Липопротеины, разделение

Растворы мономеров и катализаторов готовят на буферном растворе (pH 8,9) и смешивают в стеклянных трубочках для полимеризации. Для разделения липопротеинов сыворотки крови применяют дифференциальный электрофорез, используя три слоя гелей с концентрацией акриламида, повышающейся от верхнего слоя к нижнему. [c.154]

У здорового (А) и больных (Б и В) через 10 ч после еды взята кровь и проведено разделение липопротеинов сыворотки крови методом электрофореза в полиакриламидном геле. Зная, что [c.403]

Эти методы по сравнению с универсальными и играющими очень важную роль в биохимической практике методами аналитического гель-электрофореза имеют ограниченное применение, поэтому их описание будет кратким. Цель анализа конечного продукта, полученного в результате очистки, заключается в том, чтобы выяснить, содержит ли он один или большее число белков, и обнаружить в нем примеси, даже если они присутствуют в очень малых количествах. Гель-электрофорез позволяет выявить примесь какого-то одного компонента, составляющую 1% содержания основного компонента при условии их хорошего разделения. Однако бывают случаи, когда электрофорез не пригоден для исследования препарата. Это особенно относится к липопротеинам и другим связанным с мембранами белкам, которые при электрофорезе ведут себя необычно и нуждаются в определенных детергентах для поддержания их структурной целостности. В этих случаях, может быть, лучше использовать ультрацентрифугирование как основной или по крайней мере дополнительный метод, позволяющий получить информацию о гетерогенности данного препарата. В опытах по скоростной седиментации хорошо разделяются компоненты с сильно различающимися коэффициентами седиментации, однако если примесь по этому параметру сходна с основным компонентом и особенно если ее относительное количество слишком мало, то этот метод не дает надежных сведений о гетерогенности препарата. Метод седиментационного равновесия более пригоден для детектирования небольших количеств примеси по отклонению экспериментальных данных от теоретической прямой зависимости между логарифмом концентрации и квадратом расстояния от седиментирующей частицы до оси вращения. Однако это от- [c.330]

Работа 86. Разделение липопротеинов сыворотки [c.153]

Вильямсон и Аллисон [13] сделали попытку усовершенствовать стадию иммунопреципитации с помощью метода Лорелла [63], заключающегося в проведении электрофореза антигена в гелях агарозы, включающих антитела. Согласно предложенной методике, белки после разделения переносят на полоску фильтровальной бумаги, которую затем помещают на слой агарозы с антителами, и проводят электрофорез. Таким путем в сыворотке мыши удалось обнаружить до 20 компонентов [13, 64 В другом варианте удаляют лишний сефадекс по Хансону [14 а затем осторожно переносят весь гель агарозы с антителами на полоску сефадекса. По такой методике выполнен анализ молекулярновесового распределения а-липопротеина нормальной сыворотки [65], приведенный на рис. 9. [c.275]

Хотя стандартные методики ГЖХ применимы к большинству природных смесей липидов, наибольший прогресс в этой области достигнут в случае анализа липидов первичного экстракта плазмы [713—718] и отдельных классов липопротеинов [714, 719]. Это объясняется удачным распределением компонентов, смеси по их молекулярным массам и их относительным содержанием в смеси. Наиболее успешное разделение липидов первичного экстракта методом ГЖХ было получено на коротких неполярных колонках с силоксаном, первоначально использовавшихся для разделения природных триацилглицеринов [551]. Довольно удобными для такого рода разделений оказались колонки из нержавеющей стали или стеклянные (от 30 до 50 см длиной и внутренним диаметром от 0,2 до 0,3 мм), заполненные 1— 3% метилсилоксана или эквивалентными силиконовыми полимерами для высокотемпературной ГЖХ, нанесенными на внутренний инертный носитель. Колонки предварительно выдерживали в течение 2—3 ч при температуре 350 °С и проверяли их на способность необратимо сорбировать вещества. В зависимости от состава липидов использовали линейный градиент температуры в пределах 175—350 °С (со скоростью нарастания температуры 4—8°С/мин). Метод ГЖХ также широко применяется при анализе смесей нейтральных липидов плазмы [721—723]. [c.208]

Липопротеины подразделяются на 4 основных класса в зависимости от плотности (определяемой с помощью ультрацентрифугирования) и электрофоретической подвижности. Признается следующая номенклатура (исходя из метода разделения ЛП) [c.210]

Определяли содержание фосфора. Фосфор липидов х 25 = р,ц.. 26.1. Разделение липопротеинов плазмы крови мето-фосфолипид в виде фосфатидилхолина (4% фосфора). дом электрофореза. [c.257]

Существует три типа электрофоретических систем электрофорез по Тизелиусу (с подвижной границей) зональный электрофорез (например, в среде с капиллярной структурой) стационарный электрофорез (изоэлектрическое фокусирование, изотахофорез). В медицинской и фармацевтической практике чаще применяется зональный электрофорез на фильтровальной бумаге, пленке из ацетатцел-люлозы, агаровом, агарозном, крахмальном или полиакриламидном гелях. Электрофорез белков сыворотки крови ведут в буферной среде с pH 8,6, когда молекулы белка и липопротеинов заряжаются отрицательно и движутся к аноду. После заверщения электрофоретического разделения электрофореграммы фиксируются и окрашиваются. Затем производят визуальную и денситометрическую оценку разделения белков. Для окраски различных белков на электрофоре-граммах используют специальные красители, часть из которых представлена в табл. 5. [c.44]

Мембранные белки, за немногим исключением, связываются с окружающими их липидами нековалентно. Методами ЭПР с помощью спинмеченных липидов доказано, что такие белки собирают вокруг себя специфические липиды в форме воротника , или ореола. Кроме того, модельные исследования на искусственных липосомах, сформированных из фосфатидилсерина и фосфатидилхолина, показали, что основный белок человеческого миелина (гл. 4) связывается с кислыми и нейтральными липидными молекулами, вызывая тем самым разделение фаз [18]. Аналогичный эффект в модельных экспериментах с искусственными липосомами проявлял и липопротеин миелиновой мембраны [19]. Напротив, никотиновый ацетилхолиновый рецептор из электрического органа Torpedo преимущественно [c.79]

Принцип метода сводится к электрофоретическому разделению на фракции предварительно окрашенных красителем Суданом черным липопротеинов сыворотки. Определение содержания (в %) отдельных фракций является диагностическим тестом при ряде заболеваний, например таких, как диабет, ожирение, атеросклероз, ишемическая болезнь и т. Д. Получаемые при электрофорезе липопротеинограммы специфичны для каждого заболевания. [c.154]

Для зонного электрофореза ацетатцеллюлозную мембрану (САМ) первым использовал Кон [51]. По мнению Кона, преимущества этого носителя — его однородность и строго определенная пористость. САМ содержит пренебрежимо малое число ОН-групп, загрязненность органическими и неорганическими примесями также весьма мала. В тех случаях, когда сильная сорбция может приводить к образованию на бумаге полосок сзади зон (как, например, при электрофорезе биополимеров) важным преимуществом становится пониженная сорбционная активность САМ. В отличие от бумаги САМ позволяет получить хорошее разделение агфракции сывороточного альбумина, а также инсулина, фибриногена, гистонов, лизоцимов, глико- и липопротеинов и нуклеиновых кислот. После электрофореза меченых соединений остаточная радиоактивность между зонами и стартом исключительно мала. Обесцвечивание фона, если обнаружение проводится путем окрашивания и последующего обесцвечивания, происходит достаточно быстро. [c.293]

В настоящее время трудно еще интерпретировать результаты, получаемые при фракционированном осаждении белков плазмы. Мы не можем еще с достаточной уверенностью сказать, существуют ли все эти фракции как таковые в самой плазме крови, а также решить вопрос о возможности их дальнейшего разделения. Всего вероятнее, что белки плазмы находятся в плазме в виде соединений с липидами, у1 леводами, а также друг с другом . Так, например, можно думать, что -глобулины, изоэлектрическая точка которых лежи г около pH 7,0, дают солеобразного тина соединения с альбуминами, изоэлектрическая точка которых находится вблизи pH 4,7. Возможно также, что белковые компоненты липопротеинов и глюкопротеидов плазмы идентичны [c.177]

Для иллюстрации приводится описание метода разделения липопротеинов методом электрофореза (набор Согтау gel LIPO Lp(a) 100). Такой набор служит для проведения анализа 100 образцов сыворотки крови. [c.45]

Чистый жир имеет меньшую плотность, чем вода, следовательно, чем выше соотношение липида и белка в липопротеинах, тем ниже их плотность (табл. 26.2). Это обстоятельство лежит в основе разделения липопротеинов плазмы крови методом ультрацентрифугирования. Скорость всплывания каждого липопротеина в растворе Na l (удельный вес 1,063) может быть выражена в единицах флотации Сведберга (8Г)- Одна единица 8Г равна 10 см/с на [c.256]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология