Клетки млекопитающих, культивирование

Обеспечение кислородом. Хотя клетки млекопитающих потребляют несравненно меньше кислорода, чем микроорганизмы, обеспечение гибридомных клеток кислородом в ходе культивирования является одним из наиболее важных факторов. Определяющих общую эффективность процесса. Многие системы [c.41]

Разнообразие питательных веществ д средах для культивирования клеток млекопитающих служит предпосылкой к строгому соблюдению мер предосторожности в целях предотвращения загрязнения их вирусами, микоплазмами, бактериями, грибами В сравнительном плане клетки прокариот и эукариот заметно различаются по скорости роста Поэтому, например, животные и большинство растительных клеточных систем уступают в конкуренции микробным системам [c.143]

Одно из наиболее перспективных направлений генной инженерии — выращивание лекарств на ферме , т. е. получение относительно больщих количеств редких и дорогих белков, применяемых в медицине, из молока трансгенных коров или овец. Дело в том, что не все лекарственные препараты можно получить с помощью бактерий тем способом, который описан для инсулина и гормона роста человека. Во многих случаях для экспрессии белка необходима очень точная его укладка или модификация с использованием аппарата, имеющегося только в клетках млекопитающих. Так, к некоторым аминокислотам белка фактора IX уже после его синтеза должна добавляться группа —СООН. Крупномасштабное культивирование клеток, продуцирующих эти белки, теоретически возможно, однако оно потребует больших затрат и технически трудно выполнимо. [c.235]

Рассмотренные материалы по изменению митотического индекса в процессе культивирования — это лишь примеры, подтверждающие принципиальную возможность и перспективность раздельной оценки параметров модели обратимого равновесного автокаталитического роста. Определение митотического индекса культуры даже таких сравнительно крупных по размерам микрообъектов, как клетки млекопитающих, не относится к числу общедоступных методик. При подсчете числа делящихся клеток под микроскопом воспроизводимые результаты могут быть получены только опытным специалистом морфологом. Для широкого практического использования требуется метод, который бы не был так тесно связан с субъективным восприятием исследователя. [c.154]

Культура клеток млекопитающих. Для исследования были взяты культуры животных клеток линии ВНК-21 (клетки почки новорожденного хомячка) и линии L (клетки подкожной жировой клетчатки мыши). Клетки этих линий обладают способностью к самостоятельному росту в условиях пристеночного и суспензионного способа культивирования. [c.144]

В костном мозге млекопитающих находится определенное число клеток, роль которых состоит в замещении погибающих разных типов клеток крови. Эти клетки костного мозга (стволовые клетки) способны к неограниченному делению и могут дифференцироваться в разные типы клеток, обнаруживаемые в периферической крови. Если мышь облучить в дозе порядка 2-10 Гр, то облучение вызовет ингибирование деления в популяции стволовых клеток костного мозга. Это приведет к тому, что животное будет страдать от недостатка разных типов клеток в периферической крови, что в итоге может вызвать гибель животного (см. гл. 6). Спасти жизнь такого критически облученного животного можно внутривенным введением необлученных клеток костного мозга. Эти трансплантированные клетки делятся, репопулируют костный мозг (восстанавливают численность клеток) облученной мыши, обеспечивая периферическую кровь необходимым количеством дифференцированных клеток (см. также с. 77). Метод, разработанный для определения радиационной выживаемости клеток костного мозга ин виво, основан на том, что доля введенных клеток костного мозга оседает в селезенке облученной мыши. Там клетки делятся и образуют колонии или "узлы", состоящие приблизительно из 10 клеток, которые хорошо видны через 10 сут после введения. На рис. 5.3 показаны технические подробности метода, который заключается в следующем. Мышь-донор забивают и у нее удаляют бедро. Клетки костного мозга осторожно берут из центральной полости кости при помощи шприца для подкожных инъекций, содержащего среду для культивирования клеток. Подсчитывают число ядерных клеток костного мозга в суспензии и разное число клеток вводят внутривенно определенному количеству реципиентов. Мышей-реципиентов предварительно облу,чают в целях подавле- , [c.69]

При всех различиях между типами эукариот методические подходы к культивированию клеток насекомых, растений и млекопитающих имеют много общего. Сначала берут небольшой кусочек ткани данного организма и обрабатывают его протеолитическими ферментами, расщепляющими белки межклеточного материала (при работе с растительными клетками добавляют специальные ферменты, разрушающие клеточную стенку). Высвободившиеся клетки помещают в сложную питательную среду, содержащую аминокислоты, антибиотики, витамины, соли. [c.27]

Периодическую ферментацию с добавлением субстрата можно использовать для культивирования не только микроорганизмов, но и клеток млекопитающих и насекомых. Это очень важно, поскольку 1) такие культуры все шире применяются для получения белковых продуктов, имеющих медицинское значение 2) без периодического добавления субстрата животные клетки не очень эффективно синтезируют чужеродные белки. [c.353]

Неопределенно длительное время можно выращивать клетки млекопитающих в непрерывных хемостатных культурах, когда удается добиваться постоянства концентрации лимитирующего субстрата и плотности клеток (см. главу 7). Теория и практика непрерывного культивирования впервые сформулированы в 1950 г. Ж. Моно, и, независимо от него, А. Новиком и Л. Сцилардом, предложившими термин "хемостат". В хемостатах скорость подачи свежей среды и отбора культуры равны (как и объем их). Скорость роста, развития и размножения клеток контролируется скоростью подвода лимитирующего компонента, а численность — его концентрацией. В качестве лимитирующего рост агента чаще всего используют глюкозу, реже — фосфат и другие вещества. При правильном подборе условий выращивания в хемостатах удается на порядок увеличить выход клеток по сравнению с периодическим культивированием. Причем, хемостатные культуры отличаются накоплением физиологически однотипных клеток. Это можно показать на примере с клетками лейкемии мышей — L 1210 (таблица 55), которые засевали (инокулят) в концентрации 2 10 клеток/мл для периодического культивирования, длившегося 3 суток до пол П1ения максимальной плотности 2,5 10 клеток/мл (суспензионные культуры). При хемостатном культивировании скорость подачи среды и отъема культуры составляла 0,3 сут . [c.543]

Потенциальная контаминация названных выше продуктов возможна из рааллчных источников от лиц, чьи клетки используются в биотехнологических процессах, от миеломных клеток, применяемых для получения гибридов, из питательных сред для культивирования клеток млекопитающих, из реагентов, используемых для очистки белковых продуктов, например, моноклональные антитела, наконец, несоблюдение требований GMP [c.256]

Аналогичные результаты получены при культивировании гриба Aspergillus oryzae. Хотя максимальная удельная скорость роста этого микроорганизма почти в 10 раз выше, чем популяции клеток млекопитающих, но на ее величину не повлияло восьмикратное изменение запаса субстрата в питательной среде. Это говорит о там, что максимальная логарифмическая скорость роста в первую очередь зависит от качественных особенностей системы клетка — среда. У разных микроорганизмов, а также у одних и тех же микроорганизмов, но культивируемых на средах, состав которых качественно отличается, лимитирующие стадии биосинтеза могут быть не одними и теми же. [c.163]

Есть химические соединения, которые не влияют на саму ДНК, но нарушают ре-паративные процессы. Наиболее широко известен среди них-кофеин. Это вещество не индуцирует каких-либо хромосомных аномалий у млекопитающих, согласно результатам, полученным в тест-системах in vivo, однако в его присутствии в культурах лимфоцитов человека обнаруживаются хромосомные бреши и разрывы. Вероятно, условия культивирования приводят к значительным повреждениям ДНК, которые в норме репарируются, а в присутствии кофеина-нет. Доказательство, что кофеин действительно является ингибитором репарации, получено в исследованиях на низших организмах [1419 1604]. При применении вместе с алкилирующим мутагеном кофеин увеличивал число хромосомных разрывов и транслокаций в клетках костного мозга китайского хомячка. Такие синергические эффекты мутагенных агентов легко могут пройти незамеченными и могут иметь важное значение для людей, подвергающихся воздействию разнообразных потенциальных мутагенов. [c.264]

Реовирусы эффективно размножаются в большинстве клеточных линий млекопитающих. Принимая во внимание столь широкий круг хозяев, а также высокую стабильность вирусов, при работе с реовирусами следует соблюдать особую осторожность, чтобы не допустить случайной контаминации культур. Чаще всего для размножения реовирусов используют Ь-клетки мыши достоинство этих клеток состоит в том, что при правильном культивировании их можно легко переводить из монослойной культуры в суспензионную и обратно. Для размножения вирусов удобнее всего поддерживать суспензионную культуру Ь-клеток в стерильных плоскодонных колбах при 37°С. Для культивирования клеток используют модифицированную йокликом основную минимальную среду, содержащую 5% ЭТС высокое содержание фосфатов в этой среде обеспечивает поддержание нужного значения pH без пропускания СОг. Плотность суспензии должна составлять 5-10 —ЫО кл/мл, что достигается при пересеве клеток из каждой колбы в две новые один раз в сутки. Если Ь-клетки поддерживаются в суспензионной культуре в течение длительного времени (более 4— [c.202]

Соматические клетки - это клетки всех органов и тканей организма за исключением половых клеток. Усовершенствование методов культивирования соматических клеток вне организма определило возможность новых путей изучения генетики высших организмов, применяя наряду с методами классической генетики методы молекулярной биологии. Это послужило предпосылкой для возникновения нового раздела генетики - сначала генетики соматических клеток, а затем, с развитием методов генной инженерии, и молекулярной генетики соматических клеток. Специфические особенности соматических клеток позволяют успешно эксплантировать из организма различные типы клеток и поддерживать их в культуре в течение длительного времени в специально разработанных питательных средах, включающих наборы аминокислот, витаминов, сахаров, а также сыворотки крови, содержащей различные ростовые факторы. Наибольшее развитие получила молекулярная генетика соматических клеток млекопитающих, что, безусловно, связано с появившейся возможностью постановки прямых экспериментов с клетками человека. В настоящее время разработаны специальные методы культивирования различных клеток человека (фибробластов, глиальных и эндотелиальных клеток, клеток крови и др.) при сохранении нормального кариотипа и других признаков нормальных клеток в течение длительных сроков культивирования. Такие диплоидные штаммы используются для различных экспериментов, в частности, при приготовлении противовирусных вакцин. [c.249]

Поскольку культивирование ранних зародышей млекопитающих является труд1ЮЙ задачей, клетки эмбриональной карциномы дают исследователям уникальную возможность для анализа раннего развития млекопитающих. Кроме того, благодаря способности клеток эмбриональной карциномы мутировать в культуре при инъекции таких клеток в бластоцисты можно также создать мышей, мутантных почти по любому гену. [c.224]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология