Метод иммуноэлектрофореза

Принцип метода. Иммуноэлектрофорез представляет собой комбинацию электрофоретического разделения белков с двойной диффузией и иммунопреципитацией в геле. Вслед за электрофоретическим разделением белков в агаровом геле навстречу полученным фракциям диффундирует специфическая иммунная сыворотка. Этот метод позволяет характеризовать белки не только по скорости миграции в электрическом поле, но и по антигенным свойствам. [c.137]

Гель-электрофорез. Электрофорез на геле и крахмале применяют для аналитических целей. Наиболее важным применением гель-электрофореза является иммуноэлектрофорез. Для этого вида анализа используют макропористые гели, в частности гели агара и агарозы. Метод иммуноэлектрофореза основан на том, что после разделения электрофорезом происходит диффузия разделенных веществ — антигенов — в направлении, перпендикулярном направлению электрофореза. Навстречу этим соединениям диффундируют антитела. При соединении антигенов и антител образуются характерные дуги осаждения. Метод иммуноэлектрофореза очень чувствителен при обнаружении антигенов, специфических для данных антител. В настоящее время применяют метод введения радиоактивной метки в антигены, благодаря чему радиоиммуноэлектрофорез является одним из самых чувствительных методов анализа биополимеров. [c.364]

Метод иммуноэлектрофореза позволяет сравнивать между собой не только смеси белков (антигены) с помощью данной иммунной сыворотки, но также и иммунные сыворотки с помощью данного антигена. Для такого исследования в пластинке агарового геля вырезают две параллельные канавки, а между ними на расстоянии 3 мм от края каждой делают лунку для образца. В нее вносят раствор определенного белка и, проведя электрофорез, заполняют канавки сравниваемыми иммунными сыворотками. Полосы преципитации, которые появляются с обеих сторон от нанесенного образца, позволяют сопоставлять исследуемые иммунные сыворотки. [c.148]

Описанные выше методы иммуноэлектрофореза применимы только для качественного анализа. [c.148]

Макропористые гели, особенно гели агара и агарозы, наиболее широко используются в методе иммуноэлектрофореза [31] разделенные методом электрофореза соединения диффундируют в направлении, перпендикулярном направлению электрофореза, [c.298]

Большим достоинством книги является подробное описание многочисленных вариантов метода иммуноэлектрофореза, в котором высокая разрешающая способность, свойственная электрофорезу в гелях, сочетается со строгой специфичностью иммунных реакций. [c.6]

В классическом методе иммуноэлектрофореза в агаровом геле сочетание электрофореза с иммунодиффузией дает большое увеличение числа различаемых компонентов, хотя степень разрешения электрофореза при этом не повышается. В сыворотке человека таким путем можно обнаружить 20—30 компонентов в зависимости от качества применяемой антисыворотки. Линии преципитации соответствуют индивидуальным белкам, а не группам белков с одинаковой подвижностью. Обычно иммуноэлектрофорез рассматривают как источник качественной информации о белковом составе сыворотки. И действительно, он служит наиболее эффективным способом обнаружения недостаточности того или иного белка и изучения свойств моноклональных иммуноглобулинов. Описан также полуколичественный метод определения белкового состава сыворотки с применением иммуноэлектрофореза [8, 80]. Более удачным решением пробле- [c.335]

Однако некоторые смеси антигенов слишком сложны для разделения просто путем диффузии и преципитации, и для анализа таких смесей был разработан метод иммуноэлектрофореза - прежде чем выявлять антигены визуально в реакции преципитации, их разделяют по заряду с помощью этого метода (рис. 29.3). [c.528]

Разделение заряженных соединений с помощью электрофореза можно проводить не только в растворе, но и в различных пористых инертных средах, таких, как крахмал, силикагель, полиакриламидный гель, смоченная фильтровальная бумага. Раствор смеси веществ обычно наносят в виде четкого пятна или зоны, а затем проводят электрофорез, добиваясь иногда полного разделения всех компонентов смеси. Этот процесс, называемый зонным электрофорезом, применяют как для аналитических, так и для препаративных целей. Электрофорез в присутствии додецилсульфата натрия широко используют для определения молекулярных масс полипептидов (разд. 5.1.7) метод иммуноэлектрофореза рассмотрен в гл. 30. [c.163]

Еще большее число белковых фракций (свыше 30) можно получить методом иммуноэлектрофореза (рис. 17.1). Этот метод представляет собой своеобразную комбинацию электрофоретического и иммунологического методов анализа белков. Иными словами, термин иммуноэлектрофорез подразумевает проведение электрофореза и реакции преципитации в одной среде, т.е. непосредственно на гелевом блоке. При данном методе с помощью серологической реакции преципитации достигается значительное повышение аналитической чувстительности электрофоретического метода. [c.569]

Наконец, в литературе описаны различные наследственные изменения в составе сыворотки крови. Нанример, наблюдалась наследственная аномалия альбумина, когда этот белок делился электрофоретически на две фракции. Но совершенно новая область для исследования наследственных изменений крови открылась, когда были разработаны методы иммуноэлектрофореза и электрофореза в гелях. Как уже говорилось, эти методы позволяют разделять сыворотку на десятки компонентов уже сейчас установлено большое количество генетически детерминированных модификаций трансферринов, гаптоглобинов и некоторых других белков в сыворотке крови человека. Так как изменения проявляются независимо друг от друга, наблюдаемая картина получается очень сложной и практически отличается у каждого отдельного человека. В этой области ведутся сейчас интенсивные исследования. [c.102]

В методе иммуноэлектрофореза для определения положения индивидуальных белков на электрофореграмме применяют реакцию преципитации с антисывороткой, помещенной вдоль направления миграции. Более эффективного разделения компонентов можно добиться с помощью метода перекрестного-иммуноэлектрофореза, суть которого сводится к следующему. Узкую полоску геля с разделенными в одном направлении антигенами переносят на пластинку с гелем, содержащим антитела, и проводят дополнительный электрофорез в перпендикулярном направлении. Образующиеся при этом зоны преципитации имеют форму ракет, высоту которых можно использовать для оценки количества антигена (методы электроиммунотестирования и ракетного электрофореза). [c.29]

В 1955 г. Шейдеггер [1126] впервые предложил микровариант иммуноэлектрофореза. Благодаря этому простому, быстрому и сравнительно дешевому методу иммуноэлектрофорез нашел широкое применение в повседневной практике. Для формирования геля используют предметные стекла (25X75 мм). Антигены, подвергаемые электрофорезу, помещают в небольшие лунки, а антитела — в продольные канавки. Следующую за электрофорезом иммунодиффузию проводят таким же способом, как и в макрометоде. Количество вносимой в канавку антисыворотки составляет 50—70 мкл. [c.237]

Как уже отмечалось, картина преципитации, получаемая при иммуноэлектрофорезе, сильно зависит от свойств иммунной сыворотки. Для каждого компонента смеси антигенов существует определенный диапазон концентраций, в котором получаются хорошо сформированные четкие линии преципитации (зона эквивалентности). В многокомпонентных смесях концентрация отдельных антигенов может различаться в широких пределах. Концентрация (титр) антител в применяемой иммунной сыворотке также может варьировать в значительной степени. Таким образом, вполне возможна ситуация, при которой зоны эквивалентности для разных компонентов смеси не будут перекрываться. В связи с этим иммуноэлектрофорез многокомпонентных смесей рекомендуется проводить при нескольких относительных концентрациях антиген-антитело, так как при использовании только одной такой концентрации можно не обнаружить какие-то компоненты. Предложен, в частности, метод иммуноэлектрофореза с применением последовательных разведений сыворотки человека [618, 619]. Этот метод иммуноэлектрофоретического титрования полезен для полуколичественного определения от- [c.239]

В этом отношении эффективны такие методы, как двойная диффузия по Ухтерлони (наименее чувствительный метод), иммуноэлектрофорез (для индивидуального антигена или смеси антигенов), ракетный ИЭФ (для индивидуального антигена) и двумерный ИЭФ (для определенного антигена или смеси. антигенов). Данные методы описаны в гл. 6. На рис. 2.1 при- [c.55]

Для идентификации дуги преципитации, относящейся к определенному антигену, можно воспользоваться приемом, который иллюстрирует рис. 34. Полиспецифическую антисыворотку вносят в одну канавку, расположенную между двумя электрофоретическими треками. В одном из этих треков фракционируют исследуемую смесь антигенов, а во втором — проводят электрофорез чистого препарата искомого антигена. Теперь, опираясь на симметрию, можно среди суперпозиции дуг исследуемого препарата отыскать ту, которая обязана своим появлением наличию в препарате того же самого антигена. Кстати, суперпозиция и сложная порой картина взаимного пересечения дуг преципитации не должна вызывать недоумения, поскольку, как это уже отмечалось при обсуждении метода Ухтерлони, каждый из антигенов диффундирует и образует иммунные комплексы независимо от других. То же самое относится и к диффузии антител. Имеются и другие варианты использования описанного метода иммуноэлектрофореза. [c.138]

Практически поступают следующим образом. С помощью специального шаблона с отверстиями и прорезями в пластине геля первого направления вырезают лунки для исходных препаратов и разрезают ее на полосы в направлении электрофореза. На рис. 39 изображен такой шаблон, предназначенный для одновременного электрофореза трех препаратов. Наличие двух отверстий для каждой полосы геля имеет отношение к описанному ниже методу идентификации антигенов. Здесь пока используется по одному отверстию в каждой полосе. Электрофорез лроводят в тех же условиях, что были описаны для метода иммуноэлектрофореза по Грабар и Уильямс. [c.146]

Агар — это смесь двух галактозных полимеров, агарозы и агаро-пектина. Их концентрация в геле равна всего 1 %, т. е. агар содержит большое количество воды, вследствие чего ионы в процессе электрофореза движутся очень быстро. Благодаря этому свойству агар очень удобен для разделения и обнаружения антигенов методом иммуноэлектрофореза (разд. 4.4.4). [c.123]

В последние годы широкое применение получил метод серологической преципитации в геле. Большие преимущества этого метода, выполняемого на стеклах, состоят в следующем. Он позволяет разделять смесь молекул антигена и соответствующих антител благодаря различной скорости диффузии в геле, различной подвижности в электрическом поле (метод иммуноэлектрофореза) или же используя оба эти свойства. С помощью этого метода можно непосредственно сравнить два антигена, поместив их в соседние луикж на одной пластинке. Быть может, этот метод не столь чувствителен, как метод преципитации в пробирках, в смысле выявляемых концентраций вируса [1940]. Однако для постановки реакции этим способом, безусловно, требуются гораздо меньшие объемы реагентов. [c.366]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология