Иммуноглобулины

Субъединицы иммуноглобулинов построены из 2 тяжелых Н-цепей, состоящих из 426 аминокислотных остатков и 2 легких /.-полипептидных цепей, имеющих 214 аминокислот, соединенных между собой дисульфидными мостиками (рис. 89). По современной классификации, иммуноглобулины человека подразделя- [c.206]

Препарат антигена — очищенные иммуноглобулины класса О из сыворотки мыши (IgG). [c.307]

Очистка иммуноглобулинов класса М (IgM) Реактивы [c.316]

Берут 1,5 мг препарата щелочной фосфатазы и центрифугируют при 4500 g в течение 20 мин при 4 С. Осторожно удаляют супернатант и к осадку добавляют 0,5 мг очищенных иммуноглобулинов в концентрации 2,5 мг/мл в фосфатном буфере. Объем смеси доводят до 0,2 мл [c.318]

ИММУНОГЛОБУЛИНОВ С ФЕРМЕНТНОЙ МЕТКОЙ [c.318]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КЛАССОВ И ПОДКЛАССОВ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ [c.321]

Определение классов и подкласс ов антител важно для выбора способа их очистки. Классы и подклассы моноклональных иммуноглобулинов, секретируемых специфическими гибридомами, определяют прямым методом ИФА (рис. 41). [c.322]

Видно, что при фиксированной концентрации антитела равновесное отношение концентраций связанного и свободного антигена зависит от его общей концентрации. Этот вывод лежит в основе всех иммунохимических методов. По существу антитела выступают в роли реагентов биологического происхождения, которые с высокой специфичностью способны узнавать чужеродные вещества. Обычно они представляют собой иммуноглобулины - белки сыворотки крови, которые образуются в ответ на введение иммуногена. Однако многие ни комолекулярные соеданения, в том числе и пестициды, сами по себе не стимулируют обргиование антител, т е. не являются иммуногенами. Индуцировать их образование можно лишь после связывания этих веществ с белком-носителем, в качестве которого, как правило, применяют бычий альбумин. Следует заметить, что в реакции с белком-носителем не должны затрагиваться те группировки молекул антигена, которые участвуют в образовании комплексов антиген-антитело и которые, следовательно, необ.ходимы для индуцирования образования в организме животного специфических антител. [c.298]

В последнее время большое внимание уделяется специфическим белкам — иммуноглобулинам, которым придается важное практическое значение. Иммуноглобулины также должны быть отнесены к сложным белкам, так как в их состав входят от 2,9 до 12% углеводов. Иммунопротеиды обладают общими характерными сво11ствами так, при электрофорезе они распределяются главным образом в 7-глобулиновой и отчасти — в р-глобулиновой зонах (рис. 88) электрофореграммы белков сыворотки крови (см. стр. 218). Общими для них являются одинаковые принципы строения, ряд антигенных свойств, а также все они обладают активностью антител. [c.206]

Сайт-специфические рекомбинационные системы есть и у эукариот Некоторые из них очень напоминают бактериальные, однако бйлогический смысл рекомбинации в этих случаях, как правило, неясен. В единственном случае, когда роль сайт-специфической ре-К0(бинации вполне понятна, не известен механизм рекомбинации. Эт1т случай — сборка из вариабельных и константных частей функ-ИИ1нальных генов иммуноглобулинов и рецепторов Т-клеток. [c.108]

Если белок содержит ряд структурно сходных повторяющихся доменов, то наблюдается строгое соответствие отдельных экзонов доменам или субдоменам белковой молекулы. Гены, относящиеся к так называемому сверхсемейству генов иммуноглобулинов , содержат разное число экзонов, кодирующих домены полипептидной цепи, каждый из которых включает около ПО а. о. Гомология между отдельными доменами этих белков, выполняющих разные функции в организме, наблюдается на уровне первичной, вторичной и третичной структуры. Гены этого семейства могут содержать один экзон (ген р2-микроглобулина), два или четыре (гены секретируемых антител В-клеток) и, наконец, пять экзонов (ген гликопротеина плазмы человека). р-Кристаллины мыши содержат четыре белковых домена, каждый из которых включает определенный структурный мотив полипептидной цепв , "щ х [c.192]

Опыты с искусственными генными конструкциями, составленными из отрезков ДНК разного происхождения, выявили существование особого цис-действующегоэлемента регуляции генов эукариот, получившего название усилителя (энхансера) или активатора транскрипции. Энхансеры представлены короткими последовательностями ДНК, состоящими из отдельных элементов (модулей), включающих десятки нуклеотидных пар. Модули могут представлять собой повторяющиеся единицы. Энхансер увеличивает эффективность транскрипции гена в десятки и сотни раз. Впервые энхансеры были обнаружены в составе геномов животных ДНК-содержащих вирусов (5У40 и полиомы), где они обеспечивают активную транскрипцию вирусных генов. Извлеченные из вирусных геномов и включенные в состав искусственных генетических конструкций, они резко усиливали экспрессию ряда клеточных генов. Позднее были обнаружены собственные энхансеры генов эукариотической клетки. Особенность энхансеров состоит в том, что они способны действовать на больших расстояниях (более чем 1000 п. н.) и вне зависимости от ориентации по отношению к направлению транскрипции гена. Оказалось, что энхансеры могут располагаться как на 5 -, так и на З -конце фрагмента ДНК, включающего ген, а также в составе интронов (рис. П2, а). Например, энхансеры были выявлены в районе 400 п. н. перед стартом транскрипции генов инсулина и химо-трипсина крысы. В случае гена алкогольдегидрогеназы дрозофилы энхансер был локализован за 2000 п. н. перед промотором. Энхансеры обнаружены на З ч )ланге гена, кодирующего полипептидный гормон-плацентарный лактоген человека, а также в составе интронов генов иммуноглобулинов и коллагена. [c.203]

Способность ряда энхансеров взаимодействовать со специфическими белками дифференцированной клетки, вероятно, обеспечивает их важное свойство — тканевую специфичность. Тканеспецифический энхансер впервые был выявлен в генах, кодирующих тяжелую полипептидную цепь иммуноглобулинов. При образовании функционирующего гена иммуноглобулина происходит программированная в развитии перекомбинация генетического материала. Один из нескольких сотен геномных сегментов, кодирующих варьирующую часть молекулы антитела (У-гены), в результате последовательных рекомбинационных процессов соединяется с О- и -J-элe,мeн- [c.204]

А, химотрипсин, иммуноглобулины) такие иротяжеаные листы, нередко изогнутые или свернутые, иронизыпают белковую глобулу, составляя основу ее пространств, структуры ( супервторичная структура ). (3-Структура встречается и в фибриллярных белках ((З-кератин). [c.109]

Разнообразие этих рецепторов (и клонов лимфоцитов) огромно число различных рецепторов составляет величину порядка миллиона, так что практически на любой чужеродный биополимер (антиген) находится соответствующий ему рецептор. Зрелые В-лимфоциты, не соприкасавшиеся со своими антигенами (их называют девственными лимфоцитами), не делятся. Однако контакт с антигеном, например с бактериальным полисахаридом, служит сигналом для целой цепи событий. В-Лимфоцит после этого трансформируется в плазматическую клетку и начинает делиться. Общее количество клеток данного клона резко возрастает они начинают продуцировать и секрети-ровать в кровь и лимфу большие количества свойственных этому клону иммуноглобулинов, т. е. антител, специфичных к данному антигену. Антитела реагируют с соответствующими антигенами в растворе, что приводит к их осаждению, и с теми же антигенами на поверхности бактериальной клетки. Таким образом происходят удаление [c.157]

Фирмы IBF и LKB поставляют эти активированные матрицы ( A t-Ultrogel АсА 22 и A t-Magnogel АсА 44 ) в виде суспензий в 1%-ном водном растворе глютаральдегида, что обеспечивает их стабильность. Содержание активных групп — 50—80 мкмоль в 1мл упакованного геля, что позволяет связать с сорбентом 2—4 мг/мл иммуноглобулинов. [c.381]

К насыщенному раствору (NH4)2S04 добавляют 2 н. NaOH и доводят pH до 7,8. При постоянном перемешивании медленно, по каплям к 50 мл сыворотки кролика добавляют 80 мл насыщенного раствора сульфата аммония (pH 7,8) и перемешивают в течение 2—3 ч. Центрифугируют суспензию при комнатной температуре 30 мин при 1500 g. Первый осадок содержит все -у-глобулины, другие глобулины и следы альбумина. Растворяют осадок в дистиллированной воде до начального объема сыворотки (50 мл). Очищают фракцию у-глобули-нов вторым и третьим осаждениями. После третьего осаждения растворяют осадок в боратном буфере (pH 8,45) до конечного объема 20— 25 мл. Удаляют сульфат аммония диализом при 4°С против боратного буфера в течение 2—3 дней со сменой буфера утром и вечером. Полученный после диализа препарат иммуноглобулинов обычно содержит небольшой осадок денатурированного белка и слегка опалесцирует. Центрифугируют при 4° С в течение 30 мин при 1400 s. В полученном препарате проверяют содержание белка и титров антител. Определяют белковый состав методом электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии ДСН (с. 119). Если полученный препарат у-глобулинов не отвечает требованиям эксперимента по стоте, проводят дальнейшую очистку с применением ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе. [c.308]

Рабочие титры антител определяют в реакции ИФА методом шахматного титрования с использованием сэндвич -метода ИФА. Суть метода заключается в использовании подложки , т. е. слоя неспецифически сорбированных иммуноглобулинов, с которыми затем взаимодействует специфический антиген. Этот антиген в дальнейшем выявляется с помощью конъюгатов антител с ферментной меткой. Схема сэндвич -метода представлена на рис. 38. 96-луночный микропланшет заполняют раствором антител в концентрации 10 мкг/мл по 100 мкл в лунку и оставляют на ночь при 4 С. На следующий день после 3-кратного отмывания фосфатным буфером с твином-20 (с. 321) титруют положительный антиген по короткому ряду микропланшета, так же титруют отрицательный антиген . После инкубации в течение 1 ч при 37° С и последующего 3-кратного отмывания в таких же условиях титруют конъюгат антител в буфере по длинному ряду микропланшета. [c.319]

Приготовление иммуносорбента. Br N-активированную сефарозу (I г) обрабатывают, как обычно (с. 297). Полученный гель (3,5 мл) быстро промывают бикарбонатным буфером (pH 8,3) и вносят в раствор антител (20 мг антител в 10 мл бикарбонатного буфера). Инкубируют 2 ч при комнатной температуре, осторожно перемешивая механической мешалкой. Гель промывают в 100 мл того же буфера и переносят для блокирования оставшихся активных групп матрицы в 20 мл глицинового буфера 0,2 М, pH 8. Инкубируют 2 ч при комнатной температуре, постоянно осторожно перемешивая механической мешалкой. На воронке гель отмывают от несвязавшихся иммуноглобулинов и глицина бикарбонатным буфером (pH 8,3), затем ацетатным буфером, pH 4. Цикл повторяют, затем отмывают фосфатным буфером и хранят в нем при 4 С. [c.325]

Сравнительно недавно было показано, что в мРНК, детерминирующей синтез легких цепей иммуноглобулинов, содержится информация как для вариабельной, так и для константной части белковых цепей [191]. Согласно результатам, полученным при генетических исследованиях, процессу транскрипции, вероятно, предшествует объединение областей V и С. Путь дифференцировки клеток, продуцирующих антитела, очень сложен, что, по-видимому, тесно связано со сложностью самого иммунного ответа 192, 193]. Т- и В-клетки (гл. 5, разд. В,4), называемые иногда малыми лимфоцитами, образуются из общего предшественника — стволовых клеток. У птиц В-клетки формируются в специальном органе — фабрициевой сумке и в других частях тада. У млекопитающих, очевидно, В-клеткн образуются главным образом в костном мозге, а Т-клетки — в тимусе (зобной железе), где они находятся под регуляторным влиянием гормона тимозина [194, 195], изменяющего направление развития каким-то еще непонятным обрадом. [c.365]

Молекулярная биология. Структура и биосинтез нуклеиновых кислот (1990) -- [ c.108 , c.109 , c.176 , c.192 , c.202 , c.205 ]

Химический энциклопедический словарь (1983) -- [ c.218 ]

Биохимия Том 3 (1980) -- [ c.85 , c.103 , c.378 , c.381 , c.385 ]

Аминокислоты Пептиды Белки (1985) -- [ c.340 , c.364 , c.424 ]

Проблема белка (1997) -- [ c.523 ]

Принципы структурной организации белков (1982) -- [ c.62 , c.77 , c.109 , c.135 , c.219 , c.220 ]

Молекулярная биология (1990) -- [ c.108 , c.109 , c.176 , c.192 , c.202 , c.205 ]

Биологическая химия Изд.3 (1998) -- [ c.56 , c.93 ]

Принципы структурной организации белков (1982) -- [ c.62 , c.77 , c.109 , c.135 , c.219 , c.220 ]

Биоорганическая химия (1991) -- [ c.428 ]

Биологическая химия (2002) -- [ c.29 ]

Биохимия (2004) -- [ c.0 ]

Большой энциклопедический словарь Химия изд.2 (1998) -- [ c.218 ]

Хроматографические материалы (1978) -- [ c.8 , c.121 ]

Молекулярная биология клетки Том5 (1987) -- [ c.0 ]

Основы биохимии Т 1,2,3 (1985) -- [ c.0 ]

Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков (1974) -- [ c.226 , c.227 , c.264 , c.266 , c.271 , c.273 , c.274 , c.334 ]

Биохимический справочник (1979) -- [ c.11 , c.20 ]

Химия биологически активных природных соединений (1976) -- [ c.90 ]

Биология Том3 Изд3 (2004) -- [ c.175 , c.176 ]

Биохимия человека Т.2 (1993) -- [ c.121 , c.123 , c.320 , c.321 , c.325 ]

Проблема белка (1996) -- [ c.307 , c.308 , c.320 , c.413 ]

Проблема белка Т.3 (1997) -- [ c.523 ]

Биохимия человека Том 2 (1993) -- [ c.121 , c.123 , c.320 , c.321 , c.325 ]

Электрофорез в разделении биологических макромолекул (1982) -- [ c.330 , c.332 ]

Биохимия мембран Эндоцитоз и экзоцитоз (1987) -- [ c.15 , c.32 , c.37 , c.39 , c.41 , c.42 , c.49 , c.54 , c.59 ]

Генетика с основами селекции (1989) -- [ c.433 , c.435 ]

Молекулярная иммунология (1985) -- [ c.54 , c.55 ]

Иммунология Методы исследований (1983) -- [ c.41 ]

Иммунология (0) -- [ c.0 ]

Гены и геномы Т 2 (1998) -- [ c.62 , c.64 , c.121 , c.138 , c.284 , c.285 , c.286 , c.287 , c.288 , c.358 ]

Методы практической биохимии (1978) -- [ c.133 ]

Физическая Биохимия (1980) -- [ c.247 ]

Биологическая химия (2004) -- [ c.0 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология