Биогели в хроматографии

Молекулярно-ситовая хроматография. При данном виде хроматографии используется способность материалов с контролируемой пористостью сортировать и разделять компоненты смеси в соответствии с размерами и формой их молекул. Для осуществления процесса гель-хроматографии используются гели поперечно-емкостного декстрана (сефадексы и сефакрилы), поперечно-сшитые полиакриламидные гранулы (биогели), агарозные гели с выраженными в них цепями акриламидного полимера (ультрагели) и более жесткие поперечно-сшитые агарозы (СЬ-агарозы и сефакрилы-8), с помощью которых можно быстро разделить макромолекулы в соответствии с их размером. Степень удерживания растворенного вещества на колонке зависит от его способности проникать в поры геля. Поэтому при гель-фильтрации сначала выходят высокомолекулярные вещества, а затем вешества в порядке убывания их моле- [c.55]

Для фракционирования нуклеозидов можно использовать продажные гель-фильтрующие материалы Сефадекс G10 и G15 и Биогель Р2. Преимущества этих материалов в том, что элюируемые вещества не размываются по колонке, количественно снимаются с колонки и нет необходимости применять солевые градиенты. Также маловероятно, что в условиях гель-фильтрации будут протекать какие-либо химические процессы деградации лабильных нуклеозидов, т. е. что-либо похожее на процессы, обязательно происходящие при ионообменной и адсорбционной хроматографии. 127]. [c.74]

Для тонкослойной гель-фильтрации слой носителя готовят из самых мелких гранул геля. Из препаратов, имеющихся в продаже, применяются гели декстрана марки сефадекс сверхтонкий или полиакриламидные биогели марки —400 меш . В описанных в литературе методиках тонкослойной гель-хроматографии в основном [c.238]

Для разделения замещенных амидов применяли также гель-хроматографию. Стационарной фазой служили биогели Р-2 и Р-6, подвижной фазой — 0,01 М раствор хлорида натрия. Коэффициенты распределения приведены в табл. 31.2 [8]. [c.300]

АФФИННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ КЛЕТОК НА БИОГЕЛЕ Р-6 СО СВЯЗАННЫМ ГАПТЕНОМ [86] [c.38]

Полиакриламидные гели для гель-хроматографии получают эмульсионной полимеризацией. Их производит и поставляет в виде сухих порошков под названием биогели фирма Bio- [c.351]

Для гель-хроматографии применяют в зависимости от целей гидрофильные и гидрофобные сорбенты. В качестве гидрофильных сорбентов применяют декстрановые гели (сефадексы и мол-селекты), полиакриламидные гели (биогели), оксиалкилметак-рилатные гели (сфероны) и т. д. Сефадексы получают из декстрана [c.237]

Использование гель-фильтрации для освобождения от радиоактивных предшественников неоднократно цитировалось при описании методов введения радиоактивной метки в белки и нуклеиновые кислоты [Остерман, 1983]. Нередко обессоливание используют и на заключительном этапе очистки для освобождения не только от соли, но и от прочих низкомолекулярных примесей. Например, в одной из работ по выделению РНК-полимеразы очисткой белка на биогеле А-1,5т завершалась целая серия операций, включавшая различные варианты переосаждений белка и ионообмениой хроматографии [Vaisius, Horgen, 1979]. [c.138]

Наиболее широкое распространение среди носителей для гель-хроматографии белков получили сорбенты, приготовленные на основе декстрана (сефадексы, сефакрилы, молселекты), полиакриламида (биогели Р, акрилексы) и агарозы (сефарозы, биогели А) и др. Набухая в воде, они образуют гели. [c.106]

Гель-хроматография. Раствор фосфофруктокиназы наносят на колонку (4x50 см), заполненную биогелем А—1,5т, предварительно уравновешенную буфером Б. Этим же буфером проводят элюцию белка с колонки. Во фракциях измеряют концентрацию белка и ферментативную активность. Фракции белка, содержащие наибольшую активность, объединяют. К объединенному раствору добавляют сульфат аммония до 557п-ного насыщения. Продолжают перемешивание в тече- [c.244]

Повторная гель-хроматография. Раствор фосфофруктокиназы наносят на колонку (2,2x60 см), заполненную биогелем А—1,5т, уравновешенную буфером А. Фермент элюируют тем же буфером. Фракции с наибольшей удельной активностью объединяют. [c.245]

При разделении защищенных нуклеозидов, например ано-мерных рибофуранозилпроизводных урацила, в качестве сорбента с успехом используют нейтральную окись алюминия, а в качестве элюента — смеси бензола и этилацетата в разных пропорциях [44, 45, 84, 85]. В табл. 37.6 приведены значения Ка основных нуклеозидов на колонке с сефадексом на основании этих данных можно оценить возможность разделения той или иной смеси методом гель-проникающей хроматографии при использовании элюентов различного состава [47, 48, 67—69]. Хорошие результаты дает разделение на обычных или специально фракционированных биогеле Р-2 [86, 87] и сефадексе 0-10 [88]. Показано, что эти два геля можно использовать для определения нуклеотидного состава нуклеиновых кислот (рис. 37.11). Биогель Р-2 применяют также для разделения нуклеозидов в присутствии большего количества нуклеотидов, которые в этом случае элюируются существенно быстрее, чем на сефадексе 0-10. Хроматографию на биогеле Р-2 или сефадексе 0-10 неоднократно использовали в качестве микроаналитического метода при определении нуклеозидного состава энзиматических гидролизатов ДНК [89—91] и идентификации концевых нуклеотидов [92]. Смесь рибо- и дезоксирибонуклеозидов разделяли на колонке с фракционированным биогелем Р-2 в буферном растворе (pH 10,1), содержащем тетраборат натрия (рис. 37.12) [87]. Для отделения тимидина от 5-бром- и 5-иоддезоксиуридинов предложено проводить хроматографию на сефадексе 0-10 в фос-фатноцитратном буферном растворе с pH 3,5 [93, 94]. [c.53]

При хроматографии на молекулярных ситах мононуклеотиды обычно элюируются в одной зоне. Тем не менее сефадекс G-10 и биогель Р-2 можно использовать для разделения полифосфатов аденозина и тимидина в соответствии с их молекулярными массами (при элюировании формиатным буферным раствором с рн 6 [47]) или, например, при изучении взаимодействия нуклеотидов с ионами металлов [116]. Молекулярные сита успешно применяли при разделении олиготимидиловых кислот и при изучении влияния концевой фосфатной группы на результаты разделения [69, 117]. [c.56]

Показано, что при хроматографии олигонуклеотидов на сефадексах G-25, G-50, G-75 и G-100 в 0,5 М бикарбонате аммония (pH 8,6), содержащем 8 М мочевину, компоненты разделяются в соответствии с длиной цепи [97]. Благодаря присутствию мочевины в этом случае удается исключить влияние пуриновых оснований на результаты разделения. Широкий круг сорбентов (сефадекс, биогель, ОЕАЕ-целлюлозу, гидроксиапатит) использовали при изучении биосинтеза олигодезоксирибонуклеотидов. в клетках млекопитающих методом импульсной метки (118]. [c.58]

Хроматографию проводят на термостатированной колонке (2,5X ХЮО см) с биогелем А-15 (100—200 меш) (Bio-Rad. Labs., Ri hmond, alif., U.S.A.) O скоростью подачи 30 мл/ч. В качестве образца наносят 0,4—0,8 мл рибосомального препарата с поглощением примерно 3,00 при 260 нм. Анализ элюата ведут, измеряя оптическую плотность при 260 нм. Типичный пример разделения рибосомальных препаратов на биогеле А-15 приведен на рис. 50.1. [c.312]

В литературе имеется довольно мало работ относительно применения гель-хроматографии к этому классу веществ (среди них два обзора Граната [89, 90], а также несколько работ, котррые мы уже упоминали в разделе о распределении по молекулярному весу (см. стр. 179). Возможно, это обусловлено опасениями загрязнить углеводы следами декстрана, который постоянно вымывается из сефадекса (см. стр. 49). В связи с этим для разделения углеводов (главным образом при количественной оценке), по-видимому, более предпочтителен не содержащий углеводов полиакриламидный гель (биогель) [91]. [c.224]

Емкость нерастворимых аффинантов, приготовленных путем присоединения 3 -(4-аминофенилфосфорил)дезокситимидин-5 -фосфата к производным сефарозы 4В и биогеля Р-300, в аффинной хроматографии стафилококковой нуклеазы [c.70]

Главный производитель полиакриламидных гелей — фирма Bio-Rad Labs.— выпускает их под названиями биогели Р получают эти гели сополимеризацией акриламида и N N-метиленбисакрил-амида. Биогели Р имеют различные размеры пор биогель Р-2— предел исключения молекулярной массы 1800, биогель Р-300— предел исключения 400 000. Все марки биогеля выпускаются с размерами гранул 50—100, 100—200, 200—400 и 400 мещ. Наряду с перечисленными фирма производит ионообменные производные этих гелей, например слабокислый катионообменник биогель СМ, а также промежуточные продукты для получения сор-6eHT0iB для аффинной хроматографии, такие, как аминоэтильное и гидразидное производные биогелей Р-2 и Р-60. [c.200]

Пример использования линейного концентрационного градиента соли для выделения РНК-полимеразы из Es heri hia oli на ДНК-агарозе [29] показан на рис. 10.9. Из фракции РНК-полимеразы, выделенной в результате предварительной стадии очистки хроматографией на биогеле А, неактивный материал отделяется аффинной хроматографией в виде первого пика, далее линейным [c.269]

Из перечня носителей, приведенного в разд. 7.3, следует, что наиболее часто используются для аффинной хроматографии агароза и ее производные. Хорошо известны промышленные препараты сефароза и биогель А. Сефароза — прО(Мышленное название сферического геля агарозы, выпускаемого фирмой Pharma ia Fine hemi als АВ (Швеция). Сефароза продается в набухшем состоянии, суспендированная в дистиллированной воде, содержащей 0,02% азида натрия в качестве бактериостатического агента. [c.13]

Считается, что сефароза устойчива в области pH 4—9 с ней не рекомендуется работать при температурах иже 0°С или выше 40 °С. Сефароза устойчива к действию концентрированных растворов солей или мочевины. Куатреказас [14] указывает,, что на частицы агарозы существенно не влияет продолжительное воздействие 6М раствора гуанидинхлорида или 7М раствора мочевины. Поэтому агарозные аффинные сорбенты можно отмывать от белков этими денатурирующими растворами. В течение 2—3 ч при комнатной температуре на агарозу не действуют 0,1М гидроксид натрия или 1М хлорная кислота. Ни 50%-ный (по объему) водный диметилформамид, ни 50%-ный (по объему) водный этиленгликоль не меняют структуру агарозы. Эти растворители полезны при аффинной хроматографии относительно плохо растворимых в воде соединений, например тироксина и стероидов. Аффинные сорбенты на основе сефарозы можно хранить при 4° С в виде водной суспензии с до бавкой антибактериального агента. Длительность хранения определяется лишь стабильностью связанного аффинного лиганда. Однако агарозные аффинные сорбенты полностью разрушаются при высушивании или замораживании. Согласно данным Аксена и Эрнбека )[3], эти сорбенты можно лиофилизовать, если добавить к ним декстран, глюкозу и сывороточный альбумин. Химическая стабильность биогеля А такая же, как у сефарозы. [c.16]

Применение акриламидных гелей в аффинной хроматографии в настоящее время весьма ограниченно. Куатреказас [14] показал, что выделение относительно малой молекулы нуклеазы стафилококков можно проводить не только на сефарозе, но и на биогеле Р-300, однако для выделения больших молекул, например р-галактозидазы [84], этот гель мало пригоден из-за низкой пористости. [c.39]

Для ТСХ пригодны также биогели Р —гели полиакриламида, выпускаемые фирмой Bio-Rad Labs. (см. гл. 6, разд. 6.2.3). Эта же фирма выпускает неорганический сорбент биоглас с пятью заданными интервалами размеров пор (от 200 до 2500 А), пригодный для гель-хроматографии белков, вирусов, сахаридов и липидных комплексов. [c.109]

К пористым материалам для гелевой хроматографии предъявляются требования ограниченной набухаемости в используемых растворителях и отсутствия взаимодействия с исследуемым образцом Для улучшения гидродинамических условий в хромаюграфической колонке пористые материалы должны быть сформованы в виде шариков диаметром 0,03—0,1 мм. Гель должен обладать незначительным объемом, непроницаемым для макромолекул. Для разделения гидрофильных объектов используются сефадекс [31] — сшитый эпихлоргидрином декстран и биогель Р — сшитый полиакриламид [32] соответственно с проницаемостью для макромолекул с молекулярным весом до 200 000 и 400 000 и агароза, или биогель А — сшитый полисахарид агар-агар с очень крупными порами, доступными для молекул с молекулярным весом до 1 500 ООО [33]. [c.106]

Rad Laboratories (Ричмонд, Калифорния, США). Подобно се- фадексу, биогель представляет собой ксерогель, самопроизвольно набухающий при добавлении к нему воды с образованием частиц, пригодных для хроматографии. Выпускаются 10 марок этого материала с различными хроматографическими характеристиками обозначают торговые марки биогеля буквой Р и числом (от Р-2 до Р-ЗОО) (табл. 6.3), это число, умноженное на 1000, соответствует верхнему пределу исключения для данного геля. [c.352]

В биоспецифической хроматографии широко использовались набухающие полимерные органические сорбенты-носители типа сефа-дексов [156], сефарозы [157] и биогелей [158]. Эти полимеры содержат гидроксильные группы, которые обеспечивают их гидрофильность [c.251]

Ситовая (гель-фильтрационная) хроматография связана в основном с различием в скоростях диффузии молекул и макромолекул компонентов смеси в поры соответствующих сорбентов, в частности набухающих органических пористых полимеров — сефадексов, биогелей, а также ненабухающих макропористых силикагелей или силохромов и макропористых стекол. В этом случае вещества с большими молекулярными весами, образующие наиболее крупные частицы, практически не диффундируют в поры и поэтому элюируют первыми. Удерживаемые объемы таких веществ на подходящих по размерам пор ситах увеличиваются с уменьшением их молекулярных весов или объемов. Это позволяет разделять олигомеры и смеси полимеров по молекулярным весам и в благоприятных случаях определять их размеры или молекулярновесовое распределение, а также производить препаративное фракционирование полимеров, очистку вирусов и бактерии [8]. [c.414]

Смотреть страницы где упоминается термин Биогели в хроматографии: [c.275] [c.25] [c.25] [c.302] [c.122] [c.124] [c.49] [c.245] [c.38] [c.40] [c.309] [c.311] [c.213] [c.64] [c.69] [c.108] [c.186] [c.384] [c.8] [c.21] [c.324]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология