кислот в электрическом поле. В любом из вариантов иммуноэлектрофореза обязательно имеет место явление иммунопреципитации. Это явление широко используется и само по себе — как плодотворный способ высокоизбирательной очистки белков, а также для обнаружения иммуноспецифических продуктов фракционирования, проведенного с помощью обычного электрофореза или ИЭФ. Поэтому представляется целесообразным предварить рассмотрение собственно иммуноэлектрофореза описанием механизма и особенностей метода иммунопреципитации. Однако многие из этих особенностей, в частности очень важные явления неоднозначности иммунного ответа и полиморфизма иммунных реакций, нельзя понять без хотя бы беглого, но не слишком поверхностного знакомства С механизмом выработки иммунитета, строением я функцией иммуноглобулинов, природой сил взаимодействия между антителами и антигенами и т. д. Эти же представления окажутся необходимыми в следующей части книги при рассмотрении радиоиммунных методов исследования. Между тем в большинстве случаев биохимики и молекулярные биологи довольно плохо знакомы с современной иммунохимией, претерпевающей к тому же пору бурного развития. [c.81]

Однако некоторые смеси антигенов слишком сложны для разделения просто путем диффузии и преципитации, и для анализа таких смесей был разработан метод иммуноэлектрофореза - прежде чем выявлять антигены визуально в реакции преципитации, их разделяют по заряду с помощью этого метода (рис. 29.3). [c.528]

Этот метод, сочетающий электрофорез с иммунодиффузией, дает возможность различить сходные по электрофоретической подвижности вещества с помощью специфической реакции преципитации между антигеном и соответствующим антителом. Метод особенно ценен для обнаружения антигенов в сложных физиологических смесях, например антигенов иммуноглобулинов. Принцип, лежащий в основе иммуноэлектрофореза, наглядно представлен на рис. 4.9. [c.133]

Иммуноэлектрофорез сочетает метод электрофореза и реакцию преципитации смесь антигенов разделяют в геле с по- [c.178]

Еще большее число белковых фракций (свыше 30) можно получить методом иммуноэлектрофореза (рис. 17.1). Этот метод представляет собой своеобразную комбинацию электрофоретического и иммунологического методов анализа белков. Иными словами, термин иммуноэлектрофорез подразумевает проведение электрофореза и реакции преципитации в одной среде, т.е. непосредственно на гелевом блоке. При данном методе с помощью серологической реакции преципитации достигается значительное повышение аналитической чувстительности электрофоретического метода. [c.569]

Реакция иммуноэлектрофореза (РИЭФ). Эта реакция позволяет произвести анализ и идентификацию отдельных АГ в многокомпонентной системе. РИЭФ основана на электрофоретическом [c.68]

Реакция встречного иммуноэлектрофореза (РВИЭФ). Эта реакция основана на встречной диффузии в электрическом поле антигенов и антител и появлении внутри прозрачного геля видимого преципитата. В агаровом или агарозном геле делают лунки диаметром 2 — 3 мм, причем расстояние между лунками для сыворотки и АГ должно составлять 5 — 6 мм. Лунки располагают попарно (одна — для АГ, вторая — для сыворотки) или по три (одна — для АГ, вторая — для испытуемой сыворотки, третья — для контрольной сыворотки). Лунки для сыворотки располагают ближе к аноду, а для АГ — к катоду. Реакцию проводят с несколькими разведениями АГ, продолжительность электрофореза — 90 мин. Результаты реакции учитывают сразу же после окончания электрофореза, отмечая количество и локализацию линий преципитации при сравнении их с контрольной тест-системой. [c.69]

Существуют различные методы выявления HBsAg в сыворотке крови. Наиболее простым, обладающим высокой специфичностью, но и менее чувствительным, чем другие методы (ИФА, РИА и РОНГА), является РПГ. Применяют также встречный иммуноэлектрофорез (РВИЭФ). Для повышения чувствительности этих реакций рекомендуется концентрировать сыворотки с помощью высушивания в термостате при 37 °С и последующего разведения в меньшем объеме дистиллированной воды. [c.304]

Для обнаружения энтеротоксина С1. perfringens широко применяются серологические методы, основанные на взаимодействии токсина с гомологичными антителами, такие, как реакция пассивной гемагглюти-нации и реакция диффузионной преципитации и иммуноэлектрофорез. [c.364]

В методе иммуноэлектрофореза для определения положения индивидуальных белков на электрофореграмме применяют реакцию преципитации с антисывороткой, помещенной вдоль направления миграции. Более эффективного разделения компонентов можно добиться с помощью метода перекрестного-иммуноэлектрофореза, суть которого сводится к следующему. Узкую полоску геля с разделенными в одном направлении антигенами переносят на пластинку с гелем, содержащим антитела, и проводят дополнительный электрофорез в перпендикулярном направлении. Образующиеся при этом зоны преципитации имеют форму ракет, высоту которых можно использовать для оценки количества антигена (методы электроиммунотестирования и ракетного электрофореза). [c.29]

Реакция преципитации механизм, варианты постановки (кольцепреци-питаиия, преципитация в геле, иммуноэлектрофорез) и их диагностическое применение. [c.112]

Кроме метода титрования существуют и другие способы количественного определения антигенов путем иммуноэлектрофореза. Был описан метод, основанный на принципе простой иммунодиффузии f80, 81, 1962], при которой углубления для антигенов и антител примыкают непосредственно друг к другу. Антиген, находящийся в одной части геля, диффундирует в другую, содержащую антитела, и на границе этих двух частей образуется линия преципитации. Первичная зона преципитации растворяется затем в избытке антигена, продолжающего поступать благодаря диффузии в ту часть геля, где находятся антитела. Растворимые комплексы антиген-антитело вновь преципи-тируют при реакции с антителами в прилежащей зоне геля. Описанная последовательность событий — преципитация, растворение и повторная преципитация — создает впечатление, что преципитат движется. Путь, пройденный передним краем преципитата за тот или иной период времени, может служить мерой для определения концентрации антигенов. При этом в качестве стандартов необходимо использовать образцы с известной концентрацией антигена. При количественном иммуноэлектрофорезе для проведения простой иммунодиффузии разделенных компонентов в геле вырезают широкую канавку, непосредственно примыкающую к лунке с антигеном (рис. 85), и заполняют [c.240]

Для получения очищенного HBsAg отбирают шзму с титром 1 8 и выше по реакции встречного иммуноэлектрофореза ШЭФ), разводят в 2 раза физиологическим раствором и разливают во фла-)ны по 200 мл. Флаконы помещают в воднную баню с температурой ) 2°С и прогревают в течение 1 ч, затем флаконы охлаждают в холодной, де. [c.270]

Иммуноэлектрофорез считается незаменимым методом для качесшенного анализа смесей антигенов, например, сывороток. С помощью данного метода можно идентифицировать до 20 компонентов смеси. Удается исследовать и аномалии индивидуальных белков, поскольку на стадии разделения обнаруживаются нарушения электрофоретической подвижности (налример, гомогенность р1 миеломных белков), существенные ютклонения от нормальной концентрации (определяемые по интенсивности дуг преципитации) и изменения субъединично-го состава (например, искажение соотношения легких цепей к и Я. у миеломных белков). Такие тонкие изменения трудно обнаружить с помощью простой диффузии 1в геле. Осторожно подбирая агарный/агарозный носитель, состав буфера и его pH, можно исследовать молекулы с самыми различными зарядами. Применимость данного метода, ак и всех других, основанных на реакции преципитации, ограничена определением только таких молекул, концентрация которых в растворе не менее или равна 5 мкг/мл, а размеры не препятствуют образованию преципитатов. [c.222]

Ракетный иммуноэлектрофорез был разработан в результате дальнейшего развития принципа комбинации электрофореза и иммунопреципитации. Он позволяет быстро оценить концентрацию индивидуального антигена в реакции с моноспецифической антнсывороткой. [c.222]

Иммуноэлектрофорез обычно проводят на горизонтальных пластинках агара или агарозы, как показано на рис. 9-19. Для этого готовят однородный слой и в нем делают ямку и желобок, в которые помещают антиген и антитело соответственно. Смесь антигенов помещают в ямку, после чего пластинку подвергают электрофорезу, во время которого молекулы движутся в обоих направлениях, причем проходимые расстояния зависят от их подвижностей и знака заряда. После окончания электрофореза в желобок вносят антисыворотку. Антисыворотка и антигены диффундируют через гель. Если при их встрече происходит реакция антиген — антитело, образуется видимая искривленная пре-ципитиновая линия (рис. 9-19, В и гл. 10). Этот метод позволяет идентифицировать ряд антигенов, вызывающих образование антител, и относительное количество каждого, причем возможно [c.243]

В последние годы широкое применение получил метод серологической преципитации в геле. Большие преимущества этого метода, выполняемого на стеклах, состоят в следующем. Он позволяет разделять смесь молекул антигена и соответствующих антител благодаря различной скорости диффузии в геле, различной подвижности в электрическом поле (метод иммуноэлектрофореза) или же используя оба эти свойства. С помощью этого метода можно непосредственно сравнить два антигена, поместив их в соседние луикж на одной пластинке. Быть может, этот метод не столь чувствителен, как метод преципитации в пробирках, в смысле выявляемых концентраций вируса [1940]. Однако для постановки реакции этим способом, безусловно, требуются гораздо меньшие объемы реагентов. [c.366]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология