Белки фагов

На молекулах репликативной формы ДНК происходит синтез не только (+)цепей ДНК, но и вирус-специфических мРНК- Следует сказать, что синтез мРН К должен предшествовать появлению новых молекул (+)цепей ДНК, так как без вирус-специфических мРНК в зараженной клетке не может появиться белок А. Трансляция фаговых мРНК приводит к накоплению вирус-специфических белков, в том числе и структурных, которые — при достаточной концентрации — начинают превращаться в сложные структуры— предшественники вирусного капсида. Генерируемые на этой стадии (+)кольца в результате специфических взаимодействий с белками фага вовлекаются в процесс сборки вириона. Тем самым предотвращается ставший уже ненужным переход -Ь)цепей в репликативную фор.му. [c.274]

Накопление мутаций в определенном гене, контролирующем структуру рецептора бактерии, может привести к нарушению какой-то функции клеточной мембраны, а длительная мутационная изменчивость соответствующего рецепторного белка фага может понизить его стабильность и вместе с тем стабильность частицы фага в целом. Первое из предположений подтверждается частой встречаемостью среди бактериальных фагоустойчивых адсорбционных мутантов форм, несущих изменения и других признаков (мутации с плейотропным эффектом), например скорости деления, устойчивости к антибиотикам, проницаемости и др. Не исключена и возможность возникновения в ходе последовательного отбора фагоустойчивых мутантов бактерий и преодолевающих их устойчивость мутантов фага таких форм белков в адсорбционном аппарате фага, которые могут обладать цитотоксическим эффектом, проявляемым при контакте с клеткой, что предотвратит последующий продуктивный цикл. [c.201]

Подобным же образом было показано, что действие 5-фторурацила на бактерии, приводящее к образованию химически измененных ферментов, протекает чрезвычайно быстро в течение десятков секунд. Наконец, при инфицировании клеток бактериофагом Tj немедленно ингибируется синтез рибосомной РНК. Через несколько минут начинается бурный синтез ряда (около 20) новых белков фага вместо примерно 1000 белков нормальной клетки, для чего необходимо образование в рибосомах соответствующих матриц. Если считать, что для синтеза нового белка нужны матрицы из РНК, то время синтеза матриц измеряется десятками секунд. Указанные факты также подтверждают гипотезу о существовании особого вида РНК, переносящего информацию от хромосомы к рибосомам, в которых синтезируются белки, РНК, крайне нестабильной, с малым временем оборота, постоянно синтезируемой и распадающейся. [c.466]

Белки фага содержат серу, но не содержат фосфора, а ДНК содержит фосфор, но не содержит серы. Поэтому фаговые частицы, образовавшиеся в Е. соИ, меченных радиоактивной серой, включили ее в свои белковые оболочки, тогда как частицы, образовавшиеся в Е. соИ, меченных радиоактивным фосфором, содержали ДНК, меченную Р. [c.162]

Сложность структуры Т-четных бактериофагов позволяет заранее предсказать существование в них нескольких, если не многих, структурных белков. На долю основного морфологического компонента фага, его головки, приходится более 85% всего белка фага. Сейчас полагают, что белок головки состоит из субъединиц с молекулярным весом 42 ООО, с N-концевым аланином и С-кон-цевым глицином 183, 114, 279]. [c.91]

Дополнение 15.1. Регуляторные белки фага Х с1 и Сго [c.189]

Независимо Э. Волкин и Ф. Астрачан (1956) изучали синтез РНК в бактериях, зараженных ДНК-содержащим бактериофагом Т2. После заражения бактерии перестают синтезировать свои белки, и весь белковый синтез клетки переключается на продукцию белков фага. Оказалось, что основная часть РНК клетки-хозяина при этом/не изменяется, но в клетке начинается продукция небольшой фр ции метаболически нестабильной (короткоживущей) РНК, нуклеотидный состав которой подобен составу ДНК фага. [c.10]

Некоторые белки фагов, как показано, обладают способностью стабилизировать другие белки, в том числе и те, которые синтезируются под контролем генов, клонируемых на плазмидах и иных векторах в Е, соИ (например, белки эукариотического происхождения). [c.214]

Выделен также белок дрожжей, способный разрезать полухиазмы и по свойствам напоминающий аналогичные белки фагов Т4 и Т7. [c.98]

Рассмотрим теперь действие регуляторных белков фага на различных стадиях его роста, перечисленных на рис. 3.3. Рисунок иллюстрирует, какие активные регуляторные белки и соответственно мРНК синтезируются на каждой стадии. Первые две стадии одинаковы независимо от того, по какому пути пойдет фаг-по пути лизиса или лизогении. [c.67]

Наконец, генетическая роль ДНК со всей очевидностью вытекает из экспериментальных наблюдений над бактериальными вирусами — бактериофагами. Бактериофаги представляют собох нуклеопротеиды, состоящие из ДНК и белка. Наблюдение над заражением бактериальной клетки бактериофагом показало, что внутрь клетки проникает згреимуществеино ДНК. Правда, в некоторых случаях обнаруживается, что в клетку хозяина попадает какое-то количество белка фага, но много фактов указывает на то, что в передаче наследственных свойств фага существенная роль принадлежит именно ДНК. В самом доле, нанример, искусственное изменение структуры ДНК фагов, например путем замещения тимипа 5-йодурацилом или [c.71]

Херши изучил химически синтез ДНК фага, воспользовавшись как раз тем обстоятельством, что ДНК содержит чуждое клетке основание — оксиметилцитозии. Выяснилось, что в клетке синтезируются готовые макромолекулы ДНК, образующей резервуар, в котором идут интенсивные процессы генетического обмена и рекомбинации. Резервуар ДНК содержит 30—50 макромолекул ДНК (в расчете на двойные спирали весом 2 10 у). Одновременно в клетке идет синтез собственных белков фага. Начиная с 11-й мин. начинается созревание корпускул фага Tj, строящихся из ДНК и белковой оболочки. Количество ДНК во внутриклеточном резервуаре становится постоянным, и количество синтезируемых молекул равно количеству застраивающихся в готовые частицы фага. Примерно на 20—25-й мин. число готовых корпускул фага достигает 100—150, и клетка лизирует, внезанно разрываясь и выпуская в среду от 100 до 200 готовых фагов. [c.365]

КОВ как самого фага, так и белков — ферментов синтезируемых клеткой, в качестве предшественников к образованию фага. Одновременно в области с находятся так называемые гены-регуляторы, унравляюш,ие образованием специальных веществ белковой природы — цитоплазматических респрессоров, подавляющих синтез специфических белков фага. В этом смысле, как мы увидим в дальнейшем (стр. 489), генетическая структура фага точно такая же, как генетическая структура любых областей бактериальной хромосомы, ведающих синтезом собственных ферментов клетки. [c.384]

Образование цитоплазматического ренрессора подавляет синтез белков фага и создает условия для его существования в форме профага. Одновременно и по той же самой причине вторичное заражение профага тем же вирусом оказывается неэффективным. Присутствие в клетке ренрессора блокирует синтез белков фага, и вторичная инъекция ДНК ни к чему не приводит. В этом и заключается смысл иммунитета лизогенных бактерий к вторичному заражению гомологическим фагом. Мутация цистронов ведающих образованием репрессоров, — они локализованы внутри области с в некотором сегменте im (от слова иммунитет), — может приводить к их ослаблению или полному выведению из строя. Соответствующие штаммы фага потеряют способность к лизогенизации. Следовательно, причины выбора внутри данной генетически однородной культуры между лизисом и лизогенизацией зависят еще от многих факторов и остаются во многом неясными. [c.384]

Физические и химические исследования бактериофага 2 показали, что его частица содержит одну одноцепочечную (некольцевую) молекулу РНК длиной около 3300 нуклеотидов. (Следовательно, РНК 2 несет примерно в два раза меньше генетической информации, чем РНК ВТМ.) Нуклеотидный состав РНК 12 следующий [А] = 0,23 [Г] = 0,26 [У] = = 0,26 и 1Ц] = 0,25. Белковая оболочка фага 2 представляет собой сферическую структуру из 180 одинаковых молекул белка, каждая из которых содержит 129 аминокислот. Анализ аминокислотной последовательности белка фага 12 и родственных ему фагов М52 (выделенного в Калифорнии) и 1г (выделенного в Германии) показал, что белок М52 отличается от белка 2.по 88.-й аминокислоте, белке фага 12 в этом мес е находится оста- [c.469]

При лизогенизации клеток, т. е. при переходе фага в профаг, так же как и при любом процессе перехода вируса в провирус, синтез ряда белков фага оказывается блокированным вследствие наличия цитоплазматического ингибитора, образуемого под действием особого гена-регулятора. Это положение доказывается генетическим экспериментом на диплоидных гетерозиготах. [c.499]

Пташке надеялся, что в этих условиях значительная часть остаточного синтеза белка будет приходиться на образование продукта гена с1 супер-инфицирующими бактериофагами, так как синтез белков клетки-хозяина был подавлен предварительной обработкой, а синтез большинства вегетативных белков фага не мог происходить из-за присутствия эндогенного иммунитетного репрессора. Действительно, после экстракции и хроматографического фракционирования радиоактивных белков из таких клеток оказалось, что одну из фракций можно идентифицировать как продукт гена с1. Эта фракция обнаруживалась, только если бактерии заражали бактериофагами Яс1+, содержащими нормальный ген репрессора, и отсутствовала при заражении атйег-мутантами по гену с1. Определение скорости седиментации этой белковой фракции в градиенте плотности сахарозы показало, что ее молекулярная масса соответствует длине полипептидной цепи примерно в 200 аминокислот, т. е. близка к молекулярной массе одной из четырех субъединиц, составляющих /ас-репрессор. [c.492]

Если женская клетка лизогенная (F ), т. е. несет в себе профаг, она вырабатывает репрессор, подавляющий синтез белков фага, и, следовательно, ничего существенного не произойдет, независимо от того, войдет ли в нее нри конъюгации профаг к или нет. [c.499]

Недавно удалось выяснить условия, при которых происходит агрегация вирусных белков и РНК с образованием вирусоподобных частиц еще для одного, несколько меньшего, класса вирусов — РНК-содержащих фагов группы f2. Частицы, полученные из оболочечного белка фага MS2 и его РНК, в соответствующих условиях имели на электронных микрофотографиях такой же вид, как и частицы исходного фага, однако константа седиментации таких частиц составляла 69S вместо 81S и, кроме того, они не обладали инфекционностью [491]. Очень похожие результаты были получены в опытах с фагом fr [211]. Свойства этих неинфекционных частиц напоминали свойства фагов некоторых генетически дефектных штаммов (атЬег-мутанты), у которых отсутствовал фактор созревания — гистидинсодержащий белок, получивший название белка А. Фаги дикого типа этой группы содержат по одной молекуле белка А (см. гл. VHI, разд. В). [c.223]

Теория лизогении была подтверждена генетическими экспериментами, т. е. нахождением особого типа мутантов и их локализацией на генетической карте. Область хромосомы X содержит центральный сегмент С, управляющий лизогенизацией вируса и рядом цистронов, являющихся структурными генами, управляющими синтезом белков фага. Способность к лизогенизации полностью утрачивается в результате точечных мутаций С+ Ср. Исследование рекомбинантов показывает, что все эти мутации расположены в маленьком сегменте внутри С. Этот сегмент обозначается символом ira (иммунитет). Локус im и есть ген-регулятор, управляющий синтезом специфического репрессора белков фага. Изучая гетерозиготы, содержащие обе аллели С+ и j, мы убеждаемся в том, что мутант j рецессивен.. [c.500]

Одна из линий исследования внутриклеточных предшественников фагового белка основывалась на использовании того факта, что Т-четные фаги обладают ярко выраженными антигенными свойствами. При инъекции фаголизата кролику или лошади ( )тги вызывают специфическую иммунологическую реакцию у животного. Иными словами, в сыворотке крови иммунизированного животного появляется класс глобу-лярШ)1х белков, или антител, обладающих специфическим сродством к белкам фага и способных, следовательно, сиеи.ифически соединяться с ними. (П ои,есс образования антител более подробно будет рассматрив.ать-ся в гл. XXI.) [c.266]

В табл. 11.2 приведено несколько примеров последовательности нуклеотидов фаговых РНК, которые играют роль мРНК (указано также начало цистронов). Особенно тщательно исследованы относительно простые РНК мелких фагов R17, Q , MS2 и т. д. их мРНК содержит только три цистрона (ДНК высших организмов содержат тысячи цистронов), кодирующих А-белок, белок оболочки и РНК-репликазу (в указанном порядке). Последовательность нуклеотидов прецистронных участков известна только частично, но установлено, что эти участки расположены слева от цистрона. Известно, например, что цис-трон А-белка фага Q начинается с 61-го нуклеотида от 5 -кон- [c.24]

Рис. 20.9. Аминокислотные последовательности лизоцимных белков фага Т4, кодируемых геном дикого типа е я мутантными генами е, содержащими взаимно супрессирующие мутащ1И со сдвигом рамки считывания. Последовательность нуклеотидов

А. Для очистки от белков фаг лучше всего осадить в растворе s l из верхней части пробирки. [c.63]

Космиды. Как уже отмечалось, емкость векторов, полученных на базе ДНК фага А, (не более 23 т.п.н.), ограничена тем, что существенную их часть составляют гены, кодирующие структурные белки фага. Как выяснилось, в головку этого фага может упаковаться любая ДНК подходящего размера (36—52 т.п.н.), ограниченная двумя со5-сайтами, ориентированными в одном направлении. Это позволило, совместив в одном геноме плазмидный репликатор и os-сайт фага X, создать векторы нового типа, так называемые космиды ( ollins, Hohn, 1978). Размер космид в среднем составляет 5 т.п.н., что позволяет с их помощью клонировать ДНК размером до 45-47 т.п.н. Поэтому космиды предназначены для конструирования банков генов. [c.217]

Ограничением описанной системы является тот факт, что сборка фага происходит в процессе прохождения ДНК через цитоплазматическую мембрану, и поэтому структурные белки фага обладают свойством секретироваться. Этому нередко препятствуют посторонние аминокислотные последовательности, внедренные в Н-конец белка врШ. Такое ограничение отсутствует у фага А, поскольку его сборка происходит в цитоплазме. Здесь оказалось возможным выставлять чужеродные белки и на поверхности головки (М1ка уа е1 а1, 1996), и на хвостовом отростке (Машуата е/ а1., 1994). В последнем случае воспользовались белком рУ, состо- [c.337]

Рис. 5-26. Связывание 88В-белка фага Т4 с одноцепочечной ДНК (задача 5-33). Связывание определяли с помощью центрифугирования в градиентах сахарозы, в которых ДНК, имеющая ббльшую массу, оседает быстрее, чем белок, и поэтому обнаруживается ближе ко дну пробирки.

Анализ экзонуклеазы и -белка фага X Е. соИ методом Ухтерлони. [c.267]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология