Хроматография универсальная калибровочная

Особенно важное значение в эксклюзионной хроматографии имеет универсальная калибровочная зависимость, предложенная Бенуа и сотр. [44]. Авторы показали, что разделение гибкоцепных полимеров совершенно различного состава и строения на стирогеле в тетрагидрофуране описывается единой калибровочной кривой в координатах /р-1д([г )]М), где произведение характеристической вязкости на молекулярную массу характеризует гидродинамический объем макромолекул. Было установлено, что эта зависимость справедлива также для глобулярных и жесткоцепных макромолекул. Необходимым условием применимости универсальной калибровки является полное исключение сорбционных взаимодействий полимера с матрицей сорбента. В монографии [3] сформулированы следующие ограничения применения универсальной калибровки. [c.54]

Универсальная калибровочная зависимость в гель-проникающей хроматографии [c.110]

Обычно предполагается, что существует универсальная калибровочная зависимость V = fi (-М [т)]), которая не связана со степенью разветвленности макромолекул. Если хроматограф оснащен проточным вискозиметром [193, с. 230], то экспериментатор измеряет две зависимости С (У) от У и [т)] от V. Используя также универсальную калибровку, имеем [c.228]

Впервые справедливость этого вывода теории была показана Бенуа с сотр. [148] для гибкоцепных полимеров, резко отличающихся пространственной и химической структурами. Они обнаружили, что для 9 типов узко фракционированных полимерных образцов при эксклюзионной хроматографии в тетрагид-рофуране наблюдается общая зависимость удерживаемого объема Уй от логарифма lg [т] ] М (рис. 111.19). Эта зависимость получила название универсальной калибровки. Впоследствии универсальность калибровочного соотношения Бенуа подтвердили многие авторы (см. обзоры в [16, с. 836 25, 28]) для большого набора полимеров и условий, в том числе и для а-спиральных молекул поли-у-бензил-1-глутамата [149, 150], жесткоцепных ароматических полимеров [151], полиолефинов [152]. [c.81]

Гораздо меньшие затраты на аппаратуру требуются для гель-хроматографии в тонком слое (см. гл. П). В этом случае в конце опыта вместо объема выхода необходимо измерить расстояние от стартовой линии до пятна вещества — длину пробега ]56]. При стандартизации результатов хроматографии на бумаге длину пробега относят к пути, пройденному растворителями (определяют величину / /) в тонкослойной гель-хроматографии длину пробега исследуемого вещества относят к пути, пройденному хорошо идентифицированным веществом [72]. Для белков (а только для них тонкослойная гель-хроматография и применялась до настоящего времени) удается таким образом определять молекулярный вес, имея в распоряжении всего несколько микрограммов вещества [56, 72, 73]. В качестве стандартов здесь также используются белки, приведенные в табл. 22. Из фиг..36 видно, что отношение длины пробега ряда белков к пути, пройденному цитохромом с, является линейной функцией от логарифма молекулярного веса. Как показывает опыт, эту калибровочную линию нельзя считать достаточно универсальной, поскольку ее наклон довольно сильно изменяется от одной серии экспериментов к другой. Результаты определения молекулярного веса становятся более точными, если соответствующие стандартные белки наносят на каждую пластинку. Это вполне возможно, так как на пластинку шириной 20 см свободно можно одновременно нанести по меньшей мере 10 образцов. Благодаря несложному оборудованию и небольшим затратам вещества точность определения молекулярного веса этим методом можно повысить. [c.167]

Разрешение полимеров при эксклюзионной хроматографии также существенно зависит от структуры разделяемых макромолекул. В условиях, когда выполняется универсальная калибровка по гидродинамическим объемам v [ц] М, разрешение будет связано с зависимостью v от М. Если пренебречь влиянием качества растворителя, то для глобулярных макромолекул у Л1, для гибкоцепных — у Лi и для жесткоцепных —у т. е. наклон калибровочной кривой для жесткоцепных макромолекул будет почти в два раза больше, чем для гибкоцепных, и в три раза больше, чем для глобулярных, равных М. Различие в наблюдается также для линейных и разветвленных макромолекул [267 ]. Существенное различие в наклоне зависимости V = /(Ig М) для [c.138]

Содержание стирола оценивали спектрометрически по поглощению в ультрафиолетовой области [7]. Микроструктуру бутадиеновых звеньев определяли методом ИКС [10]. Молекулярные веса определяли с помощью гель-проника-ющей хроматографии. В качестве растворителя использовали тетрагидрофуран. Поскольку независимая калибровка по данным рассеяния света была выполнена только для полибутадиена (образец F) и сополимера, полученного при соотношении стирола и бутадиена 25 75, молекулярные веса рассчитывали по универсальной калибровочной кривой, согласно методу, предложенному Бенуа с соавторами [2]. [c.84]

Распределение макромолекул по размерам можрю определить с помощью гель-хроматографии, более известной как гель-проникающая хроматография (ГПХ). Первоначально сщитые гели полистирола использовались в качестве разделительной среды для синтетических полимеров [44, 45], а позже применялись твердые пористые бусинки. Используются детекторы показателя преломления в ультрафиолетовом или инфракрасном свете. Разделение было основано на размере молекул, который эквивалентен (52)3/2, Это допущение позволяет получить универсальную калибровочную кривую [46]. Принимая во внимание уравнение (2.14), имеем [c.48]

Теория растворов полимеров позволяет получить выражение для гидродинамического объема полимерного клубка последний оказывается пропорциональным произведению характеристической вязкости на молекулярный вес. Согласно данным Бенуа с сотр., гидродинамический объем представляет собой основную характеристику размеров макромолекулы, необходимую для получения универсальной калибровочной кривой при хроматографии на проницаемом геле (см. гл. II), при использовании которой зависимости Ig (М [т]]) от элюирующего объема для большого числа разных полимеров описываются одной кривой. [c.249]

Рис. 111.19. Универсальная калибровочная зависимость для полимеров при эксклюзионной хроматографии в тетрагидрофуране на етирогеле 1148].

По-видимому, единственный обоснованный метод исследования МВ белка с помощью гелевой хроматографии заключается в определении элюционных характеристик белков, после превращения их в статистические клубки путем разрыва связей 3—3 и денатурации в концентрированных растворах мочевины (8Л/) или гуанидинхлорида (6М). Этот метод основан на результатах Бенуа [42], показавшего, что существует универсальная линейная калибровочная зависимость, связывающая удерживаемый объем макромолекул с логарифмом произведения МВ на характеристическую вязкость [т]]. Однако подобная зависимость не прослеживается у глобулярных белков, возможно вследствие трудности точного определения у них [т]]. С другой стороны, при переходе к денатурированным белкам, когда пептидные цени находятся в конформации статистического клубка, этот метод становится особенно удобным, поскольку, как это установлено в работе [43], для подобных пептидов существует универсальная линейная зависимость 1д [т1]и lg (МВ). Действительно, в работах [44, 45] показано, что имеет место линейная зависимость удерживаемых объемов денатурированных таким образом белков от lg (МВ). Нами была исследована подобная зависимость для ТСГХ денатурированных в мочевине и гуанидинхлориде ДНС-белков [40]. При этом для предотвращения реокисления полученных нри восстановлении меркантоэтанолом ЗН-грунн последние блокировались с помощью иодуксусной кислоты. [c.153]

Основное внимание было обращено на динамику состава флавонолов володушки золотистой, произрастающей на Алтае, в районе Курайского хребта. Содержание флавонолов определяли методом количественной хроматографии на бумаге. Калибровочные кривые составляли для гликозидов по рутину, для агликонов — по кверцетину. Измерения проводили для гликозидов при 420 для агликонов — при 375 ммк. Использовали систему уксусная кислота — муравьиная кислота — вода (10 Г2 3), проявляли 10%-ным раствором А1С1з. Участки проявленных хроматограмм элюировали этанолом и определяли количество флавонолов, пользуясь универсальным спектрофотометром 8X1-1 (ГДР). [c.182]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология