Мутанты бактерий

Появление новых генотипов в смешанной культуре биохимических мутантов бактерий [c.26]

Одно из самых интересных изменений ферментов, вызываемых мутацией, — приобретение нечувствительности фермента к определенному специфическому яду. Таким образом возникают мутанты бактерий, устойчивых к соответствующему яду. Обычно яды являются структурными аналогами субстратов, т. е. клеточных метаболитов. Именно в силу структурного сходства молекулы яда присоединяются к ферменту, и, если это соединение прочное, фермент оказывается выведенным из строя, т. е. отравленным. Поэтому ферментные яды носят название антиметаболитов. [c.153]

МУТАНТЫ БАКТЕРИЙ Сбраживание сахаров [c.117]

Мутанты бактерий с нарушением адсорбции, отобранные по устойчивости к определенному фагу, часто отличаются друг от друга разными свойствами. Наиболее просто это можно пока- [c.198]

Накопление мутаций в определенном гене, контролирующем структуру рецептора бактерии, может привести к нарушению какой-то функции клеточной мембраны, а длительная мутационная изменчивость соответствующего рецепторного белка фага может понизить его стабильность и вместе с тем стабильность частицы фага в целом. Первое из предположений подтверждается частой встречаемостью среди бактериальных фагоустойчивых адсорбционных мутантов форм, несущих изменения и других признаков (мутации с плейотропным эффектом), например скорости деления, устойчивости к антибиотикам, проницаемости и др. Не исключена и возможность возникновения в ходе последовательного отбора фагоустойчивых мутантов бактерий и преодолевающих их устойчивость мутантов фага таких форм белков в адсорбционном аппарате фага, которые могут обладать цитотоксическим эффектом, проявляемым при контакте с клеткой, что предотвратит последующий продуктивный цикл. [c.201]

Ограничения развития фага, обусловленные свойствами бактерии. Зависимость внутриклеточного развития бактериофага от наличия многих ферментов, а также структур бактерий, не всегда существенных для самой клетки, позволяет отбирать такие мутанты бактерий, в которых развитие фага блокировано на разных стадиях — транскрипции, трансляции, репликации НК, сборке зрелых частиц. У таких мутантов адсорбция фага обычно не нарушена. Следует отметить, одиако, что среди фагоустойчивых мутантов с нарушением внутриклеточного развития фага обычно выявляют лишь те мутанты, которые переносят осуществление определенных стадий развития фага. Обычным отбором не удается выявить мутанты, которые, ограничивая развитие фага, и сами погибают. Между тем именно такие мутанты были бы хорошим средством для гашения вспышки фаголизиса. Действительно, ранняя гибель инфицированной бактерии без образования даже минимального количества жизнеспособного фага способствовала бы тому, что вторичные мутанты фага, способные обойти такой тип устойчивости, отбирались бы редко. [c.203]

Бактериальные мутанты, не адсорбирующие фаг. В настоящее время наиболее надежный способ придания фагоустойчивости продуцентам. Поскольку разные фаги имеют часто разные адсорбционные рецепторы, очевидно, что для отбора фагоустойчивых бактерий необходимо использовать набор бактериофагов, активных на этих бактериях, с разными спектрами литической активности (в том числе фагов, относящихся к одной семье, если они различаются по специфичности адсорбции). Очевидно, что все это требует проведения предварительной работы по классификации бактериофагов и по изучению их адсорбционной специфичности. Обычно удается выделить мутанты бактерий, не адсорбирующие все взятые в исследование фаги, хотя иногда и встречаются существенные трудности. Во-первых, некоторые мутационные модификации структуры клеточной поверхности обладают плейотропным эффектом и влияют иа скорость деления клетки или продукцию клеткой метаболита. Во-вторых, иногда бактерии, изначально устойчивые ко всем известным фагам, активным против данного штамма, неожиданно приобретают чувствительность к этим фагам. [c.209]

Однако вывод из клетки многих метаболитов, по-видимому, осуществляется независимо от их поступления в клетку. Известны мутанты бактерий, у которых нарушен транспорт в клетку аминокислот и витаминов, но сохранилась способность к выделению этих соединений. [c.64]

Менее распространены одноступенчатые технолог получения триптофана на основе ауксотрофных мутантов бактерии Ba illus subtilis, осуществляемые по схеме, близкой к способу получения лизина. Длительность одноступенчатого процесса 48 ч, а концентрация триптофана в культуральной среде составляет 10 г/л. [c.49]

Известно много случаев, когда бескаротиноидные мутанты бактерий (в норме образующих каротиноиды) гибнут в результате совместного действия света и кислорода, в то время как окрашенные организмы, принадлежащие к дикому типу, в тех же условиях повреждений не получают. Защитное действие каротиноидов было продемонстрировано на примере как фотосинтезирующих, так и нефотосинтезирующих бактерий. [c.385]

Te TNew ombe (1959) помогает четко ответить на вопрос, возникают ли фагоустойчивые мутанты бактерий в результате прямой адаптации к среде, содержащей фаг, или они возникают спонтанно, т. е. когда добавление фага приводит лишь к отбору уже имеющихся в популяции устойчивых к фагу клеток [106]. Для этого наносят на поверхность чашек Петри с питательным агаром культуру чувствительных к фагу бактерий, которую выдерживают при оптимальной температуре в течение нескольких часов. В период указанного времени увеличивается численность популяции и образуются микроколонии. На половине чашек клоны затем перераспределяют на поверхности питательного агара шпателем после добавления 0,1 мл физиологического раствора. Другая половина чашек остается нетронутой (контроль). После этого все чашки Петри засевают специфическим фагом и выдерживают их в термостате. В итоге подсчитывают число колоний, развившихся из выживших устойчивых клеток. В случае прямой адаптации бактерий к фагу число устойчивых колоний на контрольных чашках всегда будет соответствовать числу их в чашках, где бактерии были перераспределены, так как перераспределение не изменяет числа бактерий на чашках. [c.110]

Опыты с мутантами бактерий не привели к выяснению природы предшественников дегидрохинной кислоты. Последовательность реакций, ведущих от глюкозы к дегидрохинной кислоте, выяснили, используя меченные соединения. Глюкозу, меченную в том или ином положении, добавляли к мутантам, накапливающим шикимовую кислоту. В шикимовой кислоте найдено следующее распределение изотопа. [c.432]

После человека Е. all является в настоящее время наиболее интенсивно изучаемым организмом . Бактерии можно подвергать действию радиации или мутагенных агентов, повреждающих их генетический аппарат, таким образом, чтобы вызвать специфическое изменение биосинтетических процессов, контролируемых соответствующими генами. В таком случае становится возможным идентифицировать промежуточные продукты реакций, накапливающиеся в культуре мутанта. Бактерии можно заморозить и затем разрушить, чтобы извлечь из них ферменты. Применение таких чрезвычайно жестких воздействий к другим организмам часто оказывается невозможным. Наконец, особенности процессов синтеза и распада у бактерий таковы, что позволяют им быстро расти на простых средах из минеральных солей с очень широким набором органических соединений в качестве источника углерода. В таких случаях иногда легче следить за химическими превращениями простого соединения, которым питаются микробы, чем за сложными веществами, которыми питаются высшие организмы. [c.29]

В развернутом и намечаемом дальше сочетании естественного отбора с химическим мутагенезом, примененным к обитателям промышленного химического очистного сооружения, есть много несходного с сельскохозяйственной и микробиологической селекцией. Так, в очистном водоеме выживание и размножение мутантов бактерий и низших растений, которые приобрели люсоб-ность сильнее разлагать загрязняющие химически, - продукты, протекает при сохранении ценозов активного ила. При этом особенно выгодно возникновение эффективных мутантов, быстрое размножение которых усиливает экологическую систему, сложившуюся до мутагенного вмешательства. [c.29]

Второй способ отбора мутантов использует различия в клетках хозяина. Известно, что путем отбора в популяции клеток Е. oli В можно найти отдельные клетки, резистентные к фагу Tg, т. е. несорбирующие частицы фага. Как уже упоминалось, эти клетки — результат наследуемой мутации. В них изменена оболочка таким образом, что отсутствует рецепторная группа для адсорбции дикого фага Tj. Подобный мутант бактерий называется Е. соИ В2. Однако мы можем мутировать сам фаг Tg, облучая ультрафиолето-вьш светом или действуя мутагенньвш веществами на клетки, зараженные фагом. И тогда получим новый мутант фага, отличный от дикого типа, способный адсорбироваться и паразитировать на бактериях Е. oli В2. [c.367]

При изучении мутантов бактерий мы сталкиваемся с мутированными белками, измененными в одном аминокислотном звене. Чаще всего подобные мутированные белки имеют одну и ту же антигенную специфичность и образуют одинаковые антитела. Гомологические белки разных видов животных также похожи по своему аминокнслотному составу, хотя и гораздо дальше отстоят друг от друга, чем мутанты в пределах вида. В этом случае антигенные свойства полностью различны. Например, сывороточный альбумин лошади и коровы не сильно отличаются по аминокислотному составу. Однако организм лошади не образует антител к своему белку, но легко образует к чун еродному альбумину коровы. Значит, в клетках лимфатической системы [c.501]

Иной характер носит регуляция ферментативной активности метаболитами, не имеющими стерического сходства с участниками ферментной реакции. Исследование этой аллостери-ческой регуляции началось меньше десяти лет назад при изучении различных мутантов бактерий, утративших способность к синтезу того или иного фермента и потому неспособных синтезировать соответствующий продукт. Такие мутанты хорошо растут на средах, содержащих достаточное количество продукта утраченной возможности биосинтеза. При этом часто происходит накопление и выделение микробными клетками в среду промежуточных продуктов—субстратов утраченного фермента. [c.241]

Микробиологический синтез лизина. Белки семян зерновых культур (пшеницы, ячменя, кукурузы и др.) не сбалансированы по содержанию незаменимых аминокислот и прежде всего лизина. Поэтому для удовлетворения потребностей животноводства в нашей стране, как и в ряде других стран (Япония, США, Франция, Испания, Югославия), организовано крупнотоннажное производство этой незаменимой аминокислоты. В основу производства положены технологии с использованием одноступенчатого микробиологического синтеза, которые включают промышленное культивирование ауксотрофных мутантов бактерий из рода СотупеЬас1егшт, способных к сверхсинтезу этой аминокислоты. Обычно у диких штаммов, из которых получены ауксотрофные мутанты, сверхсинтеза лизина не наблюдается, так как у них действуют механизмы саморегуляции. В клетках бактерий аминокислота лизин синтезируется из аспарагиновой кислоты через ряд промежуточных этапов, связанных с образованием полуальдегида аспарагиновой кислоты, дигидропиколино-вой кислоты и а,8-диаминопимелиновой кислоты, являющейся непосредственным предшественником лизина. Полуальдегид аспарагиновой кислоты является также одним из предшественников в синтезе аминокислот— треонина, метионина и изолейцина (схема I). [c.276]

В целях промышленного получения незаменимой аминокислоты триптофана разработаны технологии на основе использования ауксотрофных мутантов бактерии Ba illus subtilis с нарушенным синтезом фенилаланина и тирозина. Все технологические процессы организованы примерно по такой же схеме, как и получение лизина с помощью мутантов коринебактерий. Ферментация длится 48 ч при 37 С, концентрация триптофана в культуральной жидкости достигает 10 г/л. После отделения культуральной жидкости от клеток бактерий она упаривается и высушивается при 110—120°С. Высушенный продукт называют кормовым концентратом триптофана (ККТ). [c.282]

Добавим, что дефектные по способности к синтезу отдельных метаболитов мутанты бактерий могут получать преимущества в пх популяции в силу определенной экономии энергии, расходуемых материалов, и некоти- [c.94]

Ка к только на рубеже этого века для лечения болезней, вызываемых бактериями, стали использовать лекарственные препараты, сразу заметили, что воздействие на бактериальную культуру того или иного лекарственного препарата часто приводит к тому, что чувствительная к этому препарату культура превращается в форму, устойчивую к нему. Лекарственный препарат, взятый в таких количествах, которые наверняка убили бы исходных, чувствительных бактерий, не оказывал влияния на культуру устойчивых бактерий. С началом широкого использования сульфамидных препаратов (в 30-х годах) и антибиотиков пенициллина и стрептомицина (в 40-х годах) развитие у бактерий устойчивости к лекарственным препаратам превратилось в явление обычное и стало (и все еще остается) проблемой огромной практической важности. При попытках объяснить природу этого явления исходили из широко распространенного тогда мнения, что бактерии приобретают устойчивость к лекарствам только после того, как последние на них подействуют. Одним из наиболее выдающихся защитников этого взгляда был Сирил Хиншельвуд, который развил в своей книге Химическая кинетика бактериальной клетки негенную теорию адаптации к лекарственным препаратам. Хиншельвуд считал, что в тех немногих устойчивых бактериях, которые пережили воздействие лекарственного препарата, это лекарство вызвало сдвиг равновесного состояния метаболических реакций с обычного уровня на новый, уже менее подверженный влиянию этого препарата. Книга Хиншельвуда вышла в свет в 946 г., через три года после того, как Лурия и Дельбрюк уже показали спонтанное происхождение устойчивых к фагу мутантов бактерий. Поэтому казалось бы естественным сделать допущение, что наблюдаемое у бактерий изменение от чувствительности к лекарственному препарату к устойчивости также возникает в результате спонтанного мутирования небольшой части популяции чувствительных к лекарству бактерий. В присутствии лекарственного препарата происходит, по-видимому, жесткий отбор таких устойчивых мутантов, так как они могут расти в этих условиях, тогда как все чувствительные клетки дикого типа погибают. Но на Хиншельвуда флуктуационный тест не произвел впечатления, и он опубликовал несколько правдоподобных критических разборов его интерпретации. Он был настолько уверен в правильности своей кинетической теории адаптации, что даже уже в 1953 г. писал Путем, подобным тому, который предполагается рассматриваемой [кинетической] моделью, адаптационные изменения должны происходить настолько легко, что если бы это было не так, то трудно было бы уклониться от вопроса, почему это не так . Авторитет Хиншельвуда в области химической кинетики придавал вес его взглядам, и это, вероятно, на несколько лет задержало развитие генетики бактерий на его родине, в Великобритании. [c.148]

Демерец исследовал также механизм приобретения мутантами бактерий устойчивости к стрептомицину (фиг. 69). С помощью флуктуационного теста ему удалось показать, что устойчивые к стрептомицину мутанты Str Е. соН возникают спонтанно. Однако в отличие от пенициллина стрептомицин не дает ступенчатого обучения . Если на чашку с агаром, содержащим 100 мкг/мл стрептомицина, высеять чувствительную к стрептомицину культуру Е. oli Str , то на такой чашке могут образоваться колонии лишь около 1 бактерии из 10 высеянных. Если затем выделить клетки из некоторых из этих немногих выживших колоний, размножить их и высеять бактерии таких изолятов первой ступени на ряд чашек, содержащих возрастающие концентрации стрептомицина, то среди этих бактерий выявится по крайней мере три разных класса мутантов Str. Это будут а) мутанты с низкой устойчивостью, способные выдержать лишь 100 мкг/мл стрептомицина, т. е. ту концентрацию антибиотика, при которой они отбирались, и погибающие при более высоких концентрациях стрептомицина б) мутанты с промежуточной устойчивостью, которые могут выдержать до 500 мкг/мл стрептомицина в) мутанты с высокой устойчивостью, которые могут выдержать еще более высокие концентрации стрептомицина на чашке. При одной ступени отбора на 100 мкг/мл стрептомицина все эти три типа мутантов появляются примерно с одинаковой частотой. Поэтому Демерец сделал вывод, что признак Str контролируется тремя или большим количеством бактериальных генов sir, обладающих разной силой действия, причем частоты мутирования каждого из этих генов примерно одинаковы и составляют 10 мутаций на одну клетку на генерацию. Мутация в любом из этн х генов приводит [c.150]

Другой тип мутантов, сыгравших большую роль в развитии генетики фагов, был открыт Лурия, который еще в период зарождения генетики бактерий как науки изучал мутации Е. соН Топ - Ton т. е. от чувствительности к устойчивости по отношению к фагу Т1 (гл. VI). Аналогичные спонтанные мутации приводят к тому, что из чувствительных к фагу Т2 клеток Е. соН (Tto ) дикого типа образуются мутанты Tio ". Устойчивость этих бактериальных мутантов обусловлена структурной модификацией их клеточной оболочки, в результате которой не происходит стерео-специфической фиксации органов адсорбции отростка фага Т2 на соответствующих рецепторах клетки. В результате фаг уже не может присоединиться к клетке, и, следовательно, ДНК фага не может быть инъецирована внутрь клетки хозяина. Почему же тогда, несмотря на то что бактерии могут мутировать в устойчивую к фагу форму, в природе до сих пор существуют чувствительные к бактериофагу штаммы Почему в результате естественного отбора чувствительные формы не заменились устойчивыми Почему бактериальные вирусы до сих пор не лишились всех подходящих хозяев и не вымерли в результате этого Ответить на эти вопросы, как и на многие другие вопросы, касающиеся проблем эволюции, не так просто, однако одной из причин сохранения в природе бактериальных штаммов, чувствительных к фагу, могут быть открытые Лурия в 1945 г. мутанты с измененным спектром литического действия. Такие мутантные фаги с измененным спектром литического действия способны преодолеть устойчивость нечувствительных к фагу мутантов бактерий благодаря небольшим изменениям структуры органа адсорбции (по сравнению с фагом дикого типа). Эти структурные изменения позволяют мутантным органам адсорбции осуществлять стереоспецифическую реакцию с рецепторами мутантной фагоустойчивой бактерии, несмотря на модификацию клеточной оболочки, препятствующей присоединению фага дикого типа. Однако появление мутантов с измененным спектром литического действия ни в коей мере не может положить конец борьбе за существование, так как бактериальный штамм, устойчивый к фагу дикого типа и чувствительный к мутантному фагу с измененным спектром литического действия, может образовывать сверхустойчивый бактериальный мутант, устойчивый к обоим фагам. На появление сверхустойчивого бактериального штамма фаг, чтобы не оказаться побежденным, может ответить образованием мутанта со сверхизмененным спектром литического действия. Таким образом, сосуществование в природе бактерий и бактериальных вирусов поддерживается за счет тонкого мутационного равновесия, спасающего обоих антагонистов от полного вымирания. [c.280]

В 1914 г. В. Генри обнаружил среди выживших после облучения ультрафиолетовым светом бактерий большое количество, как он считал, наследственных вариантов, отличающихся от нормального типа по таким свойствам, как морфология колоний и патогенность. Из этого наблюдения Генри заключил (за 13 лет до того, как Мёллер доказал мутагенное действие рентгеновских лучей на плодовую мушку), что ультрафиолетовые лучи мутагенны для бактерий. Однако доказательство этого утверждения пришло лишь много лет спустя с расцветом в сороковых годах генетики бактерий, когда Демерец показал, что среди 10 клеток Е. соИ штамма Топ (чувствительного к фагу Т1), выживших после облучения определенной дозой ультрафиолетовых лучей, доля мутантов Топ более чем в тысячу раз превышает спонтанный уровень этих мутантов среди необлученных бактерий. Вскоре ультрафиолет стал одним из наиболее широко распространенных мутагенов, используемых для получения мутантов бактерий. Многие мутанты, которые упоминались в предыдущих главах, были отобраны среди клеток, выживших после облучения ультрафиолетом немутантного родительского штамма. Так, например, были получены использованные в опытах по конъюгации (гл. X) Hir- и Р -штам-мы Жакоба и Вольмана с множественными мутациями, а также мутанты Тгр Яновского, использованные для изучения тонкой генетической структуры генов trp (гл. XIV). Однако, хотя молекулярный механизм спонтанных мутаций, а также мутаций, индуцированных аналогами оснований и акридиновыми красителями, к 1960 г. был достаточно хорошо изучен (см. гл. XIII), выяснение механизма мутаций, вызванных ультрафиолетом — исторически первым и долгое время наиболее широко распространенным бактериальным мутагеном, — задержалось до тех пор, пока не был выяснен механизм репараций. [c.381]

Высокое сродство синтетаз к своим аминокислотам имеет важное значение для ауксотрофных мутантов бактерий, которые растут лишь в присутствии определенной аминокислоты. В ряде случаев было показано, что это объясняется мутацией в соответствуюш,ей синтетазе [621, 1390]. Мутация затрагивает центр связывания данной аминокислоты, в результате сродство фермента к данной аминокислоте уменьшается во много сотен раз, хотя его сродство к тРНК или АТР почти не меняется. Поэтому необходимо увеличить концентрацию данной аминокислоты, чтобы заставить фермент соединить ее со своей тРНК и обеспечить синтез белка. [c.35]

Если в окружающей среде имеется достаточное количество питательных веществ, то бактерии превращают субстраты в запасные вещества, служащие хранилищем углерода н эиергии. В качестве запасных веществ чаще всего откладываются полимерные углеводы, встречающиеся, например, у клостридиев, молочнокислых и фотосинтезирующих бактерий. Липиды, особенно полимерная оксимасляная кислота (ПОМ [1125]) тоже имеет большое значение. Известны не содержащие ПОМ мутанты бактерий (Hydrogenomonas), которые в норме образуют ПОМ [1638]. Видимо, у мутантов отсутствуют необходимые для этого ферменты. ПОМ и полимерные углеводы находятся в клетках в твердой форме п, следовательно, осмотически неактивны. При нео.бходимостн они используются как субстраты для энергетического катаболизма. Некоторые бактерии могут одиов.ременно запасать вещества нескольких разных типов. [c.86]

Аргинин — одна из семнадцати аминокислот, определяемых с помощью 5. equinus. Для других аминокислот и витаминов приемы определения сходны. Ссылки на специфические методы, используемые для определения других факторов роста, даны в обзоре Гирарда и Снелла [70]. Для изучения путей синтеза и распада витаминов и аминокислот успешно используют мутанты бактерий — ауксотрофы по одному или нескольким веществам, [c.261]

Однако раскрытие механизмов регуляции репликации затрудняется сложным, многоэтапным характером этого процесса и его легкой повреждаемостью, препятствующей воспроизведению in vitro в полностью реконструированной системе. До сих пор большая часть работ по изучению репликации ДНК осуществляется в модельных фаговых системах (фаги G4, М13, ФХ174 Т-фаги и др.). Значительные успехи достигнуты также при использовании термочувствительных мутантов бактерий, у которых процесс репликации ш.)вреждается при температурах выше оптимальной (ls-мутанты). [c.31]

Мутанты бактерий с нарушенн0й--а дсорбцией бактериофагов. Обычно отбор фагоустойчивых мутантов бактерий не представляет особого труда — достаточно смешать большое количество чувствительных бактерий с избытком фага (в жидкой среде или на поверхности твердой питательной среды). Выросшие в этих условиях инкубации колонии после нескольких последовательных пересевов (для очистки от сопутствующего фага) проверяются на наличие признака фагоустойчивости. Как правило, среди клеток удается найти достаточно много мутантов с нарушеппой адсорбцией фага. Однако иногда их выявить трудно или не удается вовсе (либо из-за трудностей определения адсорбции некоторых фагов в жидкой среде, либо в том случае, когда среди устойчивых форм преобладают мутанты, нарушающие внутриклеточное развитие фага). Иногда отобранные в присутствии избытка фага бактериальные клоны после очистки и проверки оказываются неотличимы от исходных чувствительных бактерий. Это бывает, как отмечалось выше, в ряде случаев псевдолизогении (носительства). [c.198]

Рис. 9.9. Сопоставление результатов изучения роста разных фагов на разных адсорбционных мутантах бактерий с мутациями типа замен в гене lamB с видом формальной схемы рецепторов.

Пока нет установившегося мнения о пределах коэволюции рецепторов для фага на поверхности бактерий и адсорбционного аппарата фага. Некоторыми исследователями возможности такой коэволюции признаются беспредельными, т. е. предполагается, что в отношении каждого адсорбционно-устойчивого мутанта бактерий можно получить соответствующий мутант фага с расширенным спектром литической активности. Даже из общих соображений это предположение не представляется убедительным. Согласно другой точке зрения, имеющей экспериментальные подтверждения, пределы коэволюции системы бактерия — фаг суп1,ествуют огра- [c.200]

Одноступенчатый способ биосинтеза осуществляют с помощью спороносных штаммов-мутантов бактерий Вас. subtilis, синтезирующих до 10 г триптофана в 1 л культуральной жидкости. Двухступенчатый способ основан на проведении в промышленных масштабах трансформации антраниловой кислоты [c.46]

Это водорастворимые белки, обладающие высоким сродством к некоторым аминокислотам, витаминам, пептидам, сахарам и органическим кислотам. Сами они не могут транспортировать субстраты через плазматическую мембрану, но способны стимулировать активность мембранных компонентов системы транспорта. Исследование мутантов бактерий, дефектных по синтезу определенных связывающих белков, показало, что они соверщен-но необходимы для активного транспорта их субстратов. [c.60]

Многие успехи современной молекулярной биологии и селекции микроорганизмов основаны на применении индуцированного мутагенеза in vivo (см. гл. 2). Типичная схема опыта по получению мутантов бактерий и фагов заключается в обработке клеток мутагеном и скрининге среди потомков клеток с измененным фенотипом. Далее следует огромная работа, связанная с картированием мутаций, доказательством отсутствия других мутаций, влияющих на фенотип. Хотя метод этот чрезвычайно трудоемок, он обладает тем преимуществом, что не нуждается в предварительных гипотезах и знаниях относительно роли того или иного белка в проявлении данного фенотипа. Метод мутагенеза и ступенчатого отбора позволяет вести селекцию продуктивных штаммов микроорганизмов, недостаточно генетически изученных, и получать продуценты метаболитов, для которых не установлен путь биосинтеза. Велико значение индуцированного мутагенеза как поставщика новой информации для исследователей, занимающихся молекулярной биологией и биохимией. Расшифровка на молекулярном уровне новых мутантных фенотипов открывает возможности выяснения путей биосинтеза и ре-гуляции метаболизма нормальной клетки. [c.159]

Набор клонов со случайными транспозициями ТпЮ получают в точности так, как это описано в эксперименте 1. Смещи-вают примерно 2000—5000 таких клонов и на такой смеси инсерционных мутантов бактерий выращивают фаг, осуществляющий неспецифическую трансдукцию. Затем полученным препаратом фага трансдуцируют какой-нибудь мутант па интересующей области. Проводят отбор клеток, у которых восстановлена мутантная функция (в данном случае отбирают клетки с замещенной областью ригВ). Каждый трансдуцированный фрагмент получен от донорной клетки, которая в какой-то точке хромосомы содержала ТпЮ. Вероятность того, что переданный при трансдукции фрагмент хромосомы донора с геном ригВ+ получен от клетки со вставкой ТпЮ, находящейся вблизи этой интересующей нас области, оказывается вполне удовлетворительной (около 0,01). В этом случае элемент ТпЮ может наследоваться вместе с селектируемой областью. В действительности от [c.24]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология